基于生物信息學驗證海桐皮-透骨草抑制炎性軟骨細胞鐵死亡的作用機制

摘要：基于生物信息學驗證海桐皮-透骨草（復方海桐皮）抑制脂多糖（LPS）誘導的大鼠炎性軟骨細胞鐵死亡的作用機制。通過生物信息學工具預測骨關節炎鐵死亡的相關作用機制，確定待驗證通路。利用相關試劑盒檢測亞鐵離子濃度、還原型谷胱甘肽（GSH）質量分數；利用酶聯免疫法（ELISA）檢測加藥后細胞活力和相關細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的質量濃度；蛋白免疫印跡法（Western -Blot）檢測各組NLRP3炎癥小體通路相關的蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC以及抑制鐵死亡的基因GPX4蛋白表達水平。結果發現亞鐵離子濃度顯著降低，GSH質量分數顯著升高；ELISA實驗結果顯示，藥物各組與模型組相比IL-1β、IL-6、TNF-α炎癥因子質量濃度均降低；WB結果顯示，藥物各劑量組與模型組相比，NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表達水平顯著降低，GPX4蛋白表達水平顯著升高。復方海桐皮可以通過介導NLRP3炎癥小體通路對炎性軟骨細胞的鐵死亡進行干預，從而達到治療骨關節炎的目的。

關鍵詞：骨關節炎；鐵死亡；海桐皮-透骨草；生物信息學；NLRP3炎癥小體通路

中圖分類號：R285;R289""" 文獻標志碼：A""" 文章編號：1002-4026（2025）01-0023-09

開放科學（資源服務）標志碼（OSID）：

DOI：10.3976/j.issn.1002-4026.20240049【藥理與毒理】

收稿日期：2024-03-30

基金項目：國家中醫藥管理局全國名老中醫藥專家傳承工作室建設項目（國中醫藥人教函［2019］41號）；成都醫學院應用開發與成果轉化培育項目（CYCG19-01）；四川省大學生創新訓練項目（S202313705037）

作者簡介：徐夢雨（2003—）， 女，本科，研究方向為藥學。E-mail：2459331059@qq.com

*通信作者，游元元（1974—），女，博士，教授，研究方向為中藥品質與藥效。E-mail：ym633@sina.com，Tel：15308089262

Bioinformatics-based verification of the mechanism of Haitongpi-Tougucao

in inhibiting ferroptosis in inflammatory chondrocytes

XU Mengyu，WU Tianju，HUANG Lu，LIU Xin，ZHAO Jiarong，YOU Yuanyuan*

（School of Pharmacy， Chengdu Medical College， Chengdu 610500， China）

Abstract∶Based on bioinformatics， this study validates the mechanism of action of Haitongpi-Tougucao （compound Haitongpi） in inhibiting lipopolysaccharide （LPS）-induced ferroptosis in rat inflammatory chondrocytes. Bioinformatics tools were used to predict the mechanism of action of ferroptosis in osteoarthritis and identify pathways for validation. The key techniques used were as follows： the detection of ferrous ion content and reduced glutathione （GSH） content using relevant kits; the detection of cell viability and the levels of related cytokines IL-1β， IL-6， and TNF-α using the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） after dosing; and the use of protein immunoblotting （western blot， WB） to detect the protein expression levels of NLRP3， Caspase-1， ASC， and GPX4， a gene that inhibits ferroptosis， related to the NLRP3 inflammasome pathway in each group. The results revealed that the ferrous ion content was significantly decreased，while the GSH content was significantly increased; the ELISA experiment showed that the levels of inflammatory factors IL-1β， IL-6， and TNF-α were decreased in each group administered with the drug compared with those in the model group; the WB results showed that the expression levels of NLRP3， Caspase-1， and ASC proteins were significantly decreased and GPX4 protein expression levels were significantly increased in each group administered with a specific dosage of the drug compared with those in the model group. Therefore， the compound Haitongpi can intervene in the ferroptosis of inflammatory chondrocytes by mediating the NLRP3 inflammasome pathway， thereby achieving the purpose of osteoarthritis treatment.

