成纖維生長因子19及其受體4在不同分子分型乳腺癌中的表達及臨床意義

周毅，蔡仕彬，虞凱杰，周佳慧，劉鵬鵬，陳述政

得益于不同分子分型為基礎的乳腺癌（Luminal A型、Luminal B型、Her-2過表達型及三陰性）個體化治療，近年來乳腺癌的預后取得了長足的進步，但其發生發展、浸潤及轉移的生物學特性及分子機制仍未完全明確，導致乳腺癌的總生存率仍不容樂觀[1]。成纖維生長因子19（FGF19）及其受體4（FGFR4）結合的信號通路失調可抑制腫瘤細胞凋亡并刺激增殖，研究表明其在乳腺癌的發生、發展過程中發揮著作用[2]，但其在不同分子分型乳腺癌間的表達是否有差異目前鮮有報道。本研究采用免疫組織化學技術法檢測不同分型乳腺癌間的FGF19、FGFR4的表達差異，旨在為以分子分型為基礎的個體化精準治療提供新的思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江省麗水市中心醫院乳腺外科2016年1月至2019年1月經手術治療的乳腺癌患者石蠟標本，隨機抽取不同分子分型乳腺癌標本各40例，共160例。患者均為女性，年齡30～61歲，中位年齡42歲。腫瘤直徑1.2～5.5 cm，中位直徑3.1 cm。術前均未行放、化療，病理診斷均為浸潤性癌，分子分型根據指南分為：Luminal A型（ER/PR陽性且PR高表達，Her-2陰性，Ki-67＜20%）、Luminal B型（ER/PR陽性且Ki-67≥20%或PR低表達，Her-2陽性或陰性）、Her-2過表達型（ER、PR陰性，Her-2陽性）及三陰性（ER、PR、Her-2均陰性）。TNM分期I期43例，II期86例，III期31例。

1.2 方法 所用試劑一抗為兔抗人FGF19、FGFR4多克隆抗體（購自北京博奧森生物技術有限公司），二步法免疫組化檢測試劑盒及DAB顯色試劑盒（購自北京中杉金橋生物技術有限公司）。取石蠟標本連續切取組織片，切片厚度為4 m，置于60℃電熱恒溫箱中烘烤過夜；脫蠟、水化切片，3%雙氧水孵育15 min后蒸餾水浸泡3 min，再以0.01%PBS浸泡清洗2 min，3次后行抗原修復；再滴加兔抗人一抗，放于保濕盒中置于37℃烤箱之中孵育過夜，然后PBS緩沖液清洗5 min共3次；在一抗基礎上滴加二抗并置于烤箱孵育25 min，再以PBS緩沖液清洗5 min共3次；滴加DAB顯色劑染色，鏡下觀察顯色反應并適時用自來水中止反應，以蘇木素復染并封片。PBS緩沖液代替一抗體作為陰性對照，已知陽性切片作為陽性對照。

1.3 結果判讀 由兩2名高年資病理科醫師采用雙盲法判讀，按染色強度及陽性細胞數計算評分。染色強度：不著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別為0分、1分、2分、3分。陽性細胞數：0%、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%陽性細胞數記分別記0分、1分、2分、3分、4分。兩者相加分值積分：0分為（－），1～3分為（+），4～5分為（2+），6～7分（3+），積分＞3分為陽性，≤3分為陰性，隨機取5個不同高倍鏡視野求平均積分。

1.4 統計方法 采用SPSS 21.0軟件進行統計學分析，計數資料采用2檢驗，＜0.05為差異有統計學意義；組間兩兩比較采用bonferroni校正的檢驗水準’=/6=0.008＜0.008為差異有統計學意義。

2 結果

不同分子分型乳腺癌患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤組織學分級、淋巴結轉及TNM分期差異均無統計學意義（均＞0.05），見表1。FGF19在Luminal A、Luminal B、Her-2過表達型及三陰性乳腺癌的陽性表達率分別為52.5%（21/40）、50.0%（20/40）、82.5%（33/40）及80%（34/40），FGFR4陽性表達率分別為45.0%（18/40）、42.5%（17/40）、75.0%（30/40）及 80.0%（32/40）。FGF19、FGFR4在Luminal A型、Luminal B型間的表達差異均無統計學意義（均＞0.05），在Her-2過表達型、三陰性乳腺癌間的表達差異均無統計學意義（均＞0.05），在Her-2過表達型、三陰性乳腺癌間的表達高于Luminal A型、Luminal B型（均＜0.008），見表2。

