活絡效靈丹促進斑馬魚尾鰭再生的核心靶點與免疫調控機制

摘要：目的 基于網絡藥理學和體內實驗驗證分析活絡效靈丹促進組織修復的潛在核心靶點與免疫調控機制。方法 基于網絡藥理學篩選活絡效靈丹的活性成分以及疾病作用靶點，利用STRING數據庫構建PPI篩選核心蛋白，并進行GO、KEGG富集分析以及分子對接預測活絡效靈丹的藥理機制。體內實驗：通過斑馬魚藥毒實驗評估活絡效靈丹的毒性作用，并將3 dpf幼魚尾鰭切除95%建立斑馬魚尾鰭截斷模型，設置模型組（胚胎水）、活絡效靈丹低、中、高濃度干預組（10、20、40 μg/mL），通過再生面積觀察和qPCR檢測評估活絡效靈丹促進組織再生的藥效及核心靶點。利用巨噬細胞和中性粒細胞雙熒光標記的轉基因斑馬魚，觀察免疫細胞在不同修復階段的遷移情況，qPCR檢測組織再生不同時間段巨噬細胞的分型。結果 篩選出活絡效靈丹中活性成分與組織修復共有149個交集靶點，其中核心靶點有AKT1、IL-6、TNF-α、EGFR、STAT3，結合GO和KEGG富集分析提示活絡效靈丹主要通過JAK-STAT 信號通路、黏附連接、對細胞遷移的正向調控等發揮作用。藥毒實驗顯示，藥物安全濃度為40 μg/mL，致死濃度為320 μg/mL，超過80 μg/mL活絡效靈丹可導致斑馬魚幼魚出現腎臟、心包水腫及血管發育不良。體內實驗中，與模型組相比，活絡效靈丹藥物干預組斑馬魚尾鰭修復面積增高（Plt;0.05），同時顯著抑制IL-6、TNF-α，激活AKT1、EGFR、STAT3基因的表達（Plt;0.05）?；罱j效靈丹可以調節再生部位中性粒細胞和巨噬細胞的聚集，并在組織再生不同時間段調節M1和M2 型巨噬細胞的極化（Plt;0.05）。結論 在斑馬魚尾鰭再生過程中，活絡效靈丹通過多成分、多靶點和多通路機制顯著促進組織修復?！?br>