柴胡加龍骨牡蠣湯對難治性癲癇大鼠神經元損傷的影響及機制

中圖分類號 R285.5；R742.1 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2025）06-0692-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.06.09

摘要 目的 探討柴胡加龍骨牡蠣湯對難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷的影響及潛在作用機制。方法 采用側腦室注射海人藻酸建立難治性癲癇大鼠模型，將難治性癲癇大鼠隨機分為模型組、塞來昔布組（陽性對照）、柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組、柴胡加龍骨牡蠣湯+環氧合酶-2（COX-2）過表達組，每組12 只；另取12 只大鼠為假手術組（側腦室注射生理鹽水）。各組給予相應的藥物/生理鹽水8 周后，采用Racine 分級標準評估大鼠癲癇發作行為學，觀察海馬組織CA3 區病理學變化和細胞凋亡情況；采用酶聯免疫吸附測定法檢測海馬組織COX-2、前列腺素E2（PGE2）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平；采用比色法檢測海馬組織丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；分別采用實時熒光定量聚合酶鏈反應和Western blot 法檢測海馬組織COX-2、P糖蛋白（P-gp）mRNA和蛋白的表達。結果 假手術組大鼠無癲癇發作；與假手術組比較，模型組大鼠癲癇Racine 分級，海馬組織細胞凋亡率，COX-2、PGE2、TNF-α水平和MDA含量以及COX-2、P-gp 的mRNA和蛋白相對表達水平均顯著升高，SOD活性顯著降低（P＜0.05），海馬CA3 區神經元出現明顯損傷；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠癲癇Racine 分級，海馬組織細胞凋亡率，COX-2、PGE2、TNF-α水平和MDA含量以及COX-2、P-gp 的mRNA和蛋白相對表達水平均顯著降低，SOD活性均顯著升高（P＜0.05），海馬CA3 區神經元損傷減輕；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠上述指標的改善被顯著逆轉（P＜0.05），海馬組織CA3 區神經元損傷加重。結論 柴胡加龍骨牡蠣湯可能通過抑制COX-2/PGE2 信號通路的激活，抑制炎癥和氧化應激，從而減輕難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷。

關鍵詞 難治性癲癇；柴胡加龍骨牡蠣湯；神經元損傷；環氧合酶-2/前列腺素E2 信號通路

癲癇是一種常見的神經系統疾病，是多種原因導致的腦部神經元陣發性異常放電。癲癇患者大多數可通過常規藥物治療得到有效控制，但仍有近1/3 的癲癇患者對抗癲癇藥物不敏感，發展成為難治性癲癇，使治療難度增加[1]。神經炎癥是癲癇發作后腦組織病理改變的主要原因[2]。研究表明，癲癇的腦內炎癥反應與環氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）的表達增加及前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）水平升高密切相關。COX-2作為前列腺素（prostaglandin，PG）合成的限速酶，可在癲癇發作時被激活，進而誘發氧化應激反應，并將花生四烯酸轉化為PG 等有害物質，從而進一步加劇腦內炎癥反應和神經元損傷。多項研究顯示，COX-2 已成為治療癲癇的潛在藥物靶點之一[3―4]。

柴胡加龍骨牡蠣湯出自《傷寒論》?，F代藥理學研究顯示，柴胡加龍骨牡蠣湯可抑制戊四氮誘導的癲癇小鼠海馬星形膠質細胞內COX-2/PGE2 炎癥反應通路，從而發揮抗癲癇作用[5]。然而，該方對難治性癲癇海馬神經元損傷的影響尚不清楚。為此，本研究采用海人藻酸誘導難治性癲癇大鼠模型，探討柴胡加龍骨牡蠣湯對模型大鼠神經元損傷的影響，并基于COX-2/PGE2 信號通路分析其潛在的作用機制，以期為柴胡加龍骨牡蠣湯治療難治性癲癇提供理論依據。

1 材料

1.1 主要儀器

68001型動物腦立體定位儀購自深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司；BX61型電動顯微鏡購自日本Olympus公司；MultiskanTM FC 型酶標儀購自美國Thermo FisherScientific 公司；LightCycler? 480 Ⅱ型實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-qPCR）儀購自瑞士Roche公司。

