廈門市女性人乳頭瘤病毒感染和基因型分布狀況

張彩琴，卓衛

廈門市湖里區婦幼保健院檢驗科，廈門 361009

目前已發現近200 種不同亞型的人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）。HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 等12 種 亞型被國際癌癥研究機構（IARC）歸類為高危型[1]。大多數宮頸癌與高危型HPV 感染相關，HPV-16 和HPV-18 是與宮頸癌相關的兩種最常見的基因型[2]。中國宮頸癌的發病率和死亡率一直呈穩步上升和年輕化趨勢[3]。HPV-DNA 檢測作為宮頸癌篩查的重要方法，應用廣泛。本研究旨在調查廈門市女性HPV 的感染和基因型分布狀況，從而為宮頸癌篩查和HPV疫苗接種提供可靠建議。

1 對象與方法

1.1 研究對象 隨機抽取廈門市湖里區婦幼保健院2020 年7 月至2021 年6 月的14 847 名婦科門診患者和12453 名參加宮頸癌篩查的健康體檢者。婦科門診患者包括陰道炎、宮頸炎、宮頸上皮內瘤變等婦科常見病例。納入標準：健康體檢女性或婦科門診患者；行宮頸癌篩查；年齡15～80 歲；均接受HPV 核酸檢測及基因分型檢測；均簽署知情同意書。排除標準：經期，2 d 之內有過性生活，3 d 之內陰道有用藥；從未有過性生活經歷及孕期的女性。本研究獲廈門市湖里區婦幼保健院倫理委員會批準。

1.2 試劑及儀器

1.2.1 試劑 HPV 檢測所用的試劑為寧波海爾施基因科技有限公司生產，采用PCR 毛細電泳片段分析法，共檢測25 個型別，包括13 種高危型、5 種中危型和7 種低危型。

1.2.2 儀器 本實驗所使用的儀器主要有臺灣圓點SLA-32 全自動核酸提取儀、西安天隆Genesy 96T 基因擴增熱循環儀和ABI 3500DX 基因分析儀。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 暴露宮頸，擦去宮頸口分泌物。將宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉5 圈。將宮頸刷頭部放入細胞保存液，折斷宮頸刷，旋緊管蓋。黏液量大于50%的樣本需予以剔除，重新采樣。

1.3.2 標本檢測 核酸提取：加樣前將樣本于渦旋混合儀上充分渦旋10 s。若樣本存在較多血液、黏液等雜質，可用生理鹽水進行多次洗滌。使用全自動核酸提取儀進行核酸提取，加樣體積為200 μl。

基因擴增：擴增體系為11 μl 配制好的反應液＋9 μl 核酸。PCR 反應程序：42℃ 5 min →94℃ 8 min →94℃ 30 s，60℃ 30 s，70℃ 1 min（35 個循環）→70℃ 1 min。

毛細電泳：電泳體系為9 μl Hi-Di（SIZE-500 的含量為2.5%）＋1 μl PCR 產物。電泳前需86℃加熱3 min 進行變性，變性后立刻放入4℃冰箱冷卻5 min。使用ABI 3500 Dx 基因分析儀分析PCR 產物，選擇“Fragment”方法，使用Genemapper 軟件對結果進行分析。

1.3.3 結果分析 按照受試者來源將所有受試者分為門診組和體檢組。記錄每個受試者的基本信息及HPV 檢測結果。統計分析HPV 的感染情況。

1.4 統計學方法 應用SPSS 25.0 統計軟件進行統計分析，使用卡方檢驗進行兩組或多組之間陽性率的比較。當P＜0.05 認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 受檢女性年齡分布 共納入27 300 名女性，其中，14 847 名婦科門診患者，12 453 名參加宮頸癌篩查的健康體檢女性，其年齡分布見表1。

表1 研究對象的基本情況

2.2 HPV 陽性率 HPV 的陽性率為12.85%（3507/27 300）。高危型HPV的陽性率為8.52%（2327/27 300），占陽性的66.35%（2327/3507）。高危型感染者有14.48%（337/2327）感染多種高危亞型。

2.3 HPV 基因型分布 不同亞型HPV 的陽性率在0.05%～2.52%之間。最常見的高危亞型依次為HPV-52、58、16、51 和56。其 中，HPV-52、58 或16 陽性者占總體4.60%（1255/27 300），陽性占比35.79%（1255/3507）；HPV-16 或18 陽性者占總體1.52%（415/27 300），陽性占比11.83%（415/3507）。各年齡段最常見的高危型均是52 和58 型。

2.4 兩組HPV 感染情況 門診組的HPV 陽性率、高、中、低危型HPV 陽性率、高危型HPV 陽性占比以及多重高危型HPV 感染在高危型HPV 感染中的占比均高于體檢組（均P＜0.05）。見表2。

表2 體檢組和門診組HPV感染狀況

2.5 不同年齡女性HPV 感染情況 不同年齡組的HPV 陽性率、高危型HPV 陽性率、高危型HPV 陽性占比和多重高危型HPV 感染在高危型HPV 感染中的占比均有統計學差異（均P＜0.05）。體檢組高危型HPV 感染的高峰年齡為≥60 歲和＜30 歲，門診組為≥60 歲、50～59 歲和＜30 歲。體檢組中各年齡段高危型HPV 陽性占比均在50%以上，門診組均在65%以上。見表3、表4。

表3 體檢組各年齡段HPV感染狀況

表4 門診組各年齡段HPV感染狀況

3 討論

早期診斷和治療對于降低宮頸癌的死亡率非常重要。HPV-DNA 檢測比其他篩