巨噬細(xì)胞在艱難梭菌感染中的研究進(jìn)展

摘要：艱難梭菌是一種革蘭陽性芽胞厭氧桿菌，該菌是醫(yī)院獲得性感染的主要病原體之一，艱難梭菌感染的癥狀從輕度腹瀉至嚴(yán)重的偽膜性結(jié)腸炎。巨噬細(xì)胞作為一種先天性免疫細(xì)胞廣泛分布于全身組織，在細(xì)菌感染中發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞通過識(shí)別、吞噬抗原，產(chǎn)生細(xì)胞因子以激活和募集其他免疫細(xì)胞至感染部位。在艱難梭菌感染過程中，巨噬細(xì)胞可通過Toll樣受體、Nod樣受體識(shí)別艱難梭菌，并產(chǎn)生免疫反應(yīng)。最近有研究證明，艱難梭菌可抑制巨噬細(xì)胞的吞噬清除能力，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞大量聚集，加重腸道的炎癥反應(yīng)；而通過改善巨噬細(xì)胞溶酶體質(zhì)子泵的功能，則可恢復(fù)其吞噬能力。本文總結(jié)了巨噬細(xì)胞對(duì)艱難梭菌的免疫通路，從巨噬細(xì)胞免疫功能的角度，提供治療艱難梭菌感染的新方法。

關(guān)鍵詞：艱難梭菌；巨噬細(xì)胞；免疫；感染機(jī)制；炎癥反應(yīng)

中圖分類號(hào)：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Research progress of macrophages in Clostridium difficile infection

Chen Shiyao1 and Wu Tao2

（1 College of Biomedical Engineering and Instrument Science， Zhejiang University， Hangzhou 310000; 2 Department of Medical Engineering， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou 310003）

Abstract Clostridioides difficile is a Gram-positive， spore-forming， anaerobic Bacillus as a major pathogen of hospital-acquired infections. The symptoms of C. difficile infection （CDI） range from mild diarrhea to severe pseudomembranous colitis. Macrophages are innate immune cells that are widely distributed throughout the body's tissues and play an important role in bacterial infections. Macrophages recognize and phagocytose antigens and produce cytokines to activate and recruit other immune cells to the site of infection. During the process of C. difficile infection， macrophages can recognize C. difficile through Toll-like receptors and Nod-like receptors and produce immune responses. Recent studies have demonstrated that C. difficile can inhibit the phagocytic clearance ability of macrophages， leading to massive macrophage accumulation and exacerbating the inflammatory response in the gut. The phagocytic capacity of macrophages can be restored by improving their lysosomal proton pump function. This paper summarized the immune pathway of macrophages against C. difficile and provided a new approach to treat C. difficile infection from the perspective of macrophage immune function.

Key words Clostridioides difficile; "Macrophage; Immune; Mechanisms of infection; Inflammatory response

艱難梭菌感染（Clostridioides difficile infection， CDI）是一種院內(nèi)獲得性感染疾病。目前，國內(nèi)臨床所用的艱難梭菌感染治療藥物主要包括甲硝唑和萬古霉素。甲硝唑適用于輕度至中度艱難梭菌感染，但是有部分艱難梭菌對(duì)甲硝唑表現(xiàn)出異質(zhì)耐藥性，導(dǎo)致治療效果不佳[1]。萬古霉素適用于中度至重度艱難梭菌感染，但也會(huì)出現(xiàn)CDI復(fù)發(fā)的現(xiàn)象[2]。隨著對(duì)生物制劑研究的迅速發(fā)展，開展相關(guān)生物制劑在艱難梭菌感染中的使用，以期降低艱難梭菌感染及復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)[3]。

巨噬細(xì)胞是細(xì)菌感染的主要免疫細(xì)胞，能識(shí)別并吞噬艱難梭菌，同時(shí)通過產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子，募集中性粒細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞至感染部位清除艱難梭菌。利用巨噬細(xì)胞的免疫作用清除艱難梭菌是未來治療CDI的良好手段。因此本文綜述了巨噬細(xì)胞識(shí)別艱難梭菌的方式和免疫應(yīng)答的研究進(jìn)展，為未來治療CDI提供新思路。