Key words∶osteoarthritis; ferroptosis; Haitongpi-tougucao; bioinformatics; NLRP3 inflammasome pathway

骨關節炎（osteoarthritis，OA）是一種好發于中老年人的慢性關節性疾病，臨床表現為關節部位的疼痛、僵硬、腫脹或畸形［1］，其發病率隨年齡增長而增高。我國已步入老齡化社會，疊加肥胖等危險因素，OA患病人群會進一步增加［2］。目前OA尚無根治方法，西醫臨床的用藥目標是以控制疼痛、緩解癥狀為主，但長期用藥毒副作用較明顯［3-4］。

骨關節炎屬中醫理論中的“骨痹”，中醫臨床有豐富的治療經驗，其中海桐皮、透骨草兩味中藥既是熏洗法治療OA的經典名方“海桐皮湯”中的主要藥味［5］，也是與其它中藥配伍外治OA的高頻藥物［6-7］。海桐皮為袪風逐濕之品，能除風濕之害，理腰膝之疼［8］；透骨草具暖筋透骨之效，可洗風寒濕痹，緩筋骨疼痛［9］。但二者治療OA的作用機制尚不明確。

現代研究發現OA與鐵死亡具有一定相關性［10-11］。鐵過載可調動關節軟骨細胞的氧化應激反應，使細胞內活性氧含量激增，激活NLRP3炎癥小體通路，繼而誘導細胞鐵死亡［12-13］。本研究借助生物信息學手段篩選OA與鐵死亡相關的潛在靶點與通路，并通過細胞學實驗驗證海桐皮-透骨草抑制炎性軟骨細胞鐵死亡的作用機制，以期為兩味中藥的臨床合理應用提供依據。

1" 實驗材料

1.1" 藥材

海桐皮采自成都醫學院校園內，鳳仙透骨草購自荷花池藥材市場。經成都醫學院藥學院游元元教授鑒定，分別為豆科植物刺桐Erythrina variegata L.的樹皮、鳳仙花科植物鳳仙花Impatiens balsamina L.的干燥莖。

1.2" 細胞株

SD大鼠膝關節軟骨細胞購于廣州吉妮歐生物科技有限公司。

1.3" 試劑

細胞增殖活性檢測試劑盒（Cell Counting Kit-8，批號K1018，APEXBIO）；TNF-α酶聯反應試劑盒（R1393H061，20220606，FineTest）；IL-1β酶聯反應試劑盒（R1393G059，20220606，FineTest）；IL-6酶聯反應試劑盒（R1393G062，20220606，FineTest）；還原型谷胱甘肽（GSH）含量檢測試劑盒（20221221，索萊寶）；亞鐵離子比色法測試盒（20230627，Elabscience）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（BL521A，20221101，Biosharp）；兔抗鼠GPX4單克隆抗體（20230109R，DF6701，Affinity Biosciences）；兔抗鼠NLRP3單克隆抗體（20230109R，DF5418，Affinity Biosciences）；兔抗鼠Caspase-1單克隆抗體（20230109R，DF6252，Affinity Biosciences）；兔抗鼠TMA1/ASC單克隆抗體（20230109R，DF6304，Affinity Biosciences）；兔抗鼠IL-18單克隆抗體（20230109R，DF6346，Affinity Biosciences）；羊抗兔 IgG（H+L）二抗試劑盒（20230109R，DF5096，Affinity Biosciences）。

1.4" 儀器

熒光倒置顯微鏡（AE2000，中國Motic）；多功能酶標儀（SpectraMax Mini，美國Molecular Devices）；流式細胞儀（NovoCyte 2060R，艾森生物）；生物安全柜（1300型I級A2型，美國Thermo Fisher Scientific）；CO2培養箱（Thermo Froma 3111，美國Thermo Fisher Scientific）；垂直電泳儀及轉印系統（Mini-PROTEAN Tetra，美國Bio-Rad ）；凝膠圖像處理系統（Universal Hoof V，美國Bio-Rad）；恒溫培養振蕩器（ZHWY-200B，上海智城公司）。

