納米二氧化硅對萊茵衣藻光合性能的影響

摘要［目的］通過測定納米二氧化硅（SiO2NPs）處理綠藻后的生長及光合指標變化，揭示SiO2NPs對水生態環境中藻類光合性能的影響。［方法］以萊茵衣藻（Chlamydomonasreinhardtii）為試驗材料，從生長、氧化脅迫、葉綠素含量及葉綠素熒光誘導動力學曲線方面研究了SiO2"NPs的生物毒性效應。［結果］96h、25℃高濃度（800mg/L）的SiO2NPs誘導萊茵衣藻活性氧（ROS）上升了21.57%，并且抑制了萊茵衣藻光合作用，導致葉綠素a含量下降了10.87%，光合性能指數Pi-Abs下降了50.72%。而溫度升高加劇了納米二氧化硅的毒性。當溫度上升至30℃時，高濃度（800mg/L）的SiO2NPs導致萊茵衣藻ROS比對照組上升了26.58%，葉綠素a和葉綠素b含量分別下降了23.47%和20.35%，光合性能指數Pi-Abs顯著下降了55.72%。高濃度SiO2NPs對萊茵衣藻光合作用有一定的毒害作用，且溫度升高與SiO2NPs濃度增加的協同作用將加劇萊茵衣藻光合毒性效應。［結論］該研究為探索納米粉體材料對微藻的光合效應提供了理論基礎和數據支持。

關鍵詞納米二氧化硅；萊茵衣藻；光合效應；葉綠素熒光誘導動力學曲線；活性氧

中圖分類號X171"文獻標識碼A"文章編號0517-6611（2025）01-0070-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.01.015

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

EffectofSilicaNanoparticlesonPhotosyntheticPerformanceof"Chlamydomonasreinhardtii

HU Yu-qing" LUO Xue-gang" ZHANG Yu ²

（1.CollegeofLifeScienceandEngineering，SouthwestUniversityofScienceandTechnology，Mianyang，Sichuan621010;2.EngineeringResearchCenterforBiomassMaterials，MinistryofEducation，Mianyang，Sichuan622010）

Abstract［Objective］TorevealtheeffectofSiO2NPsonalgalphotosynthesisinaquaticecosystemsbydeterminingthechangesingrowthandphotosyntheticindexesofgreenalgaetreatedwithsilicananoparticles（SiO2NPs）.［Method］ThebiotoxiceffectsofSiO2NPswerestudiedintermsofgrowth，oxidativestress，chlorophyllcontentandchlorophyllfluorescence-inducedkineticcurvesusing"Chlamydomonasreinhardtii"asexperimentalmaterial.［Result］At96hand25℃，thehighconcentrationof800mg/LSiO2NPsinduceda21.57%increaseinreactiveoxygenspecies（ROS）of"Chlamydomonasreinhardtii"andinhibitedthephotosynthesisof"Chlamydomonasreinhardtii，whichresultedina10.87%decreaseinchl-acontentanda50.72%decreaseinthephotosyntheticperformanceindexPi-Abs.Andthetoxicityofsilicananoparticleswasexacerbatedbythetemperatureincrease.Whenthetemperatureincreasedto30℃，thehighconcentrationof800mg/LofSiO2NPsledtotheincreaseofreactiveoxygenspecies（ROS）of"Chlamydomonasreinhardtii"by26.58%，thedecreaseofchlorophyllaandchlorophyllbcontentby23.47%and20.35%，andthesignificantdecreaseofthephotosyntheticperformanceindexPi-Absby55.72%comparedwiththatofthecontrolgroup.HighconcentrationofSiO2NPshadatoxiceffectonphotosynthesisof"Chlamydomonasreinhardtii，andthesynergisticeffectofincreasingtemperatureandincreasingconcentrationofSiO2NPswillexacerbatethephotosynthetictoxiceffectof"Chlamydomonasreinhardtii.［Conclusion］Thisstudyprovidesatheoreticalbasisanddatasupportforexploringthephotosyntheticeffectsofnanopowdermaterialsonmicroalgae.

