血性羊水細胞培養方法的改良與應用

黃道奇,涂華玉,童克婷,王朝紅,朱健生

(安徽醫科大學附屬安徽省婦幼保健院遺傳醫學中心,合肥 230011)

自從首次報道將羊水細胞染色體核型分析應用于胎兒染色體疾病的產前診斷以來,這一技術一直是產前診斷胎兒染色體疾病的金標準和核心項目[1-2]。但實際工作中,血性羊水包括混有新鮮血細胞的紅色羊水和以往有出血的褐色羊水中混有的血細胞會給胎兒脫落細胞的貼壁培養帶來困難,尤其是單獨的載玻片原位培養盒法(簡稱原位培養法)受影響更為明顯。鑒于此,本實驗室對于血性羊水采用塑料培養瓶和載玻片原位培養盒聯合培養法(簡稱聯合培養法),獲得了很好的成功率。現總結分析如下。

1 資料和方法

1.1研究對象 收集2021年1月至2022年12月安徽省婦幼保健院遺傳中心行產前診斷孕婦的31例血性羊水樣本作為研究對象。產前診斷的指征包括35歲以上高齡孕婦、血清學產前篩查高風險、無創產前檢測(noninvasive prenatal test,NIPT)高風險、夫妻雙方中一方有染色體疾病、胎兒超聲軟指標異常及不良孕產史等。離心后肉眼可見鮮紅色沉淀的血性樣本為新鮮出血,褐色沉淀者為陳舊性出血。

1.2主要試劑與儀器 BIO AMF-2型羊水培養基(以色列BI公司)和15 mL無菌離心管(美國BD公司);CDS-5型染色體分散儀(美國Thermotron公司),Cytovision120型染色體核型分析工作站(德國Leica公司)。

1.3樣本采集 在孕16～27+6周時,產前診斷醫師在超聲引導下行羊膜腔穿刺,棄去最初的5 mL,再抽取胎兒羊水20 mL分裝于2個15 mL無菌離心管中。

1.4樣本培養 將兩管羊水580×g離心10 min,棄上清液后,留取約0.5 mL混懸細胞。……