高血壓與高血壓合并干燥綜合征患者血清蛋白質(zhì)差異表達(dá)研究

馬慧敏，蔡昕添，阿依古再麗·艾合買提，朱 晴，吳 婷，夏衣熱·艾爾肯，王夢(mèng)卉，李南方，張德蓮

（1.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院高血壓中心，新疆 烏魯木齊 830001；2.新疆高血壓研究所，新疆 烏魯木齊 830001；3.國(guó)家衛(wèi)生健康委高血壓診療研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830001；4.新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室“新疆高血壓病研究實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830001；5.新疆高血壓（心腦血管）疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，新疆 烏魯木齊 830001）

高血壓是一種心血管綜合征，其特征是全身循環(huán)動(dòng)脈壓（收縮壓和/或舒張壓）升高。它常與其他心血管危險(xiǎn)因素并存，可損害心臟、大腦、腎臟等重要器官的結(jié)構(gòu)和功能。目前，高血壓仍然是心腦血管疾病最重要的危險(xiǎn)因素［1］。

研究表明高血壓與自身免疫性疾病密切相關(guān)，兩者之間可能存在相互影響［2］。自身免疫性疾病是指人體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后導(dǎo)致自身組織自我損害引起的疾病［3］。一些研究表明，自身免疫性疾病與血管炎癥和內(nèi)皮功能障礙相關(guān)［4］，可能對(duì)高血壓的發(fā)展產(chǎn)生影響。高血壓本身也涉及到血管功能和炎癥反應(yīng)的異常，因此，自身免疫性疾病可能進(jìn)一步加劇了血管的炎癥狀態(tài)，導(dǎo)致血壓升高［5，6］。干燥綜合征（Sjogren's syndrome，SS）是常見的自身免疫性疾病，其主要表現(xiàn)為外分泌腺（主要是唾液腺和淚腺）的癥狀和體征功能障礙。SS 患者體內(nèi)液體分泌減少，這可能導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，從而加重了高血壓的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［7］。研究表明高血壓合并SS 時(shí)發(fā)生心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加［8］。研究發(fā)現(xiàn)在SS 人群中高血壓的患病最高可達(dá)37.3%［9］。有研究發(fā)現(xiàn)SS 患者的高血壓患病率高于年齡和性別匹配的健康對(duì)照組［10］。目前大量證 據(jù) 表 明 高 血 壓 與SS 密 切 相 關(guān)［11］，但 具 體 發(fā) 病 機(jī)制尚不明確。

本研究利用基于DIA-MS 蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對(duì)高 血 壓 伴 干 燥 綜 合 征（hypertensive with Sjogren's syndrome，SH）患者和不伴干燥綜合征的原發(fā)性高血壓（essential hypertensive，EH）患者的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，以期為SH 的發(fā)病機(jī)制提供新的認(rèn)識(shí)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選 擇2017 年1 月～2018 年12 月 期 間 就 診 于 新疆維吾爾自治區(qū)高血壓診療中心的患者。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)美國(guó)心臟學(xué)會(huì)指南：（1）收縮壓≥140 mmHg 和或舒張壓≥90 mmHg，三次均未服用降壓藥物；（2）有抗高血壓病史的高血壓患者。（3）利用生化指標(biāo)排除其他繼發(fā)性高血壓，包括原發(fā)性醛固酮增多癥、庫(kù)欣綜合征、嗜鉻細(xì)胞瘤、腎實(shí)質(zhì)高血壓、腎血管性高血壓、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征。診斷為EH［12］，同時(shí)排除罹患自身免疫性疾病如血管炎、狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化、自身免疫性肝炎、橋本甲狀腺炎、惡性腫瘤、急慢性感染和感染性疾病的患者。對(duì)于符合以上標(biāo)準(zhǔn)且臨床資料完整的患者均納入EH 患者組。