KeywordsSilicananopowder（SiO2NPs）;Chlamydomonasreinhardtii;Photosyntheticeffect;Chlorophyllfluorescence-inducedkineticcurve;Reactiveoxygen

基金項目四川省科技計劃重點研究項目（20212YFN0025）。

作者簡介"胡雨晴（1995—），女，湖北孝感人，碩士研究生，研究方向：環境生態與環境生物效應。*通信作者，教授，博士生導師，從事環境生物技術、污染控制與生物修復研究。

納米材料（nanomaterials，NMs）是三維中任何一維的尺寸范圍在1～100 nm或者是由納米材料為基本單元構成的材料^［1］。根據其化學組成可分為碳納米顆粒、金屬及其氧化物納米顆粒、量子點和納米聚合物。而納米二氧化硅（SiO 2 NPs）是氧化物納米顆粒，其具有化學純度高、分散性好、比表面積大的特性，表面的不飽和殘鍵和羥基賦予其很高的表面活性^［2］，是目前世界上大規模工業化生產產量最高的納米材料之一^［3］。世界衛生組織數據顯示，SiO 2 NPs全球制造量居納米材料第2位，年產量以150萬t持續遞增^［4］。近年來，隨著經濟社會的不斷發展，SiO 2 NPs被廣泛應用于各行各業，例如電子、能源、環境、醫藥、食品、催化和材料等方面^［5–8］，其生物安全性引起了各國的廣泛關注，涌現出大量對納米材料生物安全和作用機制的研究^［9-10］。然而，SiO 2 NPs的廣泛應用也將對水生生態系統和人類健康構成潛在風險。因此，SiO 2 NPs的環境健康安全評價尤為重要。

SiO 2 NPs對動植物生長構成威脅，研究表明，用40 nm的SiO 2 NPs通過涂抹的方式能穿透人體皮膚，進入表皮CD1a+細胞^［11］，而750和1 500 nm顆粒則不能進入皮膚^［12］。此外，SiO 2 NPs可被吸收至多種細胞的細胞核中，并引起拓撲異構酶1的異常聚集^［12］。15和46 nm的SiO 2 NPs顆粒對人肺癌細胞的體外試驗表明，在SiO 2 NPs濃度為10和100 μg/mL時可以降低細胞活性，其毒性與氧化應激有關^［13］。試驗發現分散良好的SiO 2 NPs可以透過皮膚屏障進去并分布至小鼠全身^［14］。SiO 2 NPs不僅可以進入小鼠皮膚、淋巴結和肝組織，還可以進入大腦皮層中^［15］。目前SiO 2 NPs生物毒性效應研究集中在動物方面，對于植物毒性的研究較少。有研究表明，SiO 2 NPs會影響鱗毛蕨屬藻細胞光合色素的含量，其中葉綠素a和b含量明顯降低，光合色素含量的變化直接影響藻細胞的光合作用^［16］。Van等^［17］研究發現，進入水環境的SiO 2 NPs會破壞羊角月牙藻的細胞結構，抑制其生長。雖然已有學者研究了SiO 2 NPs對藻類光合作用^［16］，但對于SiO 2 NPs導致綠藻的毒性效應仍有待進一步探究。

微藻作為水生態系統的初級生產者，是許多生態鏈的基礎，在水生生態系統中發揮著重要作用。藻類不僅通過自身的光合作用為其他水生生物提供食物和氧氣，同時藻類還具有較高的蓄積能力，常作為水體污染的生物指標^［18］。而萊茵衣藻具有生長周期短、生長繁殖快、易于分離和培養的特點，常作為模式生物用來研究納米顆粒的生物毒性。因此，該研究測定不同濃度、不同溫度下SiO 2 NPs處理萊茵衣藻的OD值、葉綠素含量、活性氧（ROS），并通過FluorPen FP 110 手持式葉綠素熒光儀檢測萊茵衣藻葉綠素熒光參數變化，探討SiO 2 NPs對萊茵衣藻可能的生物學效應機制，以期為評估SiO 2 NPs對藻類的光合性能及其環境毒性效應提供科學依據。

1材料與方法

1.1試驗材料萊茵衣藻（CC124）購置中國科學院水生生物研究所淡水藻類培養庫（FACHB），編號為FACHB2217。萊茵衣藻培養于250mL錐形瓶中，瓶中含有100mL無菌TAP培養基，培養溫度分別為25和30℃，光照強度為100μmol/（m2·s），光暗比為12h/12h，每天早、中、晚各振蕩一次。當萊茵衣藻生長至對數期后，接種至新的培養基中進行試驗處理。