1.2 主要藥品與試劑

柴胡加龍骨牡蠣湯（柴胡12 g、龍骨4.5 g、黃芩4.5 g、生姜4.5 g、鉛丹4.5 g、人參4.5 g、桂枝4.5 g、茯苓4.5 g、牡蠣4.5 g、半夏6 g、大黃6 g、大棗6 枚）由本院中藥制劑中心以水煮醇提法制備，質量濃度為1 g/mL（以生藥量計）。COX-2 抑制劑塞來昔布對照品（純度99.09%，批號HY-14398）購自美國MCE公司；COX-2 過表達慢病毒載體pcDNA3.1-COX-2（正向序列為5′-GGGGTACCGCCACCATGCTCTTCCGAGCTGTG-3′，反向序列為5′-CCGCTCGAGTTACAGCTCAGTTGAACGCC-3′）及其對照慢病毒空載體pcDNA3.1-NC（序列為5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′）均由上海吉凱基因醫學科技股份有限公司設計、合成；引物序列由寶生物工程（大連）有限公司設計、合成；海人藻酸對照品（純度≥99%，批號K0250）購自美國Sigma-Aldrich 公司；大鼠COX-2、PGE2、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（貨號分別為ml058808、ml003036、ml002859）均購自上海酶聯生物科技有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、TUNEL細胞凋亡試劑盒（貨號分別為G1120、T2196）均購自北京索萊寶科技有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒（貨號分別為A001-3-2、A003-1-2）均購自南京建成生物工程研究所；兔源COX-2、P 糖蛋白（P-glycoprotein，Pgp）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體及辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）抗體（批號分別為ab179800、ab170904、ab9485、ab205718）均購自英國Abcam 公司；iScript cDNA 合成試劑盒（ 批號1708890）購自美國Bio-Rad公司。

1.3 實驗動物

102 只雄性Wistar 大鼠，SPF 級，7～8 周齡，體重220～240 g，購自華中科技大學動物實驗中心，生產許可證號為SCXK（鄂）2021-0009。大鼠飼養于溫度（22±2）℃、相對濕度為（55±5）%、每12 h光/暗循環的環境中，自由進食和飲水。本研究獲得武漢華聯科生物技術有限公司動物倫理委員會批準（批件號為HLK-202406546）。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

實驗分為造模組（n＝90）和假手術組（n＝12）。造模組采用側腦室注射海人藻酸的方法建立癲癇大鼠模型[6]：采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠后，將其頭部固定在腦立體定位儀上，局部備皮、消毒后，正中切開頭部皮膚，暴露顱骨和前囟，參考《大鼠腦立體定位圖譜》[7]進行側腦室定位，以顱骨鉆鉆孔，使用微量注射器在硬腦膜下3.8 mm處下針，向右側腦室內緩慢注射3 μL 海人藻酸溶液（0.5 μg/μL，以生理鹽水為溶劑，注射速度為1μL/min），注射完畢后留針5 min。向假手術組大鼠側腦室注射0.9% 生理鹽水，其余操作同前。造模后按照Racine 分級標準[8]評定大鼠的癲癇發作級別，若造模后2 h 內出現Ⅳ級以上發作表示癲癇大鼠造模成功。為降低大鼠死亡率，造模組大鼠在造模2 h 后通過腹腔注射地西泮（10 mg/kg，以生理鹽水為溶劑）終止癲癇持續狀態。最終，造模組有80 只大鼠在造模2 h 內出現Ⅳ級以上發作，造模成功率為88.89%。將造模成功的大鼠于每天同一時間給予卡馬西平125 mg/kg（以生理鹽水為溶劑）灌胃，每天1 次，給藥28 d 后連續7 d 觀察大鼠癲癇發作時的腦電圖。若大鼠出現Ⅰ級及以上癲癇發作且腦電圖異常（頻率＞20 Hz或波幅＞80 μV），即表示難治性癲癇大鼠造模成功[8]。在篩選過程中，10 只大鼠死亡，8只大鼠造模失敗，最終獲得62 只難治性癲癇大鼠。

取60 只難治性癲癇大鼠隨機分為模型組、塞來昔布組（陽性對照）、柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組、柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組，每組12 只。塞來昔布組和柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠分別于每天同一時間灌胃20 mg/kg 塞來昔布（以生理鹽水為溶劑）[9]或12 g/kg 柴胡加龍骨牡蠣湯1 次；柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組和柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠每天灌胃12 g/kg 柴胡加龍骨牡蠣湯1 次，并分別通過尾靜脈注射慢病毒空載體或COX-2 過表達慢病毒載體200 μL（病毒滴度均為5.0×108 TU/mL），每周1 次；假手術組和模型組大鼠則給予灌胃+尾靜脈注射0.9% 生理鹽水。所有大鼠均連續給藥/生理鹽水8 周。

