短短芽胞桿菌分支酸合成酶基因BbaroC的鑒定及轉錄因子調控分析

摘 要：分支酸合成酶AroC是莽草酸途徑中芳香族化合物合成的關鍵酶，探明短短芽胞桿菌aroC基因的特征及轉錄調控因子可為短短芽胞桿菌作用機理研究奠定基礎。從短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX中克隆了aroC基因，進行生物信息學分析和轉錄因子預測。短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX中aroC基因序列長度為1164 bp，GenBank登錄號為OR475562。短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX與Brevibacillus brevis NBRC 100599的aroC基因序列同源性最高，為98.88%，與Brevibacillus brevis HNCS-1的AroC氨基酸序列同源性最高，為100%；其編碼的蛋白為親水性蛋白，無信號肽，定位于細胞質。靶向BbaroC的轉錄因子共有23個，分別來自10個物種，Escherichia coli（Strain K12 MG1655）和Bacillus subtilis（Strain 168）分別預測到12個和3個轉錄因子。BbaroC在短短芽胞桿菌抑菌活性物質產生中可能發揮著重要作用，這為其在農業上的廣泛應用提供依據。

關鍵詞：短短芽胞桿菌；分支酸合成酶；氨基酸；莽草酸途徑；轉錄因子

中圖分類號：S 476.1 ""文獻標志碼：A"" 文章編號：0253-2301（2024）01-0008-10

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2024.01.002

Identification of the Chorismic Acid Synthetase Gene BbaroC in Brevibacillus brevis andAnalysis of the Transcription Factor Regulation

Abstract： The chorismic acid synthetase AroC is the key enzyme for the synthesis of aromatic compounds in the shikimic acid pathway. Identifying the characteristics of aroC gene in Brevibacillus brevis and its transcriptional regulators will lay a foundation for the study of the mechanism of action of Brevibacillus brevis. The aroC gene was cloned from Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX， and then the bioinformatics analysis and the prediction of transcription factor were carried out. The sequence length of aroC gene in Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX was 1164 bp， and the GenBank accession number was OR475562. The aroC gene sequence of Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX had the highest homology with that of Brevibacillus brevis NBRC 100599， which was 98.88%. The amino acid sequence of AroC had the highest homology with Brevibacillus brevis HNCS-1， which was 100%. Its encoded protein was a hydrophilic protein without signal peptide， which was located in the cytoplasm. A total of 23 transcription factors targeting BbaroC were identified from 10 species， with 12 and 3 transcription factors predicted from Escherichia coli （Strain K12 MG1655） and Bacillus subtilis （Strain 168）， respectively. BbaroC may play an important role in the production of antibacterial active substances of Brevibacillus brevis， which would provide basis for its wide application in agriculture.

Key words： Brevibacillus brevis； Chorismic acid synthetase； Amino acid； Shikimic acid pathway； Transcription factor

短短芽胞桿菌Brevibacillus brevis具有細胞壁結構簡單，分泌蛋白能力強，可形成抗逆性強的芽孢等優點，為其在生物防治、環境治理及工業生產等方面的廣泛應用提供了便利[1-4]。為了深入研究短短芽胞桿菌的作用機理，人們越來越關注其功能基因的分析[5]。目前關于短短芽胞桿菌功能基因的研究主要包括短桿菌酪肽生物合成基因[6]、耐堿性木聚糖酶基因[7]、超氧化物歧化酶基因[8]和幾丁質酶基因[9]等。隨著基因組測序技術的發展，越來越多的功能基因被挖掘出來[5，10]。周向平等[11]通過生物信息學工具從短短芽胞桿菌B011中預測得到了10個spo0E類似基因，并進行了表達分析。短短芽孢桿菌X23參與調控伊短菌素合成積累的edeB基因全長為771 bp，編碼256個氨基酸。在各個培養時間點表達模式為先升高后降低，且在30 h時表達水平最高[12]。