SiO2NPs（純度99%，粒徑30nm）購置蘇州優鋯納米材料有限公司。將SiO2NPs加至無菌水中，配制成0.5g/L的母液，在TAP培養基中配制不同濃度的納米二氧化硅懸浮液，使其終濃度為100和800mg/L用于暴露試驗。在添加萊茵衣藻之前，先將添加納米二氧化硅培養基超聲處理30min，以避免聚集或黏附到細胞容器表面。

1.2試驗方法

1.2.1 生長曲線繪制及胞內ROS含量測定。取3 mL萊茵衣藻，利用FluorPen FP 110手持式葉綠素熒光儀（PSI，捷克）測定其在680、720 nm下的光密度（OD 680、OD 720），分別在1、2、3、4、5、7、9 d檢查藻類在不同濃度SiO 2 NPs處理下生長情況并繪制生長曲線^［19］。每組設置6個生物學重復。

萊茵衣藻細胞密度由公式（1）估計：

y=37.927x+0.1794（R2=0.9901）（1）

式中：y為細胞密度（×105cells/mL）；x為680nm處的吸光度。

用細胞透性熒光染料DCFH-DA（Sigma，德國）測定藻細胞內ROS含量。具體方法：稱取12.5 mg DCFH-DA溶解于2.5 mL二甲基亞砜（分析純），配制成10 mol/L母液，-20 ℃避光保存。取1 mL萊茵衣藻，離心（8 000 r/min，4 ℃，10 min）收集細胞，使用EDTA-2Na洗滌3次并重懸，將母液添加至藻細胞中使其終濃度為100 μmol/L后，在黑暗中室溫孵育60 min^［20］。ROS熒光強度采用多功能熒光酶標儀Varioskan Flash（Thermo Scien，USA）測定，激發波長和發射波長分別為498、522 nm。每組設置3個生物學重復。

1.2.2 萊茵衣藻葉綠素含量測定。參考《植物生理學實驗指導》^［21］，取l mL藻液，6 000 r/min 離心10 min，收集細胞，清洗3遍，在藻細胞中加入5 mL 95%無水乙醇黑暗處理，再次離心（12 000 r/min，10 min）收集上清，用酶標儀測定波長649和665 nm處的吸光度，以95%無水乙醇作為空白對照。每組設置3個生物學重復。

1.2.3 快速葉綠素熒光誘導動力學曲線OJIP測定。利用FluorPen FP110手持式葉綠素熒光儀進行OJIP測定^［22］，具體方法：取3 mL藻細胞，低速離心收集并清洗后置于比色皿中暗適應20 min，設定光化光強為100 μmol/（m2·s）（藻培養時光強），飽和光強為60%［1 800 μmol/（m2·s）］，測量光強 Flash pulse為20%［最大為0.09 μmol/（m2·s）］。每組設置3個生物學重復。

1.3統計分析采用SPSS13.0對試驗數據進行統計分析，通過One-wayANOVA檢驗來測試統計學顯著性差異；部分試驗兩組數據之間差異比較采用Student’s"t"test。采用GraphPadPrism8繪圖，利用AdobeIllustratorCS6進行排版。

2結果與分析

2.1萊茵衣藻生長速率對不同濃度SiO2NPs暴露的響應通過測量680和720nm處的OD值來評估SiO2NPs對萊茵衣藻生長的影響。結果顯示（圖1），在25℃時，低濃度（100mg/L）SiO2NPs對萊茵衣藻生長（OD680）無顯著影響，而高濃度（800mg/L）則導致其生長下降，9d時下降約9.62%；當溫度升高至30℃時，高濃度（800mg/L）SiO2NPs的影響更為顯著，1～9d均呈下降趨勢，7d時下降約13.06%。然而，不同濃度SiO2NPs處理后的萊茵衣藻在720nm處的吸光度無明顯差異。這表明SiO2NPs對萊茵衣藻生長的影響與暴露濃度和處理溫度密切相關。

