甘露糖結(jié)合凝集素基因多態(tài)性 血漿甘露糖結(jié)合凝集素濃度與兒童肺部感染的相關(guān)性分析

陳才 高艷霞 韓鳳 張郡洳 陳積英

【摘要】 目的 探究甘露糖結(jié)合凝集素（mannose-binding lectin，MBL）基因多態(tài)性及血漿MBL濃度與兒童肺部感染的關(guān)系。方法選取2018年7月—2021年7月民樂縣婦幼保健院收治的167例社區(qū)獲得性肺炎患兒為感染組，另選取同期90名健康體檢兒童為對照組，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性法檢測受試者M(jìn)BL第1外顯子54密碼子位點(diǎn)基因型，并檢測血漿MBL及相關(guān)炎癥因子[白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、降鈣素原（procalcitonin，PCT）]水平，采用臨床肺部感染評分量表（clinical pulmonary infection scor，CPIS）評價(jià)肺部感染嚴(yán)重程度。結(jié)果 感染組與對照組MBL 54密碼子基因型分布、Hardy-Weiberg定律理論分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。感染組血漿MBL水平顯著低于對照組，IL-6、TNF-α、PCT水平均顯著高于對照組（P<0.05）。GGC/GAC型、GAC/GAC型患兒血漿MBL水平顯著低于GGC/GGC型，IL-6、TNF-α、PCT水平均顯著高于GGC/GGC型（P<0.05）。Pearson相關(guān)分析法顯示，患兒血漿MBL與血漿IL-6、TNF-α、PCT表達(dá)及CPIS評分均呈負(fù)相關(guān)（r=0.392、0.315、0.446、0.297，P<0.05）。結(jié)論 MBL 54密碼子GGC→GAC點(diǎn)突變及低血漿MBL水平可能與兒童肺部感染易感性及病情進(jìn)展有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 肺部感染;兒童;甘露糖結(jié)合凝集素;基因多態(tài)性;炎癥因子

文章編號(hào)：1672-1721（2024）07-0118-04? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?中國圖書分類號(hào)：R725.6

肺部感染是一種發(fā)病率、病死率都居前列的兒科常見感染性疾病，其中以細(xì)菌感染最為常見[1]。肺部感染的發(fā)生直接影響兒童健康及其生活質(zhì)量，了解兒童肺部感染發(fā)生的影響因素及機(jī)制十分必要。免疫炎癥機(jī)制在肺部感染發(fā)生發(fā)展中占重要地位，從相關(guān)因子著手來探究肺部感染發(fā)生機(jī)制或易感性已得到臨床重視。甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）是一種由肝臟合成、存在于血清中的C型凝集素，可通過與病原微生物表面甘露聚糖殘基結(jié)合起介導(dǎo)補(bǔ)體激活、吞噬作用等，被認(rèn)為是機(jī)體非特異性免疫中第一線抗感染免疫因子，其水平下降會(huì)提高多種感染性疾病易感性及嚴(yán)重程度[2]。研究指出[3]，MBL基因存在多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，且與血清MBL表達(dá)水平關(guān)聯(lián)密切，因此MBL基因多態(tài)性可能與感染性疾病易感性有關(guān)。本研究以社區(qū)獲得性肺炎患兒為研究對象，通過檢測患兒MBL基因多態(tài)性和血漿MBL水平，旨在明確MBL基因多態(tài)性和血漿MBL水平與患兒肺部感染的關(guān)系，從而為臨床防治提供參考，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年7月—2021年7月民樂縣婦幼保健院兒科收治的167例社區(qū)獲得性肺炎患兒為感染組，另選取同期90名健康體檢兒童為對照組，對照組兒童均排除感染診斷。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬或法定監(jiān)護(hù)人對研究知情并簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《兒童社區(qū)獲得性肺炎診療規(guī)范》[4]中社區(qū)獲得性肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn);（2）年齡5～14歲;

（3）入院前未接受抗菌藥物、激素類藥物等治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在支氣管哮喘、支氣管發(fā)育不良等其他呼吸道疾病;（2）合并其他感染性疾病;（3）合并先天性心臟病、免疫缺陷、重要臟器功能不全、惡性腫瘤、營養(yǎng)不良等其他基礎(chǔ)疾病;（4）臨床資料不全。

1.2 方法

1.2.1 MBL基因多態(tài)性檢測

本研究選擇MBL第1外顯子54密碼子位點(diǎn)（GGC→GAC點(diǎn)突變），采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性法檢測。