2" 實驗方法

2.1 "生物信息學處理方法獲取研究靶點

利用FerrDb v2數據庫（http：//www.zhounan.org/ferrdb/）檢索鐵死亡相關靶點基因，包括Driver（促進鐵死亡的基因）、Suppressor（抑制鐵死亡的基因）、Marker（指示鐵死亡發生的基因）。利用GeneCard數據庫（https：//www.genecards.org/）、DisGeNET數據庫（ https：//www.disgenet.org/）OMIM 數據庫（https：// www.Omim. org/）、PharmGKB數據庫（https：//www. pharmgkb. org/）、TTD數據庫（http：//db. idrblab. net/ttd/）搜集OA的相關靶點基因。利用UniProt數據庫將查詢到的疾病靶點轉換為UniProt ID，通過BioinfoGP數據庫（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools.html）的在線工具Venny 2.1軟件對鐵死亡相關靶點與OA的相關靶點基因整合取合集，得到鐵死亡與OA相關聯的靶點，通過KEGG分析后篩選得到潛在信號轉導通路。

2.2 "藥液制備

取海桐皮、透骨草粗粉各約2.0 g，1：1配伍，采用體積分數75%乙醇加熱回流提取兩次，每次60 min，濃縮提取液為干浸膏。取浸膏50 mg，精密稱定，二甲基亞砜（DMSO）溶解。按照DMSO占比千分之一的比例，加入99.9 mL含血清完全培養基配制成含藥0.5 μg/mL的培養基，0.22 μm微孔濾膜過濾除菌后作為給藥組的含藥母液，4 ℃低溫冷藏。

將母液濃度為100 mmol/mL的N-乙酰-L-半胱氨酸配置成濃度為10 mmol/mL的含藥培養基過濾除菌后作為陽性對照組細胞的培養液，4 ℃低溫避光冷藏。

2.3" 實驗分組和炎癥模型的建立

第8代軟骨細胞鋪于6孔板和96孔板于37 ℃培養箱中孵育培養48 h，待細胞鋪滿各孔底80%～90%后觀察其細胞形態并記錄。結合預實驗確定由脂多糖誘導的炎性關節軟骨細胞的最佳造模質量濃度為200 μg/mL。將6孔板細胞分別設置為空白組（Blank）、陽性對照組（Positive Control）、模型組（Model）、高劑量組（High）、中劑量組（Middle）及低劑量組（Low）。96孔板細胞分別設置為空白組、陽性對照組、模型組以及17個梯度濃度組。除空白組加入空白培養基外，其余各組孔均加入200 μg/mL脂多糖的細胞培養液，培養箱培養24 h后觀察并記錄細胞形態。

2.4" 藥物最佳治療濃度確定

待2.3節鋪得的96孔板細胞培養24 h，使用PBS洗滌后向空白組和模型組中加入空白培養基100 μL，向陽性對照組中加入濃度為10 mmol/mL的陽性藥物培養基100 μL。其余17個藥物梯度濃度組分別加入預設定藥物質量濃度的培養液100 μL（預設質量濃度分別為1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500 ng/mL），除空白組和模型組復孔數為3外，其余藥物組復孔數為5。培養24 h后使用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測細胞增殖毒性指標以確定最適藥物濃度范圍。

2.5" 細胞分組給藥

根據CCK-8實驗所測得結果，選取OD值前三的藥物組分別設置為本實驗給藥方案中的高劑量、中劑量、低劑量組。使用2.2節所鋪6孔板細胞分組給藥。

2.6" 鐵死亡指標檢測

2.6.1" ELISA檢測炎癥因子指標

按照檢測試劑盒方法檢測各藥物組細胞上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6的表達量。

從室溫平衡 20 min 后的鋁箔袋中取出所需板條。設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同質量濃度的標準品50 μL。樣本孔先加待測樣本10 μL，再加樣本稀釋液40 μL，空白孔不加。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應孔，37 ℃恒溫箱溫育 60 min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次。每孔加入底物A、B各50 μL，37 ℃避光孵育15 min。每孔加入終止液50 μL，15 min 內在450 nm 波長處測定各孔的OD值。在Excel 工作表中，以標準品質量濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本質量濃度值。