2.2暴露不同濃度SiO2NPs下萊茵衣藻ROS的定量分析從圖2可以看出，在25℃時，低濃度（100mg/L）SiO2NPs對萊茵衣藻的ROS無明顯差異，而高濃度（800mg/L）的SiO2NPs在96h時導致ROS顯著上升21.57%；在30℃時，SiO2NPs對萊茵衣藻ROS的影響更為顯著，在96h時，100和800mg/LSiO2NPs導致萊茵衣藻ROS分別顯著上升了21.03%和26.58%，這表明高濃度SiO2NPs促進了藻細胞中ROS的累積，同時溫度升高后，SiO2NPs和溫度協同顯著促進藻細胞中ROS的累積。

2.3萊茵衣藻中葉綠素含量對不同濃度SiO2NPs暴露的響應從圖3可以看出，在24h、25℃時，低濃度（100mg/L）SiO2NPs對萊茵衣藻中葉綠素含量無顯著影響，而高濃度（800mg/L）SiO2NPs在96h導致葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b含量分別顯著下降10.87%、8.56%和8.80%；當溫度升高至30℃時，高濃度（800mg/L）的SiO2NPs的影響更為顯著，在96h時，高濃度（800mg/L）的SiO2NPs導致葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b含量分別顯著下降23.47%、2035%和16.26%。

2.4萊茵衣藻葉綠素熒光誘導動力學曲線OJIP對SiO2NPs的響應

2.4.1SiO2NPs對萊茵衣藻OJIP曲線的影響。從圖4可以看出，萊茵衣藻OJIP瞬態熒光呈多相上升，在24和96h、25℃時，萊茵衣藻J相（2ms）、I相（30ms）和P相（達到熒光最大值）低濃度（100mg/L）與對照無顯著差異，而高濃度（800mg/L）J相、I相、P相與對照相比均有所下降。在96h、30℃時，SiO2NPs對萊茵衣藻J相、I相、P相的影響更為顯著。這表明高濃度（800mg/L）的SiO2NPs導致萊茵衣藻整體葉綠素熒光呈下降趨勢。

2.4.2SiO2NPs對萊茵衣藻PSII能量代謝與光電子傳遞的影響。Vj和Vi是OJIP的特征位點熒光值，由圖5可知，在25℃時，經過高濃度（800mg/L）SiO2NPs處理24h萊茵衣藻Vj上升了10.51%，而溫度上升至30℃時，96h時的Vj顯著上升了22.60%。這暗示了高濃度的SiO2NPs阻礙了萊茵衣藻QA-向QB-的電子傳遞，與此同時，溫度上升與SiO2NPs高濃度協同作用，進一步加劇阻礙了電子傳遞的過程。在96h、30℃時，高濃度的SiO2NPs導致Vi顯著上升了1326%，揭示了高濃度的SiO2NPs對萊茵衣藻PQ庫電子傳遞有阻礙作用。

分析PSII對光能吸收、捕獲的情況（圖5）發現，在25℃下高濃度的SiO2NPs處理萊茵衣藻24h后，ABS/RC上升了7.75%，96h時顯著上升了15.57%；當溫度升至30℃時，其影響更為顯著，在24h時ABS/RC上升了12.27%，96h時顯著上升了25.70%。盡管TR0/RC在96h、25℃時與對照無明顯差異，但在30℃時，高濃度的SiO2NPs導致TR0/RC上升了11.51%。在24h、25℃時ET0/RC與對照組相較并未發生顯著變化；高濃度的SiO2NPs導致DI0/RC在24和96h、25℃時分別上升了18.93%和42.90%，在30℃時分別上升了25.43%和50.51%。在96h、25℃時，800mg/LSiO2NPs暴露導致萊茵衣藻有活性反應中心密度RC/CS0下降了13.67%，在96h、30℃時顯著下降了16.73%。這些數據表明，高濃度的SiO2NPs可能損害了萊茵衣藻的反應活動中心，增加了單位活動中心的負擔，而溫度的升高進一步加劇了這一負擔。為了應對這種壓力，萊茵衣藻可能通過增加能量的散失來減少過多的光能對反應中心的損傷。