1.2.2 原發(fā)性SS 診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)2023 年發(fā)布的原發(fā)性SS 的分類標(biāo)準(zhǔn)［13］：入選標(biāo)準(zhǔn)：至少有眼干或口干癥狀之一的患者，即下列至少一項(xiàng)為陽(yáng)性：（1）每日感到不能忍受的眼干，持續(xù)3 個(gè)月以上；（2）眼中反復(fù)沙礫感；（3）每日需用人工淚液3 次或3 次以上；（4）每日感到口干，持續(xù)3 個(gè)月以上；（5）吞咽干性食物需要頻繁飲水幫助。排除標(biāo)準(zhǔn)：可能有重疊的臨床表現(xiàn)或干擾診斷的試驗(yàn)結(jié)果，出現(xiàn)下述疾病，應(yīng)予排除：（1）頭頸部放療史；（2）活動(dòng)性丙型肝炎病毒感染；（3）獲得性免疫缺陷綜合征；（4）結(jié)節(jié)病；（5）淀粉樣變性；（6）移植物抗宿主病；（7）IgG4 相關(guān)疾病。滿足上述入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)者，且下述五項(xiàng)評(píng)分總和≥4 分者診斷為pSS：（1）唇腺灶性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，且灶性指數(shù)≥1 個(gè)灶/4 mm2，計(jì)3 分；（2）血清抗SSA 抗體陽(yáng) 性，計(jì)1 分；（3）至 少 單 眼OSS≥5 分 或Van Bijsterveld 評(píng)分≥4 分，計(jì)1 分；（4）至少單眼Schirmer試驗(yàn)≤5 mm/5 min，計(jì)1 分；（5）未刺激的全唾液流率≤0.1 mL/min，計(jì)1 分。當(dāng)診斷為患者同時(shí)診斷為SH 且臨床資料完整，排除繼發(fā)性高血壓、感染、腫瘤；排除其他自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、自身免疫性肝炎、橋本甲狀腺炎等。排除惡性腫瘤、急慢性感染和感染性疾病后納入SH 組，SH 患者均進(jìn)行檢測(cè)了C 反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、C4 以及相關(guān)自身免疫性抗體（包括ANA、抗-SSA、抗-SSB、 RO-52）。

根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，選擇8 例原發(fā)性高血壓無(wú)SS 的患者為EH 組和8 例高血壓伴SS 患者為SH 組，收集納入患者生化指標(biāo)。

1.3 血液樣本采集

收集患者的血清樣本，在室溫放置凝結(jié)，在4 ℃下以3 000 r/min 離心15 min。離心后取出血清，在-80 ℃環(huán)境保中存?zhèn)溆茫?/p>

1.4 DIA 蛋白定量

1.4.1 主要試劑 試劑（盒）：SDT 緩沖液：4%十二烷基硫酸鈉，100 mmol/L 二硫蘇糖醇，150 mmol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl） pH 8.0；尿酸緩 沖 液：8 mol/L 尿 素，150 mmol/L Tris-HCl pH 8.5；BCA 蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒；碘乙酰胺（100 mmol/L 吲哚-3-乙酸在尿酸緩沖液中）；緩沖液A （10 mmol/L HCOONH4， 5% ACN， pH 10.0）；緩 沖 液B（10 mmol/L HCOONH4，85% ACN，pH 10.0）。

1.4.2 樣品制備及蛋白質(zhì)酶解 取血清樣本，加入SDT 緩沖液，14 000g離心20 min，獲得上清液，使用BCA 蛋白質(zhì)分析試劑盒進(jìn)行蛋白定量。每個(gè)樣本 取200 μg 逐 步 加 入30 μL SDT 緩 沖 液，100 mmol/L 的碘乙酰胺，UA 緩沖液及TEAB 緩沖液獲得蛋白懸液。后加入蛋白酶酶解獲得多肽。

1.4.3 反相（RP）色譜法分離多肽 采用Agilent 1260 infinity IIHPLC 進(jìn) 行RP 色 譜 分 離。用 緩 沖 液A 稀釋肽混合物，并上樣于液相色譜柱（XBridge peptide BEH C18 Column， 130?，5 μm， 4.6 mm×100 mm）。多肽以1 mL/min 的流速洗脫，液相梯度：0%～7% B，5 min，7%～40% B，5～40 min，40%～100%B，45～50 min， 100% B，50～65 min。通過(guò)測(cè)量214 nm 吸光度監(jiān)測(cè)洗脫過(guò)程，每1 分鐘收集一次，收集的多肽在45 ℃的高速真空中干燥，干燥后的樣本在0.1%的甲酸中重新溶解，并合并成12 個(gè)組分。