在微生物中，莽草酸途徑中的分支酸合成酶AroC是芳香族化合物合成的關鍵酶，可以合成很多物質的中間體，如苯丙氨酸、吲哚及酪氨酸等，在微生物的生長及活性物質合成中發揮著重要作用[13-14]。在大腸桿菌中過表達aroB、aroD、aroE、aroL、aroA、aroC和ubiC等合成4-羥基苯甲酸的關鍵基因，可提高4-羥基苯甲酸產量[15]。地衣芽胞桿菌中aroC、aroD和aroK基因是酪氨酸合成的限速步驟，增強地衣芽胞桿菌攝氧能力可以提升胞內aroC與aroD基因的表達水平，進而提高地衣芽胞桿菌合成酪氨酸的能力，酪氨酸單位菌體產量從71 mg·L-1提升至100 mg·L-1，提升了40.8%[16]。短短芽胞桿菌也可以產生很多具有抑菌活性的芳香族化合物[17]，但目前關于其途徑中功能基因研究較少。

短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX菌株是從福建省永泰縣的西瓜根際土壤分離得到，該菌株生長速度快，抑菌譜廣[18]，其對青枯雷爾氏菌Ralstonia solanacearum、尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum和大腸桿菌Escherichiacoli等均具有較強抑菌活性[2，19]。前期研究表明，該菌株的主要抑菌活性物質為羥苯乙酯，推測其很可能是通過莽草酸途徑合成[19]。因此，本研究在對該菌株進行全基因組測序的基礎上[20]，對其莽草酸途徑中的分支酸合成酶基因BbaroC進行生物信息學分析，并進行轉錄因子預測分析，研究結果可為短短芽胞桿菌作用機理研究奠定基礎，亦可為其在農業上的廣泛應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX為本課題組分離并長期保存菌株。LB液體培養基：NaCl 5.0 g·L-1、酵母浸膏5.0 g·L-1、胰蛋白胨10.0 g·L-1，pH 7.0～7.2，121℃滅菌20 min。配制相應固體培養基時，加入17 g·L-1瓊脂粉。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌株培養 在LB培養基上劃線接種甘油保藏的短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX，30℃培養48 h后，挑取單菌落于LB液體培養基中，30℃、170 r·min-1振蕩培養48 h。

1.2.2 短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX的BbaroC基因克隆 采用Coolaber真菌RNA快速提取試劑盒RE781提取短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX的RNA，并進行cDNA合成（Takara PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒RR047A），根據短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX基因組測序中獲得BbaroC基因，設計引物進行BbaroC基因克隆，引物為BbaroC-F（5′-ATGCGTTACTTGACAGCAGG-3′）和BbaroC-R（5′- TTAGAATTTCTCCGTGTACG-3′）。PCR反應體系（25 μL）：2×Taq Mix 25 μL，上下游引物各1 μL，cDNA 1 μL，去離子水補足至25 μL。PCR擴增條件：94℃預變性5 min，94℃變性30 s，55℃退火60 s，72℃延伸90 s，共30個循環，72℃延伸10 min。

1.2.3 BbaroC基因序列分析 將BbaroC序列在NCBI網站進行BLAST比對（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi？PROGRAM=blastn amp; PAGE_TYPE=BlastSearch amp; LINK_LOC=blasthome），下載同源性較高菌株的核酸序列和氨基酸序列，利用DNAMAN進行氨基酸多序列比對。BbaroC基因采用ProtParam網站（https：//web.expasy.org/protparam）查詢BbaroC氨基酸數目、分子量、理論等電點和親水性。利用SignalP-6.0網站（https：//services.healthtech.dtu.dk/services/SignalP-6.0/）預測BbaroC信號肽。利用PSORTbv.3.0網站（https：//www.psort.org/psortb/）預測亞細胞定位。采用SOPMA軟件（https：//npsaprabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl？page=/NPSA/npsa_sopma.html）對其蛋白質的二級結構預測。采用SWISS-MODEL軟件（http：//swissmodel.expasy.org/）對蛋白質的三級結構預測。