2.6.2" 亞鐵離子濃度檢測

按照亞鐵離子比色法測試盒說明書測定樣品中亞鐵離子濃度。

收集細胞到離心管內，離心后棄上清，取約5×106個細胞加入1 mL 提取液，超聲波破碎細胞（冰浴，功率200 W，超聲3 s，間隔10 s，重復30次），12 000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清測定。酶標儀預熱 30 min， 設定波長到562 nm。所有試劑解凍至室溫，在測定管中加入樣本120 μL、試劑二

260 μL、試劑三20 μL；標準管中加入標準品120 μL、試劑二260 μL、試劑三20 μL；空白管中加入蒸餾水120 μL、試劑二260 μL、試劑三20 μL。充分混勻，置室溫15 min 后，取200 μL上清液至96孔板中，于波長 562 nm 處讀取各管吸光度。按照下式計算亞鐵離子濃度（μmol/L）：

亞鐵離子濃度=［（y-b）/a］×4，

其中，a、b、y為標準品擬合曲線y=ax+b。

2.6.3" 還原型谷胱甘肽含量檢測

按照谷胱甘肽測定試劑盒說明書測定樣本中谷胱甘肽的質量分數。

按照細胞數量（106個）：試劑一體積（mL）10：1的比例反復凍融3次，8 000 r/min離心10 min，取上清置于冰上待測。酶標儀預熱30 min以上，調節波長至412 nm。吸取10 mg/mL 標準溶液，用蒸餾水稀釋至300、200、100、50、25 μg/mL。在測定孔中加入樣本20 μL、試劑二140 μL、試劑三40 μL；標準孔中加入標準溶液20 μL、試劑二140 μL、試劑三40 μL；空白孔中加入蒸餾水20 μL、試劑二140 μL、試劑三40 μL。混勻后常溫靜置2 min 后測定412 nm 處各孔的

光密度，分別記為ODm（測量孔光密度）、ODb（空白孔光密度）、ODs（標準孔光密度），計算△OD=ODm-ODb，△ODs=ODs-ODb。 據標準管的質量濃度（x，μg/mL）和吸光度△OD標準（y，△ODs），建立標準曲線。

GSH質量分數（μg/mg） =x ×V樣/（V樣×Cpr） =x/Cpr，

其中，V樣為加入體系中上清液體積，mL；Cpr為上清液蛋白質質量濃度，mg/mL，需要另外測定。

2.6.4" 蛋白免疫印跡法測定軟骨細胞NLRP-3炎癥小體蛋白表達

提取細胞蛋白，使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。取定量后等質量的6組蛋白上樣，電泳儀電壓設置為100 V，運行20 min后降為150 V，運行70 min至分

離膠底部結束電泳。以100 mA的穩定電流、90 min的運行條件將蛋白轉移至PVDF膜上后置于封閉液中，搖床室溫封閉1.5 h，TBST清洗6次，每次5 min。分別置于NLPRP-3（稀釋比例為1∶

2 000）、ASC（稀釋比例為1∶2 000）、Caspase-1（稀釋比例為1∶2 000）的一抗溶液中，4 ℃搖床孵育16 h。TBST清洗6次，每次5 min。置于二抗溶液（稀釋比例為1∶5 000），搖床常溫孵育2 h，TBST清洗6次，每次5min。化學凝膠成像發光儀曝光測定目的蛋白的表達程度。

2.7" 統計分析

使用SPSS 21.0統計軟件對實驗樣品進行統計數據分析，x±s表示計量的數據資料，方差分析比較兩個樣本之間的差異性，以樣本數據中的Plt;0.05或Plt;0.01表示得出的差異資料具有統計學意義。

3" 結果與結論

3.1" ROS-NLRP3炎癥小體信號

從FerrDb v2數據庫中共搜集整合到與鐵死亡有關的靶點486個。從5個疾病靶點數據庫中搜集、整合、篩選到2 568個共有靶點與OA的發生或發展有關。Venny 2.1軟件對鐵死亡靶點與OA的相關靶點基因取交集，得到鐵死亡與OA關聯靶點分析網絡并繪制Venn 圖（圖1），分析結果得到潛在交集靶點共有143個，交集程度較高的幾個靶點為IL-6、HIF1A、TP53、PIK3CA、HMOX1、SMPD1、TF、G6PD、ATF4、IL-1β、IL-18、TNF-α等。KEGG通路富集分析結果篩選得到66條信號轉導通路，包括生理代謝通路、激素生成調節通路、壞死通路、NLRP3炎癥小體通路、癌癥信號通路、胃泌素通路、細胞對氮化合物的反應等，其中NLRP3炎癥小體信號通路與骨關節炎鐵死亡、凋亡、焦亡、氧化應激、壞死等多種生物過程有關，骨關節炎發展過程的NLRP3炎癥小體信號通路包含NLRP3炎癥小體/IL-1β通路和NLRP3炎癥小體級聯通路，NLRP3炎癥小體通路圖結果見OSID科學數據與內容附圖1。