1 艱難梭菌

艱難梭菌是革蘭陽性芽胞厭氧菌，可引起感染性腹瀉和偽膜性結(jié)腸炎[4]。從20世紀(jì)末至今，艱難梭菌感染的發(fā)生率顯著增加，現(xiàn)已成為最重要的院內(nèi)獲得性感染病原菌之一[5]。艱難梭菌有多種致病因子，主要毒性因子是腸毒素A（TcdA）和細(xì)胞毒素B（TcdB），二者的基因位于致病決定區(qū)基因座（PaLoc）上。TcdA和TcdB 結(jié)合宿主細(xì)胞受體，被內(nèi)吞后通過葡萄糖基化使宿主細(xì)胞Rho家族GTP酶失活[6]。Rho GTP酶的失活會(huì)破壞宿主細(xì)胞骨架并加速上皮屏障功能的破壞[7]。除此之外，高毒力菌株還會(huì)產(chǎn)生二元毒素（binary toxins，CDT）CDT，屬于二元ADP—核糖基化毒素家族，由CDTa和CDTb兩種毒素成分組成。CDTb被絲氨酸蛋白酶激活，與脂蛋白受體結(jié)合并將CDTa轉(zhuǎn)位到宿主細(xì)胞質(zhì)中。CDTa作為酶促ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶，催化肌動(dòng)蛋白發(fā)生ADP糖基化修飾，被核糖基化后的肌動(dòng)蛋白與其他肌動(dòng)蛋白絲的末端結(jié)合，從而抑制肌動(dòng)蛋白聚合，導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架解聚，增加艱難梭菌感染的嚴(yán)重程度[8]。除了上述毒素因子外，艱難梭菌芽胞也可以誘發(fā)毒性反應(yīng)。芽胞被巨噬細(xì)胞吞噬內(nèi)化后存活，刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-12等細(xì)胞因子，引起炎癥反應(yīng)[9]。此外，細(xì)菌外蛋白（S-layer proteins，SLPs）也是其毒力因子，不僅在生長和存活中發(fā)揮作用，還可促進(jìn)黏附和生物膜的形成[10]。

2 巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞是先天免疫的重要組成部分，具有雙重作用，一方面可以通過吞噬作用清除病原體，同時(shí)介導(dǎo)防御和炎癥反應(yīng)，巨噬細(xì)胞通過胞吞作用將病原體包圍并內(nèi)化，隨后吞噬體與酸性溶酶體融合，降解病原體[11]。另一方面，巨噬細(xì)胞被某些信號(hào)激活極化成不同的表型（主要為M1和M2），進(jìn)而進(jìn)行介導(dǎo)防御和產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，通過作用于多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[12]。M1型巨噬細(xì)胞被稱為促炎性巨噬細(xì)胞，分泌促炎因子；M2型巨噬細(xì)胞被稱為抗炎性巨噬細(xì)胞，分泌抗炎因子[13]。在細(xì)菌感染中，巨噬細(xì)胞監(jiān)測(cè)到入侵的細(xì)菌，表達(dá)特異性受體結(jié)合病原體，處理抗原并在其表面呈現(xiàn)與人類白細(xì)胞抗原（human leucocyte antigen，HLA）分子結(jié)合的肽片段，提示免疫系統(tǒng)病原體的存在。識(shí)別入侵的細(xì)菌后，吞噬受體與細(xì)菌的相應(yīng)配體結(jié)合，例如清道夫受體可結(jié)合細(xì)菌的表面分子，模式識(shí)別受體（pattern recognition receptor，PRR）可特異性結(jié)合病原體相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMP）[14]，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白聚合和吞噬杯（phagocytic cups）的形成。吞噬杯閉合后形成吞噬體，巨噬細(xì)胞通過吞噬體內(nèi)吞作用清除細(xì)菌，誘導(dǎo)已被感染的細(xì)胞凋亡，減少病灶面積[15]。抗原刺激和細(xì)胞因子（如IFN-γ、TNF-α）誘導(dǎo)M1表型極化，這是宿主對(duì)細(xì)菌感染的關(guān)鍵免疫反應(yīng)[13]。M1型巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌感染的細(xì)胞具有強(qiáng)大的細(xì)胞毒性，產(chǎn)生促炎因子和趨化因子，還通過產(chǎn)生活性氧和活性氮反應(yīng)物發(fā)揮細(xì)胞毒性[16]。趨化因子募集其他免疫細(xì)胞至感染部位，加快清除細(xì)菌的速度[17]。M2型巨噬細(xì)胞則分泌IL-10和TGF-β抑制炎癥，促進(jìn)組織修復(fù)重塑、血管生成和保持體內(nèi)免疫強(qiáng)度平衡[13]。兩種極化巨噬細(xì)胞在細(xì)菌感染時(shí)均發(fā)揮重要作用，缺一不可。

