升麻素抑制MAPK通路調節輔助性T細胞免疫平衡改善小鼠克羅恩病樣結腸炎

摘要：目的 探索升麻素（CIM）對小鼠克羅恩病（CD）樣結腸炎的作用以及可能的機制。方法 30只體質量20～23 g（6～8周齡）的C57BL/6雄性小鼠隨機分為空白對照組、2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）組和CIM組，10只/組。TNBS組使用TNBS灌腸建立CD樣結腸炎模型，CIM組經TNBS灌腸后每日灌胃CIM（12.5 mg/kg）。通過記錄小鼠體質量變化和疾病活動指數（DAI）評分，測量結腸長度，進行HE染色炎癥評分以及檢測腸黏膜中炎癥因子水平評估CIM對小鼠結腸炎的作用；采用免疫熒光及免疫印記檢測小鼠腸屏障損傷；流式細胞術檢測各組小鼠腸系膜淋巴結中輔助性T細胞亞群的比例；通過網絡藥理學預測CIM潛在作用靶點，KEGG富集分析篩選關鍵通路，分子對接驗證CIM與MAPK通路核心蛋白的結合能力；Western blotting驗證MAPK信號通路的改變。結果 CIM干預改善了TNBS誘導的小鼠體質量降低和結腸縮短，同時DAI評分和結腸組織炎癥評分低于TNBS組（Plt;0.05）。ELISA和PCR檢測結果顯示，同TNBS組相比，CIM降低小鼠腸黏膜組織中促炎因子（IFN-γ和IL-17）的水平并促進抗炎因子（IL-4和IL-10）表達（Plt;0.05）。免疫熒光結果顯示，CIM可改善TNBS誘導的小鼠上皮細胞Claudin-1的缺失和移位，以及杯狀細胞的減少（Plt;0.05）；免疫印記數據提示CIM組小鼠結腸黏膜中Claudin-1和ZO-1表達高于TNBS組（Plt;0.05）。流式細胞術檢測結果表明CIM干預后腸系膜淋巴結中Th1和Th17細胞比例下降，而Th2及Treg細胞比例升高（Plt;0.05）。KEGG富集分析發現CIM對腸炎的作用可能與MAPK信號通路相關，分子對接顯示，CIM與MAPK通路核心靶點之間有很好的結合，免疫印記結果顯示p-JNK、p-ERK和p-p38在CIM組的小鼠腸黏膜中表達低于TNBS組（Plt;0.05）。結論 CIM可改善腸屏障損傷從而緩解TNBS誘導的小鼠克羅恩病樣結腸炎，這與其抑制MAPK信號通路的激活調節小鼠腸道Th1/Th2和Th17/Treg平衡有關。……