在PSII能量分配比例方面，在96h、25℃高濃度的SiO2NPs導致Ψ"0下降了5.75%，96h、30℃時下降了7.80%;φE0在96h、25℃時下降了16.33%，96h、30℃時顯著下降了18.22%;φD0在24和96h、25℃時分別上升了9.75%和2382%，30℃時分別上升了8.58%和19.74%。這進一步證明了高濃度的SiO2NPs提高了萊茵衣藻能量散失光量子產量，減少了電子傳遞的量子份額，對其光合電子傳遞性能產生了抑制作用。

Mo和S"m的結果顯示，在24h、25℃時，100和800mg/LSiO2NPs使Mo分別上升了15.82%和21.84%，30℃時分別上升了19.76%和36.54%。而S"m在25℃、24h時無明顯變化，但在96h時800mg/LSiO2NPs使S"m顯著上升了2420%；96h、30℃時100和800mg/LSiO2NPs使S"m分別上升了18.27%和26.03%。這些結果表明，高濃度的SiO2NPs可能抑制了萊茵衣藻QA-外的電子傳遞，加快了QA的還原速率，而S"m的升高則反映了萊茵衣藻電子傳遞體PQ庫的增多，導致更多的電子從QA-進入電子傳遞鏈。

2.4.3SiO2NPs對萊茵衣藻葉綠素熒光性能參數的影響。從圖6可以看出，在96h、25℃時，低濃度（100mg/L）和高濃度（800mg/L）的SiO2NPs導致萊茵衣藻PSII最大光化學效率（F"v/F"m）分別顯著下降了4.51%、11.24%；在96h、30℃時，低濃度（100mg/L）和高濃度（800mg/L）

的SiO 2 NPs導致萊因衣藻 F "v/ F "m分別顯著下降了4.92%、11.32%。光合性能指數Pi-Abs是一個綜合性參數，可以有效反映光合機構狀態、原初光化學活性、電子傳遞效率^［23］。從圖6可以看出，在25 ℃時，100和800 mg/L的SiO 2 NP導致萊茵衣藻在96 h時Pi-Abs分別顯著下降了12.69%和50.72%，在30 ℃時SiO 2 NP對萊茵衣藻Pi-Abs影響更為顯著，分別下降了27.89%和55.72%。以上結果表明SiO 2 NPs可能導致萊茵衣藻光合能力降低，且濃度越高導致萊茵衣藻光合能力越弱，高溫和SiO 2 NPs協同作用對萊茵衣藻光合能力的影響更為顯著。

3討論

SiO 2 NP的安全評價因其在食品科學、化工工業和生物醫學中廣泛應用而受到高度關注。該研究結果證實，SiO 2 NPs對萊茵衣藻具有一定的毒性效應。800 mg/L SiO 2 NPs能夠導致萊茵衣藻葉綠素含量顯著降低和活性氧（ROS）顯著增加。葉綠素熒光誘導動力學OJIP和JIP-test^［24］能反映光吸收、能量傳遞效率、PSII供體側和受體側變化情況^{［25–27］}。從OJIP曲線特征位點 V i和V j 的綜合分析表明，高濃度SiO 2 NPs及培養溫度升高阻礙了萊茵衣藻PSII受體側QA-向QB-的電子傳遞。 M "o反映PSII QA被還原的最大速率以及光合反應中心的凈關閉速度，該研究發現高濃度SiO 2 NPs及溫度升高協同作用導致萊茵衣藻 M "o顯著上升，反映QA-外電子傳遞速率受到抑制進而導致QA的還原速率變快^［28］。綜上，高濃度SiO 2 NPs以及高溫脅迫可能導致萊茵衣藻光合能量傳遞效率降低。有活性中心反應密度（RC/CS 0）結果表明，高濃度SiO 2 NPs與溫度升高協同作用導致RC/CS 0顯著下降，這可能是萊茵衣藻葉綠素a受到高濃度SiO 2 NPs與高溫協同作用后發生降解。單位活性反應中心RC吸收的光能（ABS/RC）上升，說明萊茵衣藻單位活性中心可能要負擔過多的光能，導致萊茵衣藻在高濃度SiO 2 NPs作用下PSII光損傷的可能性增加^［29］。而 φ E o的降低代表PSII反應中心捕獲的量子被用于電子傳遞份額減少，可能是與能量散失光量子產量 φ D o的增加有關。 φ D o增加意味著藻類熱耗散能力增強，熱耗散被認為是一種重要的PSII光破壞防御機制，表明萊茵衣藻通過增加熱散耗來緩解SiO 2 NPs對PSII造成的傷害^［30］。 S "m表示OJIP標準化補償面積，反映使QA完全被還原所需要的能量，即PSII反應中心受體側PQ庫的大小。高濃度SiO 2 NPs與溫度升高協同作用導致 S "m增加，延長了萊茵衣藻到達 F "m所需要的時間，促使其具有更多的電子傳遞體^［27］。