3 巨噬細(xì)胞在CDI過程中的免疫應(yīng)答

在CDI中，巨噬細(xì)胞是第一個(gè)識(shí)別、吞噬艱難梭菌，并產(chǎn)生細(xì)胞因子的免疫細(xì)胞[18]。巨噬細(xì)胞通過膜表面產(chǎn)生A型清道夫受體識(shí)別艱難梭菌的脂磷壁酸[19]，進(jìn)而通過Fcγ受體促進(jìn)酪氨酸激酶募集，酪氨酸激酶激活Rho家族成員的Rac和Cdc42，Cdc42與Wiskott-Aldrich 綜合征蛋白（Wiskott-Aldrich syndrome protein，WASP）相互作用，而WASP則作用于肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白Arp2/3復(fù)合物。Arp2/3復(fù)合物使肌動(dòng)蛋白聚合成f-肌動(dòng)蛋白，從而推動(dòng)巨噬細(xì)胞板狀偽足的形成和靶顆粒的內(nèi)化，將艱難梭菌包裹并吞噬，形成吞噬體[20]。巨噬細(xì)胞向吞噬泡內(nèi)釋放活性氧（reactive oxygen species，ROS）[19]、水解酶殺死艱難梭菌[15]。巨噬細(xì)胞還可通過NF-κB信號(hào)通路、炎癥小體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式產(chǎn)生IL-1β、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β和IL-8等促炎因子和CXC及CC趨化因子，從而激活并募集中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞向感染部位趨化[21-22]。而IL-1、TNF-α等促炎因子的產(chǎn)生是Ⅰ型免疫反應(yīng)的特征，IL-4、IL-5、IL-25等抗炎因子的產(chǎn)生是Ⅱ型免疫反應(yīng)的特征[23]。IL-1β是強(qiáng)大的促炎因子，其受體IL-1R作用于下游誘導(dǎo)IL-23的釋放，加劇腸道炎癥，增加CDI嚴(yán)重程度[24]。IL-8主要由巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生，IL-8在CDI過程中促進(jìn)中性粒細(xì)胞向炎癥區(qū)域的遷徙，增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的殺菌作用。然而，中性粒細(xì)胞的浸潤會(huì)增加腸道通透性[25]，使炎癥更易滲透腸道黏膜[26]，中性粒細(xì)胞的浸潤還會(huì)破壞腸黏膜的完整性[27]。因此，在艱難梭菌感染中，過強(qiáng)的I型反應(yīng)會(huì)加重組織損傷。在CDI中，IL-25作為重要的Ⅱ型細(xì)胞因子，通過作用于嗜酸性粒細(xì)胞而減少胃腸道上皮細(xì)胞黏蛋白的產(chǎn)生和組織損傷，增強(qiáng)腸道上皮屏障的完整性，發(fā)揮保護(hù)作用[28]。細(xì)胞因子可作為評(píng)估CDI嚴(yán)重程度的生物標(biāo)志物，促炎因子如IL-8、IL-1β產(chǎn)生過多，募集更多的中性粒細(xì)胞，進(jìn)而誘發(fā)高水平的組織損傷。有研究表明，在臨床實(shí)驗(yàn)中，患者糞便IL-8的濃度與CDI復(fù)發(fā)具有一定相關(guān)性[29]。但缺乏促炎因子會(huì)導(dǎo)致免疫強(qiáng)度低，無法有效清除艱難梭菌[24]。因此，平衡I型和Ⅱ型免疫反應(yīng)對(duì)治療CDI至關(guān)重要。

