產前血清學四聯篩查后聯合NIPT產篩模式在胎兒染色體篩查中的應用

李 揚,吳曉茜,文曉燕,焦紅燕,崔照領

(河北省石家莊市婦幼保健院1.產前診斷科,2.生殖醫學中心,3.婦產科,050000)

產前篩查是我國預防出生缺陷的措施之一,唐氏篩查臨床上主要應用血清學四聯篩查,但其檢出率低,假陽性率高,仍需產前侵入性檢查,染色體核型分析是產前診斷胎兒染色體異常的金標準,因其屬于有創操作,可能引起孕婦流產,臨床應用受限[1-2]。無創產前檢測(non-invasive prenatal testing,NIPT)具有無創、簡便、容易接受等特點,有研究[3-5]表明,NIPT用于胎兒染色體異常檢查假陰性低,檢測敏感性可達91.7%～100.0%;然而由于其費用偏高,應用于胎兒染色體篩查尚未完全普及。本研究篩查11 796例孕婦血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、游離絨毛膜促性腺激素(chorionic gonadotropin,β-hCG)、結合雌三醇(unconjugated estriol,uE3)和抑制素A血清學四聯篩查后,聯合NIPT產篩模式,以染色體核型分析結果為金標準,探討產前血清學四聯篩查后聯合NIPT產篩模式在胎兒染色體篩查中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年4月至2020年10月在本院進行產檢的孕婦11 796例為觀察對象,年齡21～35歲,平均年齡(27.50±3.70)歲,孕周15～21+6周。納入標準:(1)單胎妊娠;(2)進行血清學四聯篩查;(3)知情同意并簽署知情同意書。排除標準:(1)染色體異常和先天畸形家族史;(2)孕前1年內有輸血、免疫治療或骨髓移植記錄;(3)唐氏綜合征家族史;(4)臨床資料不全。本研究樣本采集均經過本院倫理委員會批準。

1.2 方法

唐氏篩查:無菌抽取孕婦外周靜脈血5 mL,4 ℃條件3 000 r/min離心10 min,取上清液,采用免疫熒光法檢測血清AFP、β-hCG、uE3水平,采用酶聯免疫化學發光分析法檢測抑制素A水平,結合孕婦年齡、體質量、孕周等輸入唐氏篩查軟件計算出高風險值,18-三體綜合征高風險切割值為1/350,21-三體綜合征高風險切割值為1/270。按照產前血清學四聯篩查將孕婦分為高風險(1/270≤21三體風險值或1/350≤18三體風險值)組和臨界風險(1/1 000≤21三體風險值<1/270 或 1/1 000≤18 三體風險值<1/350)組。NIPT檢測:對高風險和臨界風險孕婦進行NIPT檢測,抽取孕婦靜脈血10 mL,離心后收集血漿,使用試劑盒提取游離DNA,采用新一代高通量測序技術,計算DNA相對含量,并將測序結果進行生物信息分析,得出13、18、21號染色體Z值,若Z>3,即認為待測樣本為三體高危[6]。染色體核型分析:NIPT結果為高危的孕婦,知情同意后進行染色體核型分析,超聲引導下采取孕婦羊水或臍靜脈血,經細胞培養后制片,進行G顯帶染色體核型分析確診。采用病例查詢和電話隨訪方式對所有參加血清學四聯篩查的妊娠婦女進行隨訪,記錄產后妊娠結局和新生兒健康情況。

1.3 統計學方法

采用Fisher′s確切概率法檢驗。

2 結果

2.1 NIPT檢測結果

唐氏篩查篩選出高風險孕婦721例,臨界風險孕婦1 455例。高風險的721例孕婦中,NIPT檢測高風險19例,即需要行侵入性產前診斷占2.64%;臨界風險的1 455例孕婦中,NIPT檢測高風險5例,即需要行侵入性產前診斷占0.34%(見表1)。

表1 NIPT檢測結果(n)