1.2.4 BbaroC保守結構域和系統進化分析 采用NCBI-CDD進行BbaroC編碼蛋白保守結構域預測。從EnsemblBacteria下載獲得不同物種AroC氨基酸序列，以MEME進行蛋白質保守基序分析，設置motif數為10，通過MEGA11構建系統進化樹，以ClustalW進行序列比對，采用Neighbor-joining方法構建，設置bootstrap值為1000，通過TBtools v1.120軟件作圖。

1.2.5 BbaroC轉錄因子預測 從短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX基因組中預測啟動子，預測得到的序列GCAAACGTTTGTCACTTTTGTATTT-CCACGGCGTACTAGGTATGATATTATAGCG-CTTAAAAGTGATAAAGGACAGCACCCCGAA-AAGAGTG在PRODORIC（https：//www.prodoric.de/vfp/）預測靶向BbaroC的轉錄因子。

2 結果與分析

2.1 短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX分支酸合成酶基因BbaroC的克隆與生物信息學分析

從短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX中克隆獲得aroC基因序列，命名為BbaroC，序列長度為1164 bp，GenBank登錄號為OR475562。短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX與11株模式菌株aroC基因核苷酸序列同源性在94%以上，與Brevibacillus brevis NBRC 100599的aroC基因序列同源性最高，為98.88%（表1）。短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX與11株模式菌株AroC氨基酸序列同源性在97%以上，與Brevibacillus brevis HNCS-1的AroC氨基酸序列同源性最高，為100%（表1、圖1）。

BbaroC基因編碼387個氨基酸，分子量為42.52 kD，理論等電點為5.66。BbaroC均為親水性蛋白，無信號肽，不穩定系數分別為51.15，為不穩定蛋白。通過CELLO和iPSORT進行在線亞細胞定位預測，結果均定位于細胞質。磷酸化修飾分析顯示BbaroC蛋白的磷酸化修飾位點數量為31個，兩者的修飾方式均主要發生在絲氨酸（Ser）和蘇氨酸（Thr）位點上，還有少數酪氨酸（Tyr）修飾位點（圖2）。

2.2 BbaroC蛋白結構域和系統進化分析

BbaroC蛋白具有Chorismate synthase保守結構域（圖3A）。基于不同物種氨基酸序列，通過MEME進行保守基序預測，獲得10個預測結果，最保守的3個基序見圖3B～3D。系統進化樹分析結果顯示，不同物種AroC蛋白被劃分為3個分支，其中短短芽胞桿菌和兩歧雙歧桿菌形成一個分支，克氏梭菌自成一個分支，其余5種菌形成一個分支（圖4A）。結合保守基序的結構特征發現，菠蘿泛菌、大腸桿菌、爭論貪噬菌和費氏中華根瘤菌具有10個保守基序，阿氏浮絲藻含有9個保守基序，而克氏梭菌、兩歧雙歧桿菌和短短芽胞桿菌預測到的保守基序為8個。由進化樹和保守結構可知短短芽胞桿菌BbaroC蛋白與兩歧雙歧桿菌具有較高的同源性（圖4B）。

2.3 BbaroC二級結構和三級結構

BbaroC二級結構元件主要包括157個氨基酸殘基組成α-螺旋（α-helix）、59個氨基酸殘基組成延伸鏈（extended strand）、28個氨基酸殘基組成β-轉角（β-turn）和143個氨基酸殘基組成無規則卷曲（random coil）（圖5A）。利用SWISS-MODEL在線程序對Glu4的三級結構進行同源建模，發現其三級結構包含無規卷曲、α-螺旋和β-轉角等二級結構元件（圖5B）。