該研究從萊茵衣藻受SiO2NPs暴露后的生長情況、ROS、葉綠素含量及葉綠素熒光動力學曲線OJIP方面揭示了SiO2NPs對萊茵衣藻的毒性效應，為SiO2NPs作為常用納米氧化物對環境造成安全性進行評價提供理論依據。但SiO2NPs對萊茵衣藻致毒的分子機理還有待進一步探究，后續可通過轉錄組和代謝組學等技術分析致毒過程中代謝物差異，確定SiO2NPs對萊茵衣藻的致毒機理。

4結論

該研究結果表明，高濃度SiO2NPs導致萊茵衣藻生長速度變緩，葉綠素含量降低，活性氧增加，高濃度SiO2NPs和溫度升高協同作用脅迫了萊茵衣藻光電子傳遞，導致其能量分配紊亂。光反應階段的還原力生產降低可能導致其暗反應階段碳同化力不足，進而降低了光合性能。

參考文獻

［1］KLAINESJ，ALVAREZPJJ，BATLEYGE，etal.Nanomaterialsintheenvironment：Behavior，fate，bioavailability，andeffects［J］.Environmentaltoxicologyandchemistry，2008，27（9）：1825-1851.

［2］FINED，GRATTONIA，GOODALLR，etal.Siliconmicro-andnanofabricationformedicine［J］.Advancedhealthcarematerials，2013，2（5）：632-666.

［3］CHAKE，MYUNGH.Cytotoxiceffectsofnanoparticlesassessed"invitro"and"invivo［J］.Journalofmicrobiologyandbiotechnology2007，17（9）：1573-1578.

［4］CURRANAD.WHOguidelinesonprotectingworkersfrompotentialrisksofmanufacturednanomaterials［J］.Occupationalmedicine，2020，70（7）：528-529.

［5］GEORGANTZOPOULOUA，BALACHANDRANYL，ROSENKRANZP，etal.Agnanoparticles：Size-andsurface-dependenteffectsonmodelaquaticorganismsanduptakeevaluationwithNanoSIMS［J］.Nanotoxicology，2013，7（7）：1168-1178.

［6］RUDRAMURTHYGR，SWAMYMK.Potentialapplicationsofengineerednanoparticlesinmedicineandbiology：Anupdate［J］.Journalofbiologicalinorganicchemistry，2018，23（8）：1185-1204.

［7］蔡亮珍，楊挺.納米SiO2在高分子領域中的應用［J］.現代塑料加工應用，20014（6）：20-23.

［8］竺玉書.納米材料在涂料中的應用［J］.化工文摘，2001（10）：41.

［9］BISWASP，WUCY.Nanoparticlesandtheenvironment［J］.Journaloftheairamp;wastemanagementassociation，2005，55（6）：708-746.

［10］朱世東，周根樹，蔡銳，等.納米材料國內外研究進展I納米材料的結構、特異效應與性能［J］.熱處理技術與裝備，2010，31（3）：1-5，26.

［11］RYUHJ，SEONGNW，SOBJ，etal.Evaluationofsilicananoparticletoxicityaftertopicalexposurefor90days［J］.Internationaljournalofnanomedicine，2014，9（S2）：127-136.

［12］VOGTA，COMBADIEREB，HADAMS，etal.40nm，butnot750or"500nm，nanoparticlesenterepidermalCD1a+cellsaftertranscutaneousapplicationonhumanskin［J］.Journalofinvestigativedermatology，2006，126（6）：1316-1322.

［13］LINWS，HUANGYW，ZHOUXD，etal.Invitro"toxicityofsilicananoparticlesinhumanlungcancercells［J］.Toxicologyandappliedpharmacology，2006，217（3）：252-259.