3.2" 確定海桐皮-透骨草的最佳給藥質量濃度

根據OD值設置高、中、低劑量組，利用熒光倒置顯微觀測正常軟骨細胞和LPS誘導炎癥24 h后的軟骨細胞形態，與正常軟骨細胞相比，誘導后軟骨細胞多呈球狀，而正常細胞多呈現梭形。通過細胞形態的變化可判斷炎癥造模成功。

選取造模成功的細胞96孔板孵育40 min，使用酶標儀重復測量細胞OD值3次，取3次測量結果的平均值，結果如圖2所示。模型組細胞OD值明顯低于空白組，說明細胞存活率明顯降低。藥物質量濃度為1～100 ngmL范圍內的藥物組細胞OD值均大于模型組，說明在該質量濃度范圍內的藥物有一定抗炎作用。其中質量濃度為20和10 ng/mL的實驗組測定OD值均大于陽性對照組，推測海桐皮配伍透骨草的最佳治療濃度在此范圍之間。選取OD值前三的藥物質量濃度20、10、2 ng/mL分別設置為高、中、低劑量組，為后續試驗探究復方海桐皮對炎性軟骨細胞鐵死亡的干預作用是否呈現量效關系提供依據。

3.3" 藥物組存活率隨藥物濃度增大而提高

各組給藥24 h后，利用流式細胞儀檢測細胞存活狀態，結果如圖3所示。陽性對照組存活率最高，模型組存活率最低，空白組存活率低于陽性對照組，高于藥物組。藥物組存活率隨濃度增加而增加。

3.4" 炎癥因子水平變化

按照測定結果，繪制標準曲線得

IL-1β： y=1.375 63+8.656 35 x+15.670 34 x2，r=0.999 0；

IL-6： y=0.434 58+14.595 3 x+9.532 53 x2，r=0.999 6；

TNF-α： y=0.102 74+58.531 36 x+46.017 06 x2，r=0.999 4。

根據標曲和吸光度值計算各實驗組炎癥因子表達情況，模型組軟骨細胞中IL-1β、IL-6、TNF-α質量濃度明顯高于各組。用陽性藥物或者不同質量濃度藥物進行干預后，各藥物組軟骨細胞中IL-1β、IL-6、TNF-α表達量均明顯下降，各炎癥因子含量下降趨勢呈現一定量效關系，含藥質量濃度越高下降趨勢越明顯，結果見圖4所示。

3.5" 鐵死亡相關指標檢測結果

3.5.1" 亞鐵離子濃度變化

測定不同亞鐵離子濃度標準樣品OD值，繪制標準曲線y=0.018 7x -0.002 5，r=0.999。按同樣方法測定待測樣品OD值，并計算樣品亞鐵離子濃度，結果如表1所示。模型組的亞鐵離子濃度較空白組有顯著提高，陽性組在陽性藥物干預下亞鐵離子濃度下降較為明顯，藥物組降低亞鐵離子濃度具有一定量效關系，隨給藥劑量提高，亞鐵離子降低趨勢更明顯。

3.5.2" GSH（谷胱甘肽）質量分數變化

測定GSH不同質量分數標準樣品OD值，繪制標準曲線y=0.002 1x -0.002 6，r=0.999 8（y為△OD=ODm-ODb）。按同樣方法測定待測樣品OD值，并根據實驗試劑盒結果計算方法，計算樣品GSH質量分數，結果如表2所示。模型組的GSH質量分數較空白組有顯著降低，陽性組在陽性藥物干預下GSH質量分數升高較為明顯，實驗藥物組升高GSH質量分數具有一定量效關系，隨給藥劑量提高，GSH升高趨勢更明顯。