4 巨噬細(xì)胞對(duì)艱難梭菌的免疫通路（圖1）

4.1 Toll樣受體介導(dǎo)的免疫通路

巨噬細(xì)胞極化涉及多種途徑，Toll樣受體（TLR）家族是已知配體、下游信號(hào)通路和功能的重要先天免疫受體組。Toll樣受體可將病原體識(shí)別和先天免疫、適應(yīng)性免疫緊密聯(lián)系[30]。

4.1.1 TLR9在CDI中作用

TLR9是巨噬細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)受體，參與識(shí)別細(xì)菌、病毒和寄生蟲來源的未甲基化CpG-DNA[31]。 TcdA包含葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域（glucosyltransferase domain，GTD）、自催化半胱氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域（cysteine protease domain，CPD）、中央跨膜結(jié)構(gòu)域（transmembrane domain，TMD）和由重復(fù)寡肽組成的C端受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（receptor-binding domain，RBD）[32]。TcdA含有多個(gè)細(xì)胞穿透肽基序，能夠介導(dǎo)膜易位而促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)吞作用。TcdA通過靜電作用與細(xì)菌DNA共化，形成能夠抵御DNA酶水解的蛋白質(zhì)—DNA復(fù)合物。TcdA57-80-DNA復(fù)合物在DNA間距上呈現(xiàn)平行DNA形態(tài)，形成柱狀六邊形DNA晶格，使DNA與TLR9形成互鎖的狀態(tài)，增加TLR9與蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的靜電作用，從而放大免疫反應(yīng)的強(qiáng)度[33]。巨噬細(xì)胞的TLR9識(shí)別TcdA57-80-DNA復(fù)合物，發(fā)生促炎反應(yīng)，產(chǎn)生大量IL-8。因此，注射或口服ODN TTAGGG（TLR9抑制劑）均可以減輕炎癥反應(yīng)，降低腸道組織損傷[34]，這為緩解艱難梭菌引起的腸道炎癥提供了幫助。

4.1.2 TLR7受體在CDI中作用

艱難梭菌可以激活巨噬細(xì)胞TLR7介導(dǎo)的免疫途徑。艱難梭菌使TLR7表達(dá)量升高，從而產(chǎn)生高水平的IFN-γ和TNF-α，反之，IFN-γ和TNF-α的協(xié)同作用能更大程度上作用并激活巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)PANoptosis凋亡的炎癥性細(xì)胞死亡[35]。PANoptosis凋亡通過細(xì)胞死亡引發(fā)炎癥，導(dǎo)致釋放更多的細(xì)胞因子和趨化因子，同時(shí)能激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，釋放有毒的活性氧，加劇全身炎癥[36]。另外，TLR7可抑制巨噬細(xì)胞的吞噬能力，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞清除艱難梭菌能力下降[35]。有研究表明，TLR7/8激動(dòng)劑可引起巨噬細(xì)胞清道夫受體下調(diào)，改變巨噬細(xì)胞泛素化機(jī)制，導(dǎo)致大腸埃希菌的清除能力下降[37]。因此，TLR7抑制巨噬細(xì)胞可能是由于巨噬細(xì)胞的清道夫受體下調(diào)或巨噬細(xì)胞用來殺傷細(xì)菌的泛素化機(jī)制改變。綜上，TLR7相關(guān)通路接受來自艱難梭菌的信號(hào)，產(chǎn)生能引起強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)的IFN-γ和TNF-α，增強(qiáng)腸道炎癥表達(dá)。抑制TLR7表達(dá)，可以降低腸道組織損傷[36]，這為靶點(diǎn)治療CDI提供一條新途徑。