2.2 大鼠癲癇發作行為學觀察

末次給藥結束后，根據Racine 分級標準[8]評估各組大鼠癲癇發作行為學，具體標準為：0 級，癲癇未發作；1級，面部肌肉抽搐；2 級，頸部肌肉抽搐；3 級，單側前肢陣攣、抽搐；4 級，雙側前肢陣攣、抽搐、身體直立；5 級，全身強直陣攣、雙側后肢和身體直立、倒地。

2.3 大鼠海馬組織CA3 區病理形態學變化觀察

Racine 分級結束后，將大鼠斷頭并立即將腦組織取出置于冰板上，迅速剖出海馬體，每組隨機選取6 只大鼠的海馬組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片（5 μm），進行HE染色，使用光學顯微鏡觀察海馬組織CA3 區病理學變化并拍照。

2.4 大鼠海馬組織細胞凋亡檢測

取“2.3”項下制備的海馬組織石蠟切片，進行脫蠟、水化后，使用TUNEL反應混合液進行孵育和染色處理，每組隨機選擇5 個視野在光學顯微鏡下統計TUNEL陽性細胞（呈綠色）數量和細胞總數，計算細胞凋亡率。細胞凋亡率（%）＝TUNEL陽性細胞數/視野總細胞數×100%。

2.5 大鼠海馬組織COX-2、PGE2、TNF-α 水平檢測

采用ELISA 法檢測。每組取“2.3”項下剩余6 只大鼠的海馬組織，分成三部分，其中兩部分組織凍存，剩余一部分稱重后，使用組織勻漿器在冰上勻漿，并在4 ℃下以2 500×g離心15 min。收集上清液并儲存在－80 ℃冰箱中，采用BCA法檢測總蛋白濃度后，檢測大鼠海馬組織COX-2、PGE2、TNF-α水平。

2.6 大鼠海馬組織MDA含量和SOD活性檢測

采用比色法檢測。從冰箱中取出“2.5”項下大鼠海馬組織勻漿上清液，按照試劑盒說明書方法檢測MDA含量和SOD活性。

2.7 大鼠海馬組織COX-2、P-gp蛋白表達檢測

采用Western blot法檢測。取“2.5”項下部分海馬組織于勻漿管中，加入RIPA裂解液研磨離心（4 ℃、2 500×g、15 min），取上清，采用BCA 法測定上清液中的蛋白濃度。采用10% 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，用PVDF 膜轉移分離的蛋白。將膜用5% 脫脂奶粉封閉2 h 后，向膜中加入COX-2（稀釋比例1∶1 500）、P-gp（稀釋比例1∶1 000）和GAPDH（稀釋比例1∶4 000）抗體，4 ℃下孵育過夜；再加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG 二抗（稀釋比例1∶4 000）。蛋白條帶使用ECL顯影，并使用Image J 軟件進行定量分析，以目標蛋白與內參蛋白（GAPDH）條帶灰度值的比值表示目標蛋白的相對表達量。上述實驗重復3次。

2.8 大鼠海馬組織COX-2、P-gp mRNA表達檢測

采用RT-qPCR 法檢測。取“2.5”項下部分海馬組織，采用TRIzol 試劑提取總RNA，并用NanoDrop法測定其濃度和純度。之后，使用cDNA合成試劑盒合成第一鏈cDNA，再在RT-qPCR 儀上進行聚合酶鏈反應。反應體系：SYBR Green Master Mix 10 μL，正反向引物各0.4μL，cDNA 5 μL，無菌超純水4.2 μL。擴增條件：94 ℃預變性2 min；94 ℃變性30 s，50 ℃退火30 s，72 ℃延伸1min，共28 個循環。使用2－ΔΔCt計算mRNA的相對表達水平。COX-2 正向引物為5′-CTGTATCCCGCCCTGCTGGTG-3′，反向引物為5′-ACTTGCGTTGATGGTGGCTGTCTT-3′，產物長度為211 kb；P-gp 正向引物為5′-AACACCCTGGTTGGTGAGAG-3′，反向引物為5′-CACCATCAAAACCAGCAATG-3′，產物長度為185 kb；GAPDH正向引物為5′-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3′，反向引物為5′-TTTAATGTCACGCACGATTTC-3′，產物長度為112 kb。

