剪接因子HNRNPH1通過調(diào)控Circ-MYOCD的反向剪接影響心肌肥厚的發(fā)生

摘要：目的 探索Circ-MYOCD的反向剪接機(jī)制及該分子的反向剪接是如何調(diào)控心肌肥厚的發(fā)生的。方法 Sanger 測序和RNase R實(shí)驗驗證Circ-MYOCD的呈環(huán)性和穩(wěn)定性，核質(zhì)分提確定Circ-MYOCD的分布情況。生物信息學(xué)分析及pull-down的質(zhì)譜結(jié)果分析預(yù)測與Circ-MYOCD結(jié)合的RNA結(jié)合蛋白（RBPs）。敲低心肌細(xì)胞中HNRNPH1 和HNRNPL篩選可能影響到Circ-MYOCD反向剪接的RBPs，過表達(dá)HNRNPH1確定影響Circ-MYOCD反向剪接的RBPs。血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導(dǎo)建立大鼠心肌肥大模型，檢測HNRNPH1在肥大心肌細(xì)胞中的表達(dá)情況。敲低和過表達(dá)心肌細(xì)胞中HNRNPH1檢測其對心肌肥厚進(jìn)程的影響。在大鼠心肌肥大細(xì)胞模型中敲低HNRNPH1的表達(dá)，檢測HNRNPH1對 Circ-MYOCD反向剪接的影響及對心肌肥厚進(jìn)程的影響。結(jié)果 Sanger測序結(jié)果顯示，接頭引物可以擴(kuò)增出正確的Circ-MYOCD的序列；RNase R實(shí)驗和核質(zhì)分提實(shí)驗結(jié)果顯示Circ-MYOCD具有穩(wěn)定性且主要分布在細(xì)胞質(zhì)中（Plt;0.001）。生物信息學(xué)分析及Circ-MYOCD的pull-down 的質(zhì)譜結(jié)果分析顯示HNRNPH1 和HNRNPL 是與Circ-MYOCD 結(jié)合的RBPs。敲低和過表達(dá)心肌細(xì)胞中RBPs，檢測Circ-MYOCD與MYOCD的表達(dá)情況，結(jié)果顯示HNRNPH1 影響且抑制Circ-MYOCD的反向剪接（Plt;0.01，Plt;0.05）。AngⅡ誘導(dǎo)建立小鼠心肌肥大模型中，檢測到HNRNPH1的表達(dá)升高（Plt;0.001）。過表達(dá)HNRNPH1可以增加心肌肥厚標(biāo)志物分子ANP、BNP 的表達(dá)（Plt;0.05），敲低的結(jié)果與之相反（Plt;0.05，Plt;0.001）。在肥大的心肌細(xì)胞中敲低HNRNPH1 后，Circ-MYOCD表達(dá)升高（Plt;0.001），MYOCD的表達(dá)降低（Plt;0.01）；檢測心肌肥大相關(guān)分子ANP、BNP的表達(dá)均降低（Plt;0.05，Plt;0.001）。討論Circ-MYOCD的反向剪接受剪接因子HNRNPH1的調(diào)控進(jìn)而影響了心肌肥厚的進(jìn)程。

關(guān)鍵詞：心肌肥厚；反向剪接；環(huán)狀RNA；剪接因子；HNRNPH1

心肌肥厚是心肌細(xì)胞通過增大細(xì)胞體積來增強(qiáng)心肌收縮力、減輕心室壁壓力的一種代償性和適應(yīng)性反應(yīng)，但長期的心肌肥厚可能導(dǎo)致心臟收縮和舒張功能受損，最終引發(fā)心力衰竭 ［1］［2］。……