載阿霉素納米粒溫敏凝膠復合體系的體內緩釋性能和抗腫瘤作用及瘤內滯留性能評價*

杜華康, 陸苑, 金陽, 陳玉穎, 王永林,3, 李勇軍,3, 劉文***

(1.貴州醫科大學 貴州省藥物制劑重點實驗室 & 省部共建藥用植物功效與利用國家重點實驗室, 貴州 貴陽 550004; 2.貴州醫科大學 藥學院, 貴州 貴陽 550004; 3.貴州醫科大學 民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心, 貴州 貴陽 550004)

原發性肝癌是一種致命的消化道惡性腫瘤,其特點是起病隱匿、進展快、生活質量差及生存時間短[1],包括肝細胞癌(75%～85%)、肝內膽管癌(10%～15%)及混合細胞癌(<15%)[2-4]。由于大多數肝癌患者在早期無明顯癥狀,確診時已處于中晚期[5-6]。對于這類中晚期患者,通常采用經肝動脈化療栓塞術(transarterial chemoembolization,TACE),即在數字減影血管造影機引導下,經導管將混有化療藥物的碘油注射至腫瘤組織供血的二級或三級動脈血管中,局部栓塞腫瘤組織的供血,“餓”死腫瘤的同時釋放化療藥物“毒”死腫瘤[7-8]。現已證實,傳統TACE治療后(化療藥物與碘油簡單的混合乳化后注射),與系統給藥方式相比,腫瘤局部藥物濃度雖能在短時間提高100倍以上,但化療藥物會在1～2 d內迅速擴散殆盡,腫瘤局部藥物有效治療濃度維持時間短,難以達到臨床期望效果[9]。為解決傳統TACE中化療藥物維持局部有效濃度時間短的問題,臨床上已廣泛推廣載藥微球(將化療藥物裝載在聚合物材料內,可達到緩慢釋放藥物的目的)[10]。但這類載藥微球價格昂貴,給肝癌患者帶來巨大經濟壓力,且為不可降解材料不利于后續治療。本課題組前期研究制備的通過微導管注射的載阿霉素納米粒溫敏凝膠(doxorubicin-loaded nanoparticles thermosensitive gel,DOX-NPs-Gel)復合體系可較好地解決傳統TACE中阿霉素(doxorubicin,DOX)-碘油乳劑釋藥過快的問題且材料安全、可生物降解,但其在體內的緩釋性能、抗腫瘤作用及瘤內滯留性能尚不明了,因此本研究考察了DOX-NPs-Gel在大鼠體內的緩釋性能和對H22荷瘤模型小鼠的抑瘤效果及瘤內滯留性能。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1動物和細胞來源 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠18只,體質量(250±20)g,購于遼寧長生生物技術股份有限公司[生產許可號SCXK(遼)2020-0001];美國癌癥研究所(Institute of Cancer Research,ICR)雄性小鼠90只,體質量(20±2)g,購于斯貝福(北京)生物技術有限公司[生產許可號SCXK(京)2019-0010];小鼠肝癌細胞株H22細胞購自武漢普諾賽生命科技有限公司。本研究實驗方案獲得學校實驗動物倫理委員會審查批準(2201022)。

1.1.2主要試劑 DOX(含量>98.0%,大連美倫生物),殼聚糖(脫乙酰度≥95%,上海羅恩試劑),β-甘油磷酸鈉(含量≥98.0%,美國西格瑪奧德里奇),罌粟乙碘油注射液(碘濃度為480 g/L,江蘇恒瑞),PLGA(相對分子量10 kD,西安瑞禧生物),卵磷脂(供口服用藥用輔料,江蘇曼氏生物),吐溫-80(北京索萊寶),阿奇霉素(含量>98.0%,大連美倫生物),其余試劑為分析純。

1.1.3主要儀器 ACQUITY UPLC型超高效液相色譜-三重四級桿質譜串聯儀(美國Waters),Forma 905-ULTS1490醫用低溫冰箱(美國Thermo Fisher),FDU-1100真空冷凍干燥機(日本東京理化器械),JY88-IIN細胞破碎機(寧波新芝生物),90Plus激光粒度儀(美國布魯克),R100旋蒸儀(瑞士步琦),Optima XPN-100超速離心機和Allegra X-30R低溫高速離心機(美國貝克曼庫爾特公司),MSC5R磁力攪拌器(群安實驗),UV-2700紫外可見分光光度儀(島津儀器),IMS-20制冰機(常熟雪科),XYN-15LP氮氣發生器(上海析友),EL204電子天平(上海梅特勒-托利多)。