抵當(dāng)湯含藥血清通過(guò)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路增強(qiáng)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞自噬

摘要：目的 觀察抵當(dāng)湯含藥血清通過(guò)磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白mTOR信號(hào)通路對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞（RGECs）自噬的影響，以期為糖尿病腎病（DN）的治療提供新的思路。方法 連續(xù)過(guò)篩法結(jié)合膠原酶法提取與培養(yǎng)原代RGECs，使用第Ⅷ因子免疫熒光法對(duì)其鑒定。通過(guò)高糖培養(yǎng)基誘導(dǎo)RGECs模擬糖尿病環(huán)境下的細(xì)胞狀態(tài)。將細(xì)胞分為5 組：空白組（正常培養(yǎng)的RGECs）、高糖模型組（使用高糖培養(yǎng)基誘導(dǎo)的RGECs）、抵當(dāng)湯組（在高糖誘導(dǎo)基礎(chǔ)上加入抵當(dāng)湯含藥血清進(jìn)行干預(yù)的RGECs）、3-MA組（在高糖誘導(dǎo)基礎(chǔ)上加入自噬抑制劑3-MA進(jìn)行干預(yù)的RGECs）和抵當(dāng)湯+3-MA干預(yù)組（在高糖誘導(dǎo)基礎(chǔ)上同時(shí)加入抵當(dāng)湯含藥血清和自噬抑制劑3-MA進(jìn)行干預(yù)的RGECs）。CCK-8法篩選最佳造模條件和含藥血清干預(yù)濃度，利用單丹磺酰卡巴胺（MDC）法觀察自噬囊泡熒光強(qiáng)度，RT-qPCR法檢測(cè)Beclin-1、p62mRNA表達(dá)，Western blotting 法檢測(cè)p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Beclin-1、p62、LC3B蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與正常組比較，高糖模型組RGECs自噬熒光信號(hào)減少，熒光強(qiáng)度降低，Beclin-1 mRNA表達(dá)減少，p62 mRNA表達(dá)升高，Beclin-1蛋白表達(dá)和LC3Ⅱ/Ⅰ水平下降，P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表達(dá)上升（Plt;0.01）；與高糖模型組比較，抵當(dāng)湯組RGECs自噬熒光面積與強(qiáng)度明顯升高，Beclin-1 mRNA表達(dá)上升，p62 mRNA表達(dá)下降，Beclin-1蛋白表達(dá)上升，p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表達(dá)下降（Plt;0.01）。結(jié)論 抵當(dāng)湯含藥血清可通過(guò)部分調(diào)節(jié) PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，增強(qiáng) RGECs 的自噬，為糖尿病腎病的治療提供新策略。

關(guān)鍵詞：糖尿病腎病；抵當(dāng)湯；自噬；PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路；腎小球內(nèi)皮細(xì)胞

糖尿病腎病（DN）作為糖尿病（DM）最為常見且嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥之一，是終末期腎衰（ESRD）的主要誘因［1］。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞（GECs）對(duì)維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障（GFB）功能至關(guān)重要［2］。……