2.4 靶向BbaroC的轉錄因子預測分析

BbaroC上游啟動子序列的轉錄因子分析顯示，靶向BbaroC的轉錄因子共有23個（表2）。這些轉錄因子來自10個物種，Escherichia coli（Strain K12 MG1655）和Bacillus subtilis（Strain 168）分別預測到12個和3個轉錄因子，Pseudomonas aeruginosa（Strain PAO1）、Salmonella enterica和Vibrio cholerae（Strain 10432-62）均預測到2個轉錄因子，其余5個物種Clostridioides difficile（Strain 630）、Dinoroseobacter shibae、Staphylococcus aureus（Strain 533 R4）、Synechococcus sp.（Strain PCC 7002）、Yersinia pestis只預測到1個轉錄因子。其中，CysB在Salmonella enterica和Escherichia coli（Strain K12 MG1655）都有預測到，CRP在Yersinia pestis、Vibrio cholerae（Strain 10432-62）和Escherichia coli（Strain K12 MG1655）也都有預測到，其余21個轉錄因子僅在單一物種中預測到。靶向aroC的轉錄因子氨基酸數在93～341個，匹配度在0.71～0.96。

3 討論

莽草酸途徑又稱分支酸途徑，廣泛存在于細菌、真菌和植物等多種生物中，是生物合成芳香族氨基酸（色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸等）和各種次級代謝物（木質素、黃酮類和芳香化合物等）的重要途徑[21]。莽草酸在莽草酸激酶的作用下逐步形成5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸，而5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸又在分支酸合成酶的催化下生成分支酸，然后從分支酸開始合成各種中間體[22-23]。因此，分支酸合成酶在該途徑中至關重要。莽草酸途徑中的AroC可以生成遲緩愛德華氏菌生物膜所必需的吲哚[14]。ppsA、tktA、aroA、aroB、aroC、aroGfbr和pheAfbr的整合是大腸桿菌MG1655高產苯丙氨酸所需的最小基因組合[24]。但目前關于莽草酸途徑中分支酸合成酶的研究在大腸桿菌和遲緩愛德華氏菌Edwardsiella tarda中報道較多[25]，在短短芽胞桿菌中未見其相關研究報道。

短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX的BbaroC序列長度為1164 bp，比大腸桿菌略長[26]，其氨基酸序列與短短芽胞桿菌模式菌株的同源性都很高，與Brevibacillus brevis HNCS-1的同源性最高[4]，說明aroC基因在短短芽胞桿菌中高度保守。進一步分析表明，BbaroC編碼的氨基酸數量多于構巢曲霉Aspergillus nidulans[27]，但少于大腸桿菌和傷寒桿菌Salmonella typhi[28]，其編碼蛋白同紫蘇的一樣均為親水性蛋白，無信號肽[29]，推測該蛋白不是分泌蛋白。短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX的BbaroC編碼蛋白的二級結構分析結果表明，其以α-螺旋和無規則卷曲為主，推測α-螺旋和無規則卷曲在其二級結構中扮演著重要角色[30]，進一步對其三級結構的推測，可為發掘該基因編碼蛋白的潛在功能提供參考依據。

