山豆根ISSR-PCR反應體系優化及引物篩選

摘要 以山豆根為試驗材料，采用正交試驗考察DNA、引物、Mg2+、dNTPs、Taq酶5個因素對ISSR-PCR反應體系的影響，建立并優化山豆根ISSR-PCR反應體系條件。結果表明：山豆根ISSR-PCR反應體系（20 μL）最優條件為Mg2+濃度3 mmol/L，dNTPs 0.2 mmol/L，Taq酶1 U，引物0.5 μmol/L，模板DNA 100 ng，運用該體系從100條UBC引物中篩選到10條清晰、多態性好的引物。采用正交試驗設計可有效建立山豆根ISSR-PCR反應的最優體系，為山豆根的親緣關系，種質資源遺傳多樣性評價及品種鑒定和系統分類等研究提供科學依據。

關鍵詞 山豆根；ISSR-PCR體系優化；正交試驗；引物篩選

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2024）18-0078-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.18.017

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Primer Selection of Sophora tonkinensis Gagnep

LI Jin-mei1，GUAN Miao-juan1，HUANG Ding1，2 et al

（1.College of Pharmacy， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi 530200; 2.Key Laboratory of Resources Protection and Utilization of Traditional Chinese Medicine and Ethnic Medicine， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi 530200）

Abstract Taking Sophora tonkinensis as materaial， orthogonal experiments were used to investigate the effects of DNA， primers， Mg2+， dNTPs， and Taq enzymes on the ISSR-PCR reaction system， and the conditions of ISSR-PCR reaction system of Sophora tonkinensis were established and optimized. The results showed that the optimal conditions for the ISSR-PCR reaction system （20 μL） of Sophora tonkinensis including 3 mmol/L Mg2+， 0.2 mmol/L dNTPs， 1 U Taq enzyme， 0.5 μmol/L primer， 100 ng template DNA. Ten primers with good polymorphism were selected from 100 UBC primers by this system. The optimal system of ISSR-PCR reaction can be effectively established by orthogonal experiment design， which provides a scientific basis for the research of genetic relationship， genetic diversity evaluation of germplasm resources， variety identification and systematic classification of Sophora tonkinensis.

Key words Sophora tonkinensis Gagnep;ISSR-PCR system optimization;Orthogonal test design;Primer screening

基金項目 廣西中醫藥大學中藥學一流學科項目（2019XK093）；廣西中醫藥大學青年創新研究團隊項目（2018QT001）。

作者簡介 李金梅（1998—），女，廣西靈山人，碩士研究生，研究方向：中藥資源學。*通信作者，教授，博士，從事中藥資源保護與開發研究。

收稿日期 2023-10-07

山豆根（Sophora tonkinensis Gagnep）為豆科越南槐屬植物，常以干燥根和根莖入藥，主要分布在我國廣西、貴州、云南等地［1］。其化學成分主要為生物堿、黃酮和三萜類化合物等［2］，具有抗癌、抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗心律失常等藥理作用［3-6］。

分子標記技術ISSR （inter-simple sequence repeat）又稱簡單重復序列間擴增，由1994年加拿大蒙特利爾大學的Zietkiewicz等［7］提出。ISSR因其具有無需預先基因組序列信息、快速、穩定、多態性豐富、重復性強及成本低等優點［8］，廣泛應用于植物種質資源收集和鑒定、遺傳多樣性和親緣關系、優異基因的發掘和定位等方面。目前國內外對藥用植物山豆根的分子鑒定研究多采用DNA條形碼技術，而有關ISSR分子技術研究較少?！?br>