1.4.4 DDA 及DIA 分析 將2 μL 10×iRT 多肽加入6 μL 多肽溶液中。然后將混合物注入Q-Exactive HF-X（Thermo Fisher Scientific）中，并用梯度緩沖液B（80%乙腈和0.1%甲酸）以300 nL/min 的流速分離。

DDA 分析質(zhì)譜儀參數(shù)設(shè)置如下：（1）MS：掃描范圍（m/z）=350～1 500；分辨率=60 000；AGC 目標(biāo)=3E6；最大離子注入時(shí)間=50 ms；包括電荷狀態(tài)＝2～7；過(guò)濾動(dòng)態(tài)排除：排除持續(xù)時(shí)間=30 s；（2）dd-MS2：隔 離 窗 口=1.6m/z，分 辨 率=15 000；AGC 目標(biāo)=1E5；最大離子注入時(shí)間=45 ms；NCE=28%。

DIA 分析質(zhì)譜儀參數(shù)設(shè)置如下：（1）MS：掃描范圍（m/z）=350～1 500；分辨率=60 000；AGC 目標(biāo)=3E6；最大離子注入時(shí)間=50 ms；（2）DIA：分辨率=30 000；AGC 目標(biāo)=1E6；最大離子注入時(shí)間=AUTO；NCE=28%。 原 始 數(shù) 據(jù) 由SpectrAert Pulsar X（版本12，Biognosys AG）處理和分析，參數(shù)為BGS 出廠設(shè)置，Q-value（FDR）閾值為1%。

1.5 生物信息學(xué)分析

采用DIA 蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。在SH、EH 組中選擇倍數(shù)變化（FC）＞1.20 或＜0.83 且P＜0.05 的蛋白質(zhì)作為差異表達(dá)蛋白質(zhì)（FC＞1.2 為上調(diào)蛋白）。利用GO 和KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/summary.jsp）對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行生信學(xué)分析。

FDR 用于評(píng)估GO 項(xiàng)或KEGG 途徑的差異蛋白富集度的顯著水平。使用String 據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI）。使用Cytoscape 進(jìn)行模塊化分析，得到得分最高的核心模塊。最后結(jié)合DIA 定量結(jié)果和KEGG 通路分析結(jié)果，從核心模塊包含的蛋白質(zhì)中篩選出關(guān)鍵蛋白質(zhì)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 軟件23.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Origin和Excel 軟件建立曲線圖。正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用t檢驗(yàn)，用（±s）表示。非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基線特征

EH 患者平均年齡（45.9±7.1）歲，SH 患者平均年 齡（53.8±11.7）歲，差 異 無(wú) 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（P＞0.05），兩組的基線數(shù)據(jù)如表1 所示。

表1 研究對(duì)象的基線特征Tab 1 Baseline characteristics of the subjects

2.2 血清中差異表達(dá)蛋白質(zhì)

EH 組與SH 組差異表達(dá)的蛋白有35 個(gè)，其中32 個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，3 個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）（圖1、2）。

圖1 差異表達(dá)蛋白的火山圖Fig 1 Volcano map of differentially expressed proteins

圖2 差異表達(dá)蛋白熱圖Fig 2 Heat map of differentially expressed protein

2.3 GO 富集度分析

分析結(jié)果提示SH 組與EH 組相比，差異表達(dá)蛋白在細(xì)胞組分中主要位于細(xì)胞外區(qū)域，在生物過(guò)程集中在血小板減少、免疫應(yīng)答、信號(hào)通路、補(bǔ)體激活（經(jīng)典途徑）、蛋白水解、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、絲氨酸型內(nèi)肽酶活性和抗原結(jié)合等過(guò)程中。分子功能中主要集中在抗原結(jié)合和絲氨酸型內(nèi)肽酶活性過(guò)程。GO 分析結(jié)果如圖3 所示。

圖3 差異蛋白的GO 富集分析Fig 3 GO enrichment analysis of differential proteins

2.4 差異表達(dá)蛋白KEGG 途徑的富集分析

對(duì)上述差異蛋白進(jìn)行KEGG 信號(hào)通路富集分析，相關(guān)差異蛋白在以下幾個(gè)方面顯著富集：補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和朊病毒病。KEGG分析的結(jié)果如圖4 所示。