轉錄調控因子是控制基因表達的重要分子，直接影響基因表達程度，調控相關通路[31]。BbaroC上游啟動子序列的轉錄因子分析顯示，靶向BbaroC的轉錄因子共有23個，其中，CysB在Salmonella enterica和Escherichia coli（Strain K12 MG1655）均預測到，是參與半胱氨酸合成的關鍵轉錄調節因子，可以調節細菌中的氨基酸代謝途徑和硫代謝途徑等[32-33]。CcpN是枯草芽孢桿菌中的一種轉錄抑制因子，它與gapB和pckA的啟動子區結合，在葡萄糖存在時下調其表達[34]。CcpN的敲除也會提高氨基酸轉運能力，提高地衣芽孢桿菌DW2桿菌肽的合成效率[35]。FnrL和NarL均為全局轉錄因子，FnrL作為能夠感應環境中氧濃度的轉錄調控因子，能參與調控細菌葉綠素、血紅素和類胡蘿卜素合成等一系列的基因表達[36]。NarL蛋白是硝酸鹽/亞硝酸鹽應答調節因子，屬于LuxR家族。NarL對細胞在高濃度硝酸鹽或亞硝酸鹽存在時涉及的厭氧電子傳遞及發酵相關基因進行調控[37]。也有研究表明，FnrL和NarL全局轉錄因子在許多細菌的脫氮除磷調節機制中發揮重要作用[38]。轉錄因子Spo0A、AbrB、CytR和CsgD均參與控制生物膜的形成，它們調節與細胞基質產生相關的基因表達。與野生株相比，枯草芽胞桿菌WT168的abrB突變株生物被膜形成能力增強，spo0A突變株前36 h生物被膜形成能力急劇下降，之后生物被膜形成能力急劇上升[39]。枯草芽胞桿菌DF菌體快速生長時，轉錄調控因子AbrB阻遏sigH的表達，使Spo0A的磷酸化處于較低水平。相反Spo0A的磷酸化增強，可抑制abrB的表達、使sigA脫阻遏，促進spo0A基因表達。蘋果酸補料時，abrB表達下調了65.9%、sigA表達上調了3.45倍，間接提高了Spo0A的磷酸化水平[40]。CytR是細菌抑制因子LacR家族成員之一，在大腸桿菌中至少參與對13個基因的調控，與生物膜的形成有關[41]。CsgD作為重要的調控因子，與細胞外聚合物形成、毒素產生、細胞粘附等諸多生理過程有關[42]。在生物膜形成過程中，CsgD可以激活胞外多糖csgB和csgA合成基因以及胞外纖維素csgC和csgE合成基因[43]。本研究預測的轉錄調控因子多與氨基酸、桿菌肽及生物膜合成等有關，多個轉錄調控因子很可能相互協作，調控BbaroC表達，其在短短芽胞桿菌中的具體調控機制有待進一步研究。

參考文獻：

[1]CAROLINE B， IZABELA D M， ROSIANA B， et al.Activity of Brevibacillus brevis strain LABIM17 against Xanthomonas euvesicatoria pv.euvesicatoria and control of bacterial spot of tomato [J].Journal of Plant Diseases and Protection， 2023， 130（4）： 921-927.

[2]CHE J M， LIU B， LIU G H， et al.Induced mutation breeding of Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX for improving ethylparaben production and its application in the biocontrol of Lasiodiplodia theobromae[J].Posthavest Biology and Technology， 2018， 146： 60-67.

[3]NEHA T， DEENAN S， GOPAL J S.Degradation of polyethylene microplastics through microbial action by a soil isolate of Brevibacillus brevis[J].Polymer Degradation and Stability， 2023， 215：110436.

[4]YANG W B， YANG H， BAO X C et al.Brevibacillus brevis HNCS-1：a biocontrol bacterium against tea plant diseases[J].Frontiers in Microbiology， 2023， 14：1198747.

[5]LARISSA C M D， MANOEL G T， PAULO J O D， et al.Draft Genome Sequence of Brevibacillus brevis LABIM17， a biotechnologically important antimicrobial-producing bacterium[J].Microbiology Resource Announcements， 2022： e0000622.

[6]MOHAMED A M， PETER Z， GREGOR C， et al.Identification of the promoter for a peptide antibiotic biosynthesis gene from Bacillus brevis and its regulation in Bacillus subtilis[J].Journal of Bacteriology，1987：2215-2222.

[7]胡春霞， 陸平， 李衛芬， 等.短芽孢桿菌耐堿性木聚糖酶（xylB）的分子生物學研究[J].食品與生物技術學報， 2009， 28（1）： 86-90.

[8]車建美，馬桂美，劉波，等.短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX超氧化物歧化酶基因的克隆及原核表達[J].熱帶作物學報，2017，38（8）： 1501-1506.