1.2.2 血漿MBL及炎癥因子檢測

采集受試者清晨空腹肘靜脈血，分離血漿備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿MBL及IL-6、TNF-α水平，采用免疫透射比濁法檢測PCT水平。MBL試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，IL-6、TNF-α、PCT試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。檢測步驟均嚴(yán)格遵試劑盒說明書操作。

1.2.3 CPIS評分

采用CPIS量表[5]評價(jià)患兒肺部感染嚴(yán)重程度，評估內(nèi)容包括體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、氧合情況、X射線胸片、氣道分泌物、氣管吸取物培養(yǎng)等。得分范圍0～12分，分?jǐn)?shù)越高意味著肺部感染越嚴(yán)重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，行χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);采用吻合度檢驗(yàn)法行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn);采用比值比（odds ratio，OR）、95%置信區(qū)間（confidence intervals，CI）描述基因型多態(tài)性與疾病易感性關(guān)系;采用Pearson相關(guān)分析法行相關(guān)性分析;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 感染組與對照組一般資料比較

感染組與對照組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、戶籍所在地等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 感染組與對照組MBL基因Hardy-Weiberg平衡檢驗(yàn)

感染組、對照組組內(nèi)的MBL 54密碼子基因型分布與Hardy-Weiberg定律理論分布情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），有群體代表性，見表2。

2.3 感染組與對照組MBL基因多態(tài)性分布

感染組MBL基因54密碼子GGC/GGC基因型、GGC等位基因頻率均顯著低于對照組（P<0.05），GGC/GAC、GAC/GAC基因型及GAC等位基因頻率均顯著高于對照組（P<0.05），見表3。

2.4 MBL基因多態(tài)性與兒童肺部感染易感性關(guān)系

調(diào)整性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)等混雜因素后，MBL 54密碼子GGC/GAC型、GAC/GAC基因型肺部感染發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可增加2.462倍（95%CI 1.328～4.776）、4.825倍（95%CI 1.406～14.958），攜帶GAC等位基因肺部感染發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可增加2.515倍（95%CI 1.582～4.337），見表4。

2.5 感染組與對照組血漿MBL及炎癥因子水平比較

感染組血漿MBL水平顯著低于對照組（P<0.05），IL-6、TNF-α、PCT水平均顯著高于對照組（P<0.05），見表5。

2.6 感染組血漿MBL與炎癥因子、CPIS評分相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析法顯示，感染組患兒血漿MBL水平與血漿IL-6、TNF-α、PCT水平及CPIS評分均呈負(fù)相關(guān)（r=0.392、0.315、0.446、0.297，P<0.001）。

3 討論

兒童由于機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全，是肺部感染的好發(fā)群體，其中絕大部分為社區(qū)獲得性肺炎。患兒發(fā)病后病情進(jìn)展迅速，容易出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征、多器官功能衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥，增加死亡風(fēng)險(xiǎn)。闡明肺部感染發(fā)病機(jī)制、識(shí)別高危因素對臨床針對性診療具有重要指導(dǎo)意義。其中基因多態(tài)性與肺部感染易感性的關(guān)系是當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一[6]。

人類MBL基因定位于染色體10 q11～q21上，具有4個(gè)外顯子，編碼N-端富含半胱氨酸區(qū)、頸區(qū)、糖原識(shí)別區(qū)、膠原樣區(qū)。其中糖原識(shí)別區(qū)為MBL蛋白質(zhì)產(chǎn)生生理作用基礎(chǔ)，膠原樣區(qū)參與補(bǔ)體激活、免疫調(diào)節(jié)作用。血清MBL被認(rèn)為是天然免疫防御系統(tǒng)重要成分，主要通過介導(dǎo)補(bǔ)體活化、吞噬功能調(diào)理等過程清除病原體。MBL結(jié)構(gòu)缺損或濃度低下將直接影響MBL發(fā)揮正常補(bǔ)體活化功能及吞噬調(diào)理作用，使得機(jī)體病原體易感性增加，并影響疾病進(jìn)程和轉(zhuǎn)歸。已有研究指出，血清MBL水平低下與包括細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲在內(nèi)的多種病原微生物感染相關(guān)。MBL血清水平及功能主要受MBL基因影響，而MBL基因突變頻率較高，其中MBL第1外顯子54密碼子位點(diǎn)存在GGC→GAC點(diǎn)突變，可導(dǎo)致肽鏈膠原域一個(gè)甘氨酸為天冬氨酸所替換，使得膠原結(jié)構(gòu)重復(fù)序列被擾亂，亞單位多聚化受影響，降低了MBL與配體結(jié)合能力，易被降解，進(jìn)而引起血清MBL水平低下，造成機(jī)體免疫力受損。本研究顯示，感染組GGC/GAC、GAC/GAC基因型及GAC等位基因頻率均較對照組升高，血漿MBL水平較對照組下降，且調(diào)整混雜因素后，GGC/GAC型、GAC/GAC基因型肺部感染風(fēng)險(xiǎn)可增加2.462倍、4.825倍，攜帶GAC等位基因增加2.515倍，提示MBL第1外顯子54密碼子基因多態(tài)性和血漿MBL水平與兒童肺部感染易感性有關(guān)。研究顯示[7]，MBL基因第1外顯子54位密碼子點(diǎn)突變頻