4.1.3 TLR4受體在CDI中作用

艱難梭菌表面蛋白，覆蓋在細(xì)菌的整個(gè)外層，是病原體和宿主免疫細(xì)胞識(shí)別的關(guān)鍵位點(diǎn)[38]。MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)在將細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為細(xì)胞反應(yīng)的過程中起關(guān)鍵作用[39]。MAPK家族有3個(gè)明確的成員：經(jīng)典MAPK家族（也稱為ERK），C-Jun N末端激酶/應(yīng)激活化蛋白激酶（JNK/SAPK）和p38激酶[40]。p38 MAPK在細(xì)胞凋亡、分化、存活、炎癥和其他應(yīng)激反應(yīng)中起主要調(diào)控作用[41]。巨噬細(xì)胞表面的TLR4被艱難梭菌SLPs激活后，其下游通路的MAPK激酶p38磷酸化，P38的磷酸化將會(huì)激活細(xì)胞炎癥因子表達(dá)，產(chǎn)生高水平的細(xì)胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-1β、IL-6和趨化因子MCP、MIP-1α和MIP-2，并將免疫細(xì)胞募集到感染部位[42]。IL-12p40驅(qū)動(dòng)未成熟的CD4 T細(xì)胞分化為TH1細(xì)胞，TH1細(xì)胞可以作用于巨噬細(xì)胞，正反饋增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力；同時(shí)，TH1細(xì)胞誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgG蛋白，觸發(fā)肥大細(xì)胞的免疫應(yīng)答清除艱難梭菌[43]。P38磷酸化還會(huì)導(dǎo)致MHCⅡ的大量產(chǎn)生[42]，MHCⅡ存在于巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面，能將抗原特異性呈遞給CD4 T細(xì)胞[44]，而CD4 T細(xì)胞可幫助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，分泌抗菌物質(zhì)，發(fā)揮免疫功能[45]。P38的激活還導(dǎo)致巨噬細(xì)胞上的CD40和CD80表達(dá)增加[42]，CD40和CD80作為重要的巨噬細(xì)胞共刺激分子，參與激活巨噬細(xì)胞，調(diào)節(jié)IL-12和輔助性 T 細(xì)胞I型細(xì)胞因子，發(fā)揮細(xì)菌清除功能[46]。TLR4也可以識(shí)別毒素CDT，產(chǎn)生IL-8和CXCL2[47]。CXCL2誘導(dǎo)MIP-1α的產(chǎn)生，從而刺激TNF-α和LTB4的釋放，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[48]。可見，巨噬細(xì)胞的TLR4在艱難梭菌感染的免疫通路中發(fā)揮重要作用，缺乏TLR4將無法產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng)清除感染[42]。

4.2 炎癥小體在CDI中作用

IL-1β是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)，可以誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種促炎因子和趨化因子[49]。IL-1β的表達(dá)需要炎癥小體，而炎癥小體復(fù)合物包括Nod樣受體蛋白如NRLP3、NRLP1和NRLP7等。NRLP3炎癥小體包括NRLP3傳感器，銜接蛋白凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）蛋白和pro casepase-1[50]。NRLP3發(fā)揮作用分為啟動(dòng)和激活兩部分。啟動(dòng)需要病原體模式受體或損傷相關(guān)分子模式（damage-associated molecular patterns，DAMP）刺激模式識(shí)別受體，然后細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上調(diào)NRLP3、pro-IL-1β、casepase-1。激活由多個(gè)上游信號(hào)誘導(dǎo)，如K+和Cl-外排、溶酶體的破壞。炎癥小體激活時(shí)將pro-IL-1β剪切為IL-1β并分泌IL-1β，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[51]。巨噬細(xì)胞將艱難梭菌吞噬后，觸發(fā)炎癥小體NRLP3的激活。P2X7為K+外排，ATP內(nèi)流的門控通道，艱難梭菌作用于P2X7，這一過程是炎癥小體激活的重要信號(hào)。MyD88是Toll樣受體和白細(xì)胞介素-1（IL-1）受體家族下游炎癥信號(hào)通路的典型銜接子，介導(dǎo)炎癥小體的產(chǎn)生[52]。MyD88將炎癥信號(hào)傳遞至通路下游，產(chǎn)生pro-IL-1β。Casepase-1參與NRLP3炎癥小體的成熟，成熟的NRLP3炎癥小體將pro-IL-1β加工為IL-1β[53]。IL-1β作為重要的炎癥因子，參與多種免疫途徑清除艱難梭菌，例如誘導(dǎo)MCP-1的產(chǎn)生，MCP-1募集巨噬細(xì)胞遷移至感染部位[49]；激活炎性casepase-1，誘導(dǎo)被感染的細(xì)胞凋亡[54]。在艱難梭菌激活NRLP3炎癥小體的過程中，P2X7通道對(duì)NRLP3炎癥小體的激活至關(guān)重要，抑制P2X7通道的功能不能激活NRLP3炎癥小體以應(yīng)對(duì)艱難梭菌感染[53]。然而，這并不意味著炎癥小體的免疫反應(yīng)越強(qiáng)越有利于治療CDI，炎癥小體的形成會(huì)導(dǎo)致血小板和中性粒細(xì)胞聚集，形成血栓[55]，產(chǎn)生過高的炎癥因子還會(huì)使免疫系統(tǒng)過度攻擊腸道組織，甚至造成中毒性休克綜合征[56]。