[9]黃丹丹，車建美，劉波，等.短短芽胞桿菌FJAT-0809-GLX幾丁質酶基因（chiD）的克隆與原核表達[J].熱帶作物學報， 2014， 35（9）： 1757-1763.

[10]BOMIN K， SEOK Y K， WOO J H， et al.Genome sequence of Brevibacillus brevis HK544， an antimicrobial bacterium isolated from soil in Daejeon， South Korea[J].Microbiology Resource Announcements，2021，10（31）：e0041721.

[11]周向平，王運生，陳武，等.短短芽胞桿菌B011基因組中芽胞形成調控基因spo0E的鑒定與表達分析[J].中國生物防治學報，2023，39（4）： 895-903.

[12]杜杰， 蔡海林， 黃彬彬， 等.短短芽孢桿菌X23中edeB基因的克隆、原核表達及轉錄時相分析[J].激光生物學報， 2023， 32（02）： 146-152.

[13]冷聰.Streptococcus thermophilus MN-ZLW-002培養過程中關鍵氨基酸代謝路徑蛋白表達變化研究[D].哈爾濱：東北農業大學， 2019.

[14]LIU R， GAO D， FANG Z， et al.AroC， a chorismate synthase， is required for the formation of Edwardsiella tarda biofilms[J].Microbes Infect， 2022， 24（5）：104955.

[15]郭曉昀.大腸桿菌共培養技術的研究及其在苯酚等化合物合成中的應用[D].廈門：廈門大學， 2023.

[16]許銀彪， 李由然， 石貴陽.地衣芽胞桿菌發酵合成L-酪氨酸以及莽草酸途徑代謝節點的研究[J].食品與發酵工業， 2022， 48（ 7）：1-7.

[17]車建美，陳崢，史懷，等.龍眼保鮮功能微生物FJAT-0809-GLX（Brevibacillus brevis）功能成分的分析[J].福建農業學報， 2012， 27（10）： 1106-1111.

[18]葛慈斌， 劉波， 藍江林， 等.生防菌JK-2對尖孢鐮刀菌抑制特性的研究[J].福建農業學報， 2009， 24（1）： 29-34.

[19]CHE J M， LIU B， CHEN Z， et al.Identification of ethylparaben as the antimicrobial substance produced by Brevibacillus brevis FJAT-0809-GLX[J].Microbiological Research， 2015， 172： 48-56.

[20]CHE J M， LIU B， LIN Y Z， et al.Draft genome sequence of biocontrol bacterium Brevibacillus brevis strain FJAT-0809-GLX[J].Genome Announcements， 2013， 1（2）： e00160-13.

[21]MORROW G W.The shikimate pathway： Biosynthesis of phenolic products from shikimic acid[M].New York： Oxford University Press， 2016.

[22]YOKOYAMA R， KLEVEN B， GUPTAA，et al.3-Deoxy-D-arabino-heptulosonate 7-phosphoate synthase as the gatekeeper of plant aromatic natural product biosynthesis[J].Current Opinion in Plant Biology，2022， 67：102219.

[23]JIANG M， ZHANG H.Engineering the shikimate pathway for biosynthesis of molecules with pharmaceutical activities in E.coli[J].Current Opinion in Biotechnology， 2016，42：1-6.

[24]KOMA D， KISHIDA T， YOSHIDA E， et al.Chromosome engineering to generate plasmid-free phenylalanine-and tyrosine-overproducing Escherichia coli strains that can be applied in the generation of aromatic-compound-producing bacteria[J].Applied and Environmental Microbiology，2020， 86（14）： e00525.

[25]DING Q， YE C.Microbial engineering for shikimate biosynthesis[J].Enzyme and Microbial Technology， 2023，170：110306.

[26]李永輝.芳香族氨基酸生物合成代謝途徑調控研究[D].北京：中國人民解放軍軍事醫學科學院， 2003.