3.6" 藥物質量濃度對ROS-NLRP3炎癥小體信號的影響

WB條帶結果如圖5所示，灰度定量分析結果如圖6所示。模型組中NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表達量上調，高于正常組，說明ROS-NLRP3通路蛋白表達較高。灰度分析發現，陽性對照組中蛋白表達量與空白組接近，說明陽性對照藥物對LPS致炎的軟骨細胞ROS-NLRP3通路表達有抑制作用。3個劑量的藥物組，NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表達量均有所下降。除Caspase-1組的中劑量組表達略高于低劑量組，其他通路蛋白表達下調趨勢與濃度有關，藥物質量濃度越高，蛋白下調作用越強。而GPX4表達情況與通路蛋白相反，模型組GPX4表達量較低且略低于空白組；陽性對照組GPX4表達上調明顯，高于藥物組；藥物組表達上調趨勢呈現濃度依賴，高劑量組促進表達作用更強。說明藥濃度較高可能會抑制ROS-NLRP3炎癥小體信號通路，抑制炎癥進一步發展。同時可能通過該信號通路，調節GPX4的表達，抑制鐵死亡的發生與發展。

4" 討論

中醫理論認為OA是因正氣虧虛、瘀血阻絡、風寒濕邪侵襲等病因病機引起的筋骨失養，常以活血化瘀、祛風散寒、除濕止痛之品療之。海桐皮通絡止痛、祛風除濕，透骨草溫經通絡、活血止痛，二者均為OA外治法的高頻使用藥物。清代吳謙所著《醫宗金鑒》中收載的經典名方“海桐皮湯”即以此兩味藥為組方之根本。

與OA病變高相關性通路中，NLRP3炎癥小體通路一方面通過激活NF-κB通路，進而上調與炎癥小體相關蛋白的表達；另一方面促進炎癥小體傳感蛋白與炎癥小體接頭蛋白的聚集，啟動NLRP3、IL-1β、IL-18等基因的轉錄表達，進而引發促炎性細胞死亡［14-16］。另外，斑點樣蛋白ASC、Caspase-1等多種基因分子在炎癥、細胞凋亡等方面同樣發揮著重要作用。本實驗主要探討的機制是基于核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3（NLRP3）炎

癥小體通路進行。NLRP3 是其炎癥小體中關鍵調控蛋白之一，其激活及其相關分

子調控信號通路與多種疾病的發生、發展密切相關，是臨床藥物研究開發的前沿熱點方向［17-19］。

結合生物信息學工具分析，NLRP3炎癥小體通路對于炎性軟骨細胞的炎癥反應有一定調控作用，且與鐵死亡相關聯。實驗驗證該通路的方法是利用蛋白免疫印跡法（WB）驗證NLRP3、Caspase-1、ASC等3個蛋白的表達水平，實驗結果表明復方海桐皮可顯著性降低軟骨細胞中上述3種蛋白的表達，當上述3種蛋白表達下調時，細胞炎癥因子表達也會相應下調，由此證明復方海桐皮確實可介導NLRP3炎癥小體通路實現抗炎目的。但具體是NLRP3炎癥小體/IL-1β通路主導還是NLRP3炎癥小體級聯通路主導仍有待進一步驗證。由實驗結果推測復方海桐皮可通過介導NLRP3炎癥小體通路影響軟骨細胞的鐵死亡，從而影響細胞炎癥發生和發展［20-22］。實驗圍繞鐵死亡和NLRP3炎癥小體通路上調進而激發炎癥反應的兩種機體反應機制探討復方海桐皮對炎性軟骨細胞鐵死亡的干預作用，為海桐皮配伍透骨草的臨床使用提供了實驗依據。

綜上所述，海桐皮配伍透骨草可介導NLRP3炎癥小體通路抑制炎性軟骨的鐵死亡。但該實驗中海桐皮配伍透骨草發揮上述治療作用的相關成分靶點尚未完全明確，結合當前研究推測復方海桐皮對炎性軟骨細胞鐵死亡的干預作用是通過多成分、多靶點、多途徑共同調控的結果，后續還需進一步探究。

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