2.2 NIPT檢測結果與染色體核型分析結果比較

染色體核型分析顯示共有20例孕婦顯示染色體異常,唐氏篩查高風險孕婦確診19例,其中包括21-三體綜合征13例,18-三體綜合征4例,13-三綜合征1例,其他染色體異常1例;臨界風險孕婦確診1例,為21-三體綜合征;NIPT顯示高風險的24例孕婦中20例與核型分析結果一致,其中包括21-三體綜合征12例,18-三體綜合征5例,13-三綜合征1例,性染色體數目異常1例,其他染色體異常1例。NIPT篩查與染色體核型診斷一致率為83.33%,二者檢查結果差異無統計學意義(Fisher′s確切概率法,P>0.05)(見表2)。

表2 NIPT陽性檢測結果與染色體核型分析結果比較(n)

2.3 聯合診斷效能統計

經產前診斷中心核實,結合妊娠結局,唐氏篩查高風險率為6.11%,聯合NIPT篩查后染色體假陽性率3.29%,染色體異常檢出率為83.33%。

2.4 隨訪情況

對所有NIPT篩查孕婦均進行隨訪,隨訪至產后42 d,隨訪率100%,NIPT篩查提示有4例假陽性,經隨訪未發現異常;18例孕婦經核型分析確診后引產,1例因胎兒畸形引產,1例胎死宮內引產,引產孕婦均做核型分析。

3 討論

胎兒染色體異常是嚴重的先天性疾病,產前篩查顯得尤為重要,傳統篩查方式為先進行血清學方法篩查胎兒染色體異常,若有異常,再通過羊水穿刺進行診斷,但羊水穿刺為有創性產前診斷,且有一定風險,可造成流產、宮內感染等,孕婦接受率低,因此,尋找無創診斷方法且提高診斷效率具有重要意義[7-9]。

18-三體綜合征、21-三體綜合征是最常見的新生兒染色體異常疾病,血清學四聯篩查法為常用方法,但假陽性率高,可能出現低風險的孕婦也會發生胎兒異常的情況[10-11]。NIPT檢測是用于唐氏篩查的新技術,通過檢測孕婦外周血游離DNA,對胎兒染色體異常進行篩查,可避免羊水穿刺,降低流產風險,其檢出率高達98%以上,在孕期胎兒染色體異常篩查中具有較高應用價值[12-13]。周穎等[14]對9 470例孕婦進行傳統產前提示中高風險或高齡孕婦進行NIPT檢測,結果顯示,NIPT對胎兒染色體非整倍體尤其是21-三體綜合征、18-三體綜合征的敏感性、特異性較高。本研究唐氏篩查篩選出高風險和臨界風險孕婦共2 176例,NIPT顯示高風險孕婦共24例,即需要行侵入性產前診斷者為1.10%,表明產前血清學四聯篩查高風險孕婦,再進行NIPT篩查可避免大量不必要的有創性產前診斷,有效提高產前篩查效率,降低流產、宮內感染、胎兒丟失等風險。有研究報道,NIPT對18-三體綜合征、21-三體綜合征的陽性預測值較高,分別為75%～92%和92%～93%,對性染色體異常和其他染色體異常陽性預測較低,分別為48%～59%和9%～11%[15]。本研究NIPT顯示高風險的24例孕婦全部進行染色體核型分析,染色體核型分析顯示共有20例孕婦顯示染色體異常,唐氏篩查高風險孕婦確診19例,其中包括21-三體綜合征13例,18-三體綜合征4例,其陽性預測值分別為92.85%和 83.33%,表明NIPT對常見染色體異常篩查效率較高,與吳麗萍等[16]研究結果類似。有研究[17]顯示,血清學四聯篩查染色體高風險孕婦經過NIPT檢測后,染色體假陽性率為2.54%,有效降低了染色體假陽性率。本研究經染色體核型分析后,唐氏篩查高風險率為6.11%,聯合NIPT篩查后染色體假陽性率3.29%,產前篩查效率有效提高。

綜上所述,產前血清學四聯篩查后聯合NIPT產篩模式可減少高風險孕婦有創檢查的比例,降低胎兒染色體異常的假陽性率,尤其是對21-三體綜合征、18-三體綜合征的篩查具有一定臨床意義。