[27]KRAPPMANN S，HELMSTAEDT K，GERSTBERGER T，et al.The aroC gene of Aspergillus nidulans codes for a monofunctional， allosterically regulated chorismate mutase[J].J Biol Chem，1999，274（32）： 22275-22282.

[28]CHARLES I G， LAMB H K， PICKARD D， et al.Isolation， characterization and nucleotide sequences of the aroC genes encoding chorismate synthase from Salmonella typhi and Escherichia coli[J].J Gen Microbiol，1990，136（2）：353-358.

[29]韓博倫， 肖清鐵， 文歡歡， 等．紫蘇分支酸合成酶PeCS基因克隆、生物信息學及原核表達分析[J].分子植物育種， 2021：1-11.

[30]鄔旭龍， 楊敏， 肖璐，等.地衣芽孢桿菌谷氨酸消旋酶基因克隆、原核表達及生物信息學分析[J].黑龍江畜牧獸醫， 2022， （8）： 114-118.

[31]陳曉雯， 黃碧玲， 黃少華， 等.Bacillus subtilis轉錄因子CtsR蛋白中clpC操縱子結合區域的NMR研究[J].波譜學雜志， 2021， 38（2）： 155-163.

[32]YU M， TANG Y， LU L， et al.CysB is a key regulator of the antifungal activity of Burkholderia pyrrocinia JK-SH007[J].Int J Mol Sci， 2023， 24（9）： 8067.

[33]MYRIAM R， VINCENT J， SYLVAIN L， et al.Transcriptomic analysis of E.coli after exposure to a sublethal concentration of hydrogen peroxide revealed a coordinated up-regulation of the cysteine biosynthesis pathway[J].Antioxidants，2022， 11（4）：655.

[34]KUSUM S， TARANUM S， TANYA E S D， et al.CcpN： a moonlighting protein regulating catabolite repression of gluconeogenic genes in Bacillus subtilis also affects cell length and interacts with DivIVA[J].Canadian journal of microbiology， 2020： 723-732.

[35]黃雪松， 丁躍， 宋昭， 等.CcpN敲除對地衣芽胞桿菌DW2桿菌肽合成代謝的調控效應[J].食品與發酵工業， 2022， 48（19）： 23-29.

[36]OUCHANE S， PICAUD M， THERIZOLS P， et al.Global regulation of photosynthesis and respiration by FnrL： the first two targets in the tetrapyrrole pathway[J].The Journal of Biological Chemistry，2007，282（10）：7690-7699.

[37]MALHOTRA V， AGRAWAL R， DUNCAN TR， et al.Mycobacterium tuberculosis response regulators， DevR and NarL， interact in vivo and co-regulate gene expression during aerobic nitrate metabolism[J].The Journal of Biological Chemistry，2015， 290（13）： 153-167.

[38]李璐.固氮紅細菌FnrL、NarL轉錄因子生物學功能研究及應用[D].濟南：齊魯工業大學， 2023.

[39]MARGARITA S， NATALIA R， AYSLU M， et al.Biofilm formation by mutant strains of Bacilli under different stress conditions[J].Microorganisms，2023，11（6）：1486.

[40]丁躍， 陳琛， 魯佳康，等.蘋果酸補料策略提高枯草芽孢桿菌DF生長和產孢效率[J].食品科學， 2023：1-10.

[41]HAUGO A J， WATNICK P I.Vibrio cholerae CytR is a repressor of biofilm development[J].Molecular Microbiology， 2002，45（2）：471.

[42]UHLICH G A; CHEN C; COTTRELL B J; et al.Genome amplification and promoter mutation expand the range of csgD-dependent biofilm responses in an STEC population[J].Microbiology， 2017，163，611-621.

[43]YAN H C，CHEN H F，YANG L Y，et al.The transcription factor CsgD contributes to engineered Escherichia coli resistance by regulating biofilm formation and stress responses[J].International Journal of Molecular Sciences，2023，24（18）：13681.