［14］NABESHIH，YOSHIKAWAT，MATSUYAMAK，etal.Systemicdistribution，nuclearentryandcytotoxicityofamorphousnanosilicafollowingtopicalapplication［J］.Biomaterials，20132（11）：2713-2724.

［15］BECKERS，DAILEYLA，SOUKUPJM，etal.Seasonalvariationsinairpollutionparticle-inducedinflammatorymediatorreleaseandoxidativestress［J］.Environmentalhealthperspectives，2005，113（8）：1032-1038.

［16］WEICX，ZHANGYB，GUOJ，etal.Effectsofsilicananoparticlesongrowthandphotosyntheticpigmentcontentsof"Scenedesmusobliquus［J］.Journalofenvironmentalsciences，2010，22（1）：155-160.

［17］VANHOECKEK，DESCHAMPHELAEREKA，VANDERMEERENP，etal.Ecotoxicityofsilicananoparticlestothegreenalga"Pseudokirchneriellasubcapitata：Importanceofsurfacearea［J］.Environmentaltoxicologyandchemistry，2008，27（9）：1948-1957.

［18］BLABYIK，BLABY-HAASCE，TOURASSEN，etal.The"Chlamydomonas"genomeproject：Adecadeon［J］.Trendsinplantscience，2014，19（10）：672-680.

［19］HUANGY，LAIJL，HUANGY，etal.Responsemechanismof"Chlamydomonasreinhardtii"tonanoscalebismuthoxyiodide（nano-BiOI）：Integratinganalysisofmineralnutrientmetabolismandmetabolomics［J］.Journalofenvironmentalsciences，202121：13-24.

［20］賈沛莉，周燕平，代瑞華，等.一種熒光分光光度法測定銅綠微囊藻胞內氧化物的方法［J］.復旦學報（自然科學版），2017，56（5）：564-570.

［21］吳強盛.植物生理學實驗指導［M］.北京：中國農業出版社，2016：28-33.

［22］BUSSOTTIF，STRASSERRJ，SCHAUBM.PhotosyntheticbehaviorofwoodyspeciesunderhighozoneexposureprobedwiththeJIP-test：Areview［J］.Environmentalpollution，2007，147（3）：430-437.

［23］ZHANGMP，SHANYJ，KOCHIANL，etal.Photochemicalpropertiesinflagleavesofasuper-high-yieldinghybridriceandatraditionalhybridrice（Oryzasativa"L.）probedbychlorophyllafluorescencetransient［J］.Photosynthesisresearch，2015，126（2）：275-284.

［24］STRASSERBJ，STRASSERRJ.Measuringfastfluorescencetransientstoaddressenvironmentalquestions：TheJIP-test［M］//MATHISP.Photosynthesis：Fromlighttobiosphere.Dordrecht：KAPPress，1995：977-980.

［25］GOLTSEVV，ZAHARIEVAI，CHERNEVP，etal.Drought-inducedmodificationsofphotosyntheticelectrontransportinintactleaves：Aanalysisanduseofneuralnetworksasatoolforarapidnon-invasiveestimation［J］.Biochimicaetbiophysicaacta（BBA）-Bioenergetics，2011817（8）：1490-1498.

［26］SCHANSKERG，SRIVASTAVAA，STRASSERRJ.Characterizationofthe820-nmtransmissionsignalparallelingthechlorophyllafluorescencerise（OJIP）inpealeaves［J］.Functionalplantbiology，2003，30（7）：785-796.

［27］宋婷，張謐，高吉喜，等.快速葉綠素熒光動力學及其在植物抗逆生理研究中的應用［J］.生物學雜志，20128（6）：81-86.

［28］李鵬民，高輝遠，STRASSERRJ.快速葉綠素熒光誘導動力學分析在光合作用研究中的應用［J］.植物生理與分子生物學學報，2005，31（6）：559-566.

［29］胡文海，黃黎鋒，肖宜安，等.夜間低溫對2種光強下榕樹葉綠素熒光的影響［J］.浙江林學院學報，2005，22（1）：20-23.

［30］車興凱.納米氧化銅對藻類毒害的機理研究［D］.泰安：山東農業大學，2019：46-48.