圖4 差異表達(dá)蛋白KEGG 通路的富集分析Fig 4 Enrichment analysis of differentially expressed protein KEGG pathway

2.5 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)和模塊化分析

為了更好地預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用，本課題組構(gòu)建了PPI 網(wǎng)絡(luò)來(lái)識(shí)別最重要的蛋白質(zhì)。使用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇蛋白質(zhì)相互作用得分為≥0.4的蛋白質(zhì)節(jié)點(diǎn)，并刪除未連接的節(jié)點(diǎn)。PPI 圖是用Cytosscape 繪制的。使用MCODE 插件對(duì)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，并根據(jù)MCODE 聚類條件（Score=6.667）選擇得分最高的核心模塊。如圖5所示，紅色圓圈代表核心模塊中的蛋白質(zhì)。與其他蛋白質(zhì)相比，這7 種蛋白質(zhì)在整個(gè)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)中具有更強(qiáng)的相互作用。表2 總結(jié)了這七種蛋白質(zhì)在兩組之間的差異倍數(shù)。VWF、A2M 和F9 在補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)途徑中均顯著富集，且兩組間表達(dá)差異顯著。結(jié)合DIA 定量結(jié)果和KEGG 通路分析結(jié)果，我們篩選出與高血壓合并SS 相關(guān)的3 個(gè)關(guān)鍵蛋白：血管性血友病因子（Von Willebrand factor，VWF）， α-2-巨 球 蛋 白（Alpha-2-Macroglobulin，A2M）， 凝血因子Ⅸ（FⅨ，F(xiàn)9）。

圖5 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)和模塊化分析Fig 5 Protein interaction networks and modular analysis

表2 兩組中7 種蛋白質(zhì)差異表達(dá)總結(jié)Tab 2 Summary of differential expression of 7 fold protein between the two groups

3 討 論

本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定了SH 患者與EH 患者血清差異表達(dá)蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組間共檢測(cè)出35 個(gè)差異表達(dá)蛋白。其中32 個(gè)蛋白上調(diào)，3 個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。 Li 等［14］發(fā)現(xiàn)SS 患者淚液中防御素α1、簇蛋白上調(diào)、乳轉(zhuǎn)鐵蛋白表達(dá)下調(diào)的表達(dá)。Liao等［15］使用蛋白組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)與健康人群相比，SS 患者的差異表達(dá)蛋白存在331 個(gè)下調(diào)蛋白和289 個(gè)上調(diào)蛋白。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1 和CD40 配體的表達(dá)下調(diào)，從而豐富了炎癥相關(guān)途徑。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子1-α/β（STAT1）的表達(dá)上調(diào)并富集Ⅰ型干擾素信號(hào)通路和IL-27 介導(dǎo)的信號(hào)通路。KEGG富集分析顯示，相關(guān)差異蛋白在補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、SLE 和朊病毒疾病中顯著富集。其中VWF、A2M和F9 的差異表達(dá)更為顯著。蛋白質(zhì)（VWF、A2M和F9）和KEGG 途徑（補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)）在以往的SS 蛋白質(zhì)組學(xué)研究中沒有發(fā)現(xiàn)，它們可能是高血壓人群發(fā)生SS 的重要蛋白質(zhì)和生物通路。

VWF 是一種由內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞合成和釋放的大分子糖蛋白，是一種重要的血漿成分，在血小板聚集和血栓形成中發(fā)揮重要作用［16］。此外VWF 是內(nèi)皮細(xì)胞識(shí)別的標(biāo)志物，其在循環(huán)中的釋放和水平被認(rèn)為是內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的主要指標(biāo)［17］。有研究發(fā)現(xiàn)老年高血壓合并動(dòng)脈粥樣硬化患者血清VWF 水平升高［18］。本研究發(fā)現(xiàn)SH 患者的血清VWF 水平顯著高于EH 患者，提示SH 患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度更嚴(yán)重。雖然本研究沒有證實(shí)SH 患者的內(nèi)皮功能障礙發(fā)生在血壓升高之前，但筆者認(rèn)為VWF 相關(guān)的內(nèi)皮功能障礙在SH 患者的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。如果在降壓治療的基礎(chǔ)上檢測(cè)SH 患者的VWF，并進(jìn)一步調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，SH 患者的預(yù)后將得到改善。