4.3 NF-κB通路在CDI中作用

核因子-κB（nuclear factor κB，NF-κB）是一個(gè)誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)錄因子家族，廣泛存在于巨噬細(xì)胞中，參與調(diào)節(jié)先天免疫，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)。該家族由5個(gè)成員組成，包括NF-κB1（也稱為 p50）、NF-κB2（也稱為 p52）、RelA（也稱為p65）、RelB 和c-Rel[57]。無病原體刺激時(shí)，NF-κB與抑制性IκB蛋白（IκBα、IκBβ、p100、p105等）結(jié)合；當(dāng)NF-κB信號(hào)通路被病原體激活時(shí)，IκB激酶（IKK）復(fù)合物磷酸化IκB，降解IκB蛋白，NF-κB二聚體便可進(jìn)入細(xì)胞核以調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，導(dǎo)致IL-1β、TNF-α等促炎因子的大量產(chǎn)生[58]。TcdA通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞[59]，TcdA磷酸化p65/p50異二聚體的抑制性蛋白IκBα，從而使IκBα降解而脫落，p65/p50異二聚體便進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)控產(chǎn)生大量的TNF-α，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[60-61]。巨噬細(xì)胞也可以通過TLR2/6異聚體識(shí)別CDT以激活NF-κB免疫通路[62]。這些研究表明在CDI中，NF-κB能介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。

5 如何通過巨噬細(xì)胞治療CDI

巨噬細(xì)胞作為重要的免疫細(xì)胞，具有治療CDI的潛力[63]。黑素細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子（microphthalmia-associated transcription factor，MITF）是調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬和溶酶體的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子[56]，而研究表明，TcdB可作用于CTNNB1/β-catenin-MITF 抑制溶酶體質(zhì)子泵亞基，下調(diào)MITF和編碼溶酶體膜上ATP酶的基因的表達(dá)，從而抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)溶酶體酸化，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞吞噬艱難梭菌能力下降。而維生素D3和卡馬西平可恢復(fù)MITF的表達(dá)，改善溶酶體質(zhì)子泵的功能，從而恢復(fù)巨噬細(xì)胞吞噬清除艱難梭菌的能力[18]。巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的過度聚集會(huì)導(dǎo)致強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，損傷腸道組織[64]。有研究表明，在副干酪乳桿菌中克隆并表達(dá)人類NAPE-PLD基因 （p-NAPE-LP），將其移入小鼠腸道內(nèi)可產(chǎn)生棕櫚酰乙醇酰胺（PEA）以下調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS），環(huán)氧化酶-2（COX-2）的表達(dá)，達(dá)到降低結(jié)腸中巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的密度，減輕組織學(xué)損傷的目的[63]。這些利用巨噬細(xì)胞免疫作用的新型治療手段不涉及抗菌藥物的使用，可降低CDI的復(fù)發(fā)率。

6 未來研究方向

雖然目前對(duì)巨噬細(xì)胞在艱難梭菌感染中的作用機(jī)制已有所了解，但是，使用巨噬細(xì)胞治療CDI的方法尚不成熟。一方面，不同來源（如鼠、人）的巨噬細(xì)胞對(duì)艱難梭菌的免疫通路并不完全相同，現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)多以鼠來源的巨噬細(xì)胞為主，而對(duì)人巨噬細(xì)胞的免疫知之甚少。另一方面，基于巨噬細(xì)胞的新型治療手段適用條件苛刻，并未推廣到更為復(fù)雜、菌群繁多的人類腸道。綜上所述，后續(xù)的研究應(yīng)以人巨噬細(xì)胞為主體，進(jìn)一步明晰巨噬細(xì)胞與艱難梭菌作用的機(jī)制，完善巨噬細(xì)胞作為治療CDI的技術(shù)手段，拓展臨床應(yīng)用，增加臨床有效治療，降低艱難梭菌感染復(fù)發(fā)危險(xiǎn)。

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