2.9 統計學處理

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析。滿足正態分布的計量資料以x±s 表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗。檢驗水準α＝0.05。

3 結果

3.1 各組大鼠癲癇發作行為學比較

假手術組、模型組、塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組、柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠癲癇Racine 分級分別為0、（4.41±0.45）、（2.18±0.27）、（2.23±0.30）、（2.20±0.29）、（3.96±0.38）級。與假手術組比較，模型組大鼠癲癇Racine 分級顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠癲癇Racine 分級均顯著降低（P＜0.05）；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠癲癇Racine分級顯著升高（P＜0.05）。

3.2 各組大鼠海馬組織CA3區病理形態學比較

假手術組大鼠海馬神經元結構完整，排列整齊；與假手術組比較，模型組可見大鼠海馬神經元排列疏松，細胞間隙增大，部分細胞壞死，出現核固縮，胞質空泡樣變性；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠神經元排列較整齊，輪廓較清晰，胞質空泡化程度明顯減輕；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠神經元排列疏松，部分核固縮，胞質空泡化嚴重。結果見圖1。

3.3 各組大鼠海馬組織細胞凋亡情況比較

假手術組、模型組、塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組、柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2過表達組大鼠海馬組織細胞凋亡率分別為（5.30±1.09）%、（34.21±2.14）%、（12.87±1.55）%、（13.02±1.62）%、（12.94±1.58）%、（26.10±1.97）%。與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織細胞凋亡率顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠海馬組織細胞凋亡率均顯著降低（P＜0.05）；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠海馬組織細胞凋亡率顯著升高（P＜0.05）。結果見圖2。

3.4 各組大鼠海馬組織COX-2、PGE2、TNF-α水平比較

與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織COX-2、PGE2、TNF-α水平均顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠海馬組織上述指標水平均顯著降低（P＜0.05）；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠海馬組織上述指標水平均顯著升高（P＜0.05）。結果見表1。

3.5 各組大鼠海馬組織MDA含量和SOD活性比較

模型組大鼠海馬組織MDA含量顯著高于假手術組，SOD活性顯著低于假手術組（P＜0.05）；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠海馬組織MDA 含量均顯著降低，SOD 活性均顯著升高（P＜0.05）；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠海馬組織MDA 含量顯著升高，SOD 活性顯著降低（P＜0.05）。結果見表2。

3.6 各組大鼠海馬組織COX-2、P-gp 蛋白和mRNA表達比較

與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織COX-2、Pgp蛋白和mRNA相對表達水平均顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，塞來昔布組、柴胡加龍骨牡蠣湯組大鼠海馬組織COX-2、P-gp 蛋白和mRNA相對表達水平均顯著降低（P＜0.05）；與柴胡加龍骨牡蠣湯組、柴胡加龍骨牡蠣湯+空載組比較，柴胡加龍骨牡蠣湯+COX-2 過表達組大鼠海馬組織COX-2、P-gp 蛋白和mRNA相對表達水平均顯著升高（P＜0.05）。結果表3、見圖3。

4 討論

一般認為，患者經過適當的藥物治療（包括單藥治療和聯合用藥）后，仍無法有效控制癲癇發作，且持續時間較長（如2 年以上），可診斷為難治性癲癇，其治療除藥物治療外，還可考慮手術、神經刺激等方式，但風險較高[10]。中醫藥在難治性癲癇的治療中可能具有潛在優勢。