率與血漿含量呈負(fù)相關(guān)。還有研究認(rèn)為[8]，呼吸道細(xì)菌定植在肺部感染發(fā)生中占重要地位，MBL通過其C型識(shí)別區(qū)域可綁定包括肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌在內(nèi)的多種微生物，參與定植菌吞噬清除，而當(dāng)MBL發(fā)生基因突變時(shí)，機(jī)體內(nèi)環(huán)境會(huì)出現(xiàn)免疫缺口，肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌等病原菌可趁機(jī)侵入并定植，增加了肺部感染風(fēng)險(xiǎn)。上述研究支持本研究結(jié)果。還有文獻(xiàn)指出，MBL 54密碼子基因突變導(dǎo)致的低MBL血癥與兒童反復(fù)呼吸道感染易感性有關(guān)，與本研究有相似之處。

IL-6、TNF-α是常見促炎因子，在機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫損傷中占重要地位;PCT是臨床鑒別細(xì)菌感染的重要指標(biāo)，機(jī)體各器官在細(xì)菌毒素、炎癥因子刺激下可分泌大量PCT，導(dǎo)致血清PCT急劇上升。既往研究指出[9]，肺部感染兒童血清IL-6、TNF-α、PCT表達(dá)均明顯升高，且與感染嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，感染組血漿IL-6、TNF-α、PCT水平均較對照組升高，且MBL 54位密碼子GGC/GAC型、GAC/GAC型患兒血漿IL-6、TNF-α、PCT水平較GGC/GGC型升高，血漿MBL水平與血漿IL-6、TNF-α、PCT水平呈負(fù)相關(guān)，提示MBL 54位密碼子基因多態(tài)性可能通過影響血漿MBL低表達(dá)介導(dǎo)炎癥因子高表達(dá)，進(jìn)而參與感染發(fā)生發(fā)展。有研究認(rèn)為[10]，MBL可參與機(jī)體炎癥反應(yīng)條件，當(dāng)MBL濃度下降時(shí)，機(jī)體對Toll樣受體4/核因子-κB信號(hào)通路和炎癥反應(yīng)抑制作用下降，可介導(dǎo)炎癥損傷及疾病發(fā)生發(fā)展。肺部感染病情嚴(yán)重評估是臨床預(yù)后預(yù)測及經(jīng)驗(yàn)性抗感染治療的基礎(chǔ)，其中CPSI評分在肺部感染嚴(yán)重程度中應(yīng)用十分廣泛。本研究結(jié)果顯示，血漿MBL水平與肺部感染患兒CPSI評分呈負(fù)相關(guān)，提示血漿MBL檢測或許可用于兒童肺部感染病情嚴(yán)重程度評估，有待多中心、大樣本研究論證。理論上MBL的替代療法對增加機(jī)體抵抗力、降低感染風(fēng)險(xiǎn)有積極意義，對于MBL低下患兒，MBL替代療法或許展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，值得臨床深入研究。

綜上所述，MBL基因多態(tài)性及血漿MBL水平與兒童肺部感染、病情嚴(yán)重程度表現(xiàn)出一定相關(guān)性，加強(qiáng)相關(guān)指標(biāo)監(jiān)測或許有助于臨床病情把握及針對性防治，值得深入探究。

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（編輯：郭曉添）

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（下轉(zhuǎn)第121頁）

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（編輯：郭曉添）