表1 不同分子分型乳腺癌臨床病理特征 例（%）

表2 不同分子分型乳腺癌組織中FGF19、FGFR4表達 例（%）

3 討論

目前，以ER、PR、Her-2及Ki-67為基礎的乳腺癌分子分型得到了大多數專家的共識[3]，同時對各型乳腺癌的具體治療亦給出了詳細的個體化指導。自此之后以分子分型為基礎的個體化治療使得乳腺癌的預后得到了極大的改善。然而在患者預后得到改善的同時，臨床實踐中發現部分相同分子分型的乳腺癌即使經歷相同的治療方案，預后也截然不同，由于乳腺癌為異質性較高的疾病，臨床實踐僅以ER、PR、Her-2及Ki-67作為分型的方法仍不夠完善。而目前乳腺癌的治療正從個體化醫療向精準醫療轉變，有些分子類型需更多的基因、蛋白表達譜來確認新的治療靶點從而實現精準醫療。

FGF19是一種代謝性調節基因，FGFR4是一類分布在多種細胞上穿膜的酪氨酸激酶受體，在胚胎和組織修復時嚴格表達，出生后表達量下降，且主要分布于腎上腺和肺組織[4-5]。生理狀態下，FGF19與其特異性受體FGFR4結合活化及加強細胞內的信號通路，發揮其調節細胞增殖、分化和轉移的功能[6]。而FGF19、FGFR4與細胞基質黏附力和血管生成相關的信號級聯反應有關，并且可促進細胞膜的邊緣波動而增加細胞的運動能力，該信號通路的失調可抑制腫瘤細胞凋亡并刺激其增值，導致癌癥的發生發展、增殖、存活及轉移，提示FGF19/FGFR4軸是潛在的治療靶點[7-8]。Zhao等[9]研究發現FGF19與FGFR4結合后具有促進乳腺癌細胞增殖和侵襲的能力，最終推動乳腺癌的發生及轉移，抑制FGF19可有效減少乳腺癌細胞的生長和轉移。同時有研究發現FGFR4基因多態性與Luminal型乳腺癌的臨床病理特征無相關性，FGFR4中某些基因型與Her-2過表達情況一致[10-11]。Tiong等[2]發現FGF19/FGFR4可激活細胞自分泌信號并介導基底細胞樣乳腺癌細胞的增殖分化并提示抑制這種激活信號通路可顯著降低乳腺癌細胞的增殖分化并降低其侵襲性。而基底細胞樣乳腺癌與三陰性乳腺癌兩者有85%的重疊，提示FGF19與FGFR4在三陰性乳腺癌中存在高表達。而本次研究結果亦顯示FGF19及FGFR4在Her-2過表達型及三陰性乳腺癌均存在高表達，且表達量均高于Luminal A與Luminal B型乳腺癌，可能與Her-2過表達型及三陰性乳腺癌較Luminal型乳腺癌生長更迅速，侵襲性更強，更易出現淋巴結及內臟轉移的生物學特性有關，且與上述研究提示FGF19/FGFR4軸增強乳腺癌侵襲性的結果相符。此外，Her-2過表達型及三陰性乳腺癌有許多潛在的分子亞型，不同亞型間的預后亦不同，但大多數預后較差、侵襲性高，FGF19/FGFR4在此兩種類型中高表達亦提示可作為侵襲性高乳腺癌的預后指標之一，抑制其表達有望成為侵襲性乳腺癌新的治療途徑，但其在不同分子分型乳腺癌中表達異常的機制目前尚未研究清晰，有待后續更大樣本量及更近一步的研究明確。

綜上所述，FGF19及FGFR4在Her-2過表達型及三陰性乳腺癌中表達高，提示與該類乳腺癌的侵襲性高、預后差相關，有望作為評價此類乳腺癌預后的指標之一，可能為后續更加細化、更加精確的分型建立良好的基礎，為乳腺癌個體化精準治療提供新的思路。