A2M 是一種細(xì)胞外大分子，主要以其作為廣譜蛋白酶抑制劑的作用而聞名。同時(shí)A2M 可結(jié)合多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-6，血小板衍生生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子，腫瘤壞死因子-α等，并在多種細(xì)胞因子相互作用和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用［19］。A2M 可以通過(guò)中和纖溶酶、纖溶酶原激活劑和活化的蛋白C 來(lái)增強(qiáng)促凝血特性［20］。促凝血?jiǎng)┨匦院吐匝装Y與血管危險(xiǎn)因素、動(dòng)脈粥樣硬化和血栓栓塞癥有關(guān)。

Shimomura 等［21］對(duì)102 名有中風(fēng)病史或任何心血管危險(xiǎn)因素的患者進(jìn)行了橫斷面分析，發(fā)現(xiàn)在有心血管危險(xiǎn)因素的患者中，血清A2M 水平與血管內(nèi)皮功能獨(dú)立相關(guān)，其血清水平可反映慢性卒中患者或有心血管危險(xiǎn)因素患者的血流介導(dǎo)擴(kuò)張對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響。本研究數(shù)據(jù)表明高血壓合并SS患者的A2M 水平顯著高于EH 患者。A2M 與炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮功能有關(guān)，在高血壓合并自身免疫性疾病中的作用值得進(jìn)一步探討。此外，A2M 的促凝血特性提示應(yīng)更密切地監(jiān)測(cè)SH 患者的凝血功能，以預(yù)防血栓栓塞癥的發(fā)生，這應(yīng)有助于改善患者的預(yù)后。

凝血因子Ⅸ（FⅨ，F(xiàn)9）是一種依賴維生素K 的凝血蛋白，在內(nèi)源性凝血途徑中起關(guān)鍵作用［22］。FⅨ是蛋白酶FⅨA 的前體，激活的FⅦ（FⅦIa）是其輔因子。與缺乏FⅨ或FⅦ相關(guān)的嚴(yán)重出血性疾病（血友病）表明它們?cè)谥寡械闹匾Ｑ芯勘砻鳎梢员徽J(rèn)為是一種內(nèi)部炎癥。高凝狀態(tài)伴隨著凝血因子的增加，纖維蛋白凝塊的過(guò)量產(chǎn)生是細(xì)胞活化的原因，從而導(dǎo)致細(xì)胞因子、黏附分子等多種炎癥介質(zhì)的增加［23］。此外，高凝狀態(tài)引起的血栓形成、補(bǔ)體活化、血小板活化等直接高凝結(jié)果也容易導(dǎo)致炎癥［24］。已有研究報(bào)道，高血漿FⅦ水平與靜脈血栓栓塞癥、心肌梗死和中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)略有增加有關(guān)［25，26］。本研究數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)Ⅶ可能通過(guò)凝血途徑參與SS 高血壓的炎癥過(guò)程。另一方面，SH 患者發(fā)生血栓的風(fēng)險(xiǎn)高于EH 患者，預(yù)后較差。

本研究存在一定的局限性。首先，本研究患者數(shù)量有限。其次，本研究只是相對(duì)定量的初步蛋白質(zhì)篩選研究，樣本量相對(duì)較小，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡來(lái)驗(yàn)證差異蛋白。

綜上所述，本課題組通過(guò)DIA 對(duì)SH 和EH 患者的外周血樣本進(jìn)行了蛋白質(zhì)表達(dá)差異檢測(cè)。共篩選出35 個(gè)差異蛋白。結(jié)合生物信息學(xué)分析結(jié)果，筆者認(rèn)為VWF、A2M 和F9 蛋白可能在高血壓患者發(fā)生SS 中發(fā)揮作用。然而，仍需要進(jìn)一步進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證性研究來(lái)驗(yàn)證這一結(jié)果。

作者貢獻(xiàn)度說(shuō)明：

馬慧敏：負(fù)責(zé)文稿的設(shè)計(jì)和撰寫；阿依古再麗·艾合買提，朱晴，蔡昕添，夏衣熱·艾爾肯，吳婷，王夢(mèng)卉：負(fù)責(zé)文章相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)分析；李南方，張德蓮：負(fù)責(zé)文稿的修改和審校。

所有作者聲明不存在利益沖突關(guān)系。