神經元損傷、退化和細胞凋亡是癲癇持續的主要表現，可導致認知障礙。癲癇發作時，神經元會經歷異常的電活動，導致神經元細胞膜通透性改變和能量代謝障礙，加劇神經元損傷和死亡；海馬神經元損傷后，還可能引發炎癥和氧化應激反應，釋放大量的炎癥因子和氧化應激產物，進一步損傷神經元并促進癲癇的發生和發展[11―12]。COX-2 可通過生成PGE2，介導大量炎癥因子（如TNF-α）的產生，同時產生大量的自由基（如超氧陰離子、過氧化氫等），進而發生一系列炎癥和氧化應激反應[12]。海人藻酸模型能較好地模擬多種癲癇發作類型，且海人藻酸引起的病理生理改變與人類難治性癲癇的臨床表現和病理生理過程相似，故海人藻酸誘導的大鼠難治性癲癇模型是研究人類難治性癲癇的理想模型[13]。研究顯示，海人藻酸誘發癲癇后，大鼠腦內COX-2 表達和PGE2 水平升高，并促進海馬CA3 區神經元死亡[14]。P-gp 是一種多藥轉運蛋白，廣泛分布于血腦屏障中，其主要功能是通過三磷酸腺苷依賴的泵運機制，將多種外來物質（包括藥物）從細胞內主動轉運到細胞外，從而保護細胞免受這些物質的損害。然而，在難治性癲癇中，P-gp 的這種功能卻可能導致抗癲癇藥物被泵出作用靶位，無法有效作用于病灶區，從而導致患者產生耐藥性[15]。研究表明，在難治性癲癇模型大鼠海馬組織中Pgp呈高表達，這可能是導致難治性癲癇患者耐藥的重要原因之一[15]。塞來昔布是一種非甾體抗炎藥，有研究證實，塞來昔布能通過降低COX-2 活性來抑制炎癥反應和氧化應激，延緩癲癇大鼠海馬的結構變化和海馬神經元的缺失，減少癲癇發作[9]。因此，本研究選擇塞來昔布作為陽性對照。本研究結果顯示，在海人藻酸誘導的大鼠難治性癲癇模型中，海馬組織細胞凋亡率、COX-2、PGE2、TNF-α水平和MDA含量以及COX-2、P-gp 表達均顯著升高，SOD活性顯著降低，與上述研究結果一致，表明海人藻酸可誘導大鼠海馬組織發生細胞凋亡、炎癥和氧化應激反應，并產生耐藥性，與難治性癲癇的病理特征一致，提示難治性癲癇大鼠模型復制成功；而柴胡加龍骨牡蠣湯可顯著降低難治性癲癇大鼠模型海馬組織細胞凋亡率、COX-2、PGE2、TNF-α水平和MDA含量以及COX-2、P-gp 表達，升高SOD 活性，與陽性對照藥塞來昔布的作用基本一致。以上結果表明，柴胡加龍骨牡蠣湯可抑制炎癥和氧化應激反應，減輕難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷。

COX-2 為炎癥反應的關鍵酶，是大腦神經炎癥和氧化應激的誘發因素。據報道，COX-2/PGE2 信號通路的激活可導致戊四氮誘導的癲癇小鼠海馬神經元損傷及認知障礙，而塞來昔布可顯著減少海馬神經炎癥和神經元損傷，其作用可能與對COX-2 的抑制有關[16]。此外，抑制COX-2 可阻斷谷氨酸誘導的離體大鼠腦毛細血管中P-gp 的表達和轉運功能的增強以及癲癇大鼠體內腦毛細血管中癲癇發作引起的P-gp 表達上調[17]。另有研究顯示，慢性癲癇大鼠腦內P-gp 表達的增強與抗癲癇藥物苯妥英腦滲透的顯著減少有關，COX-2 抑制劑可降低海馬旁回和腹側海馬中P-gp 表達，促進苯妥英的腦遞送[18]。本研究中，塞來昔布既是難治性癲癇的陽性藥物，也是COX-2 抑制劑，實驗結果顯示，柴胡加龍骨牡蠣湯對難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷的改善作用與塞來昔布一致，說明柴胡加龍骨牡蠣湯可能通過下調COX-2/PGE2 信號通路改善難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷。進一步采用慢病毒轉染過表達COX-2 進行驗證的結果顯示，過表達COX-2 可減弱柴胡加龍骨牡蠣湯對難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷的改善作用。以上提示，柴胡加龍骨牡蠣湯能減輕難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷，其作用機制可能是通過抑制COX-2/PGE2 信號通路的激活來實現的。

綜上所述，柴胡加龍骨牡蠣湯可能通過抑制COX-2/PGE2 信號通路的激活，抑制炎癥和氧化應激，減輕難治性癲癇大鼠海馬神經元損傷。未來可對難治性癲癇大鼠的認知功能進行檢測，并結合體外細胞實驗，深入分析柴胡加龍骨牡蠣湯治療難治性癲癇的作用機制。

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（收稿日期：2024-09-19 修回日期：2025-01-15）

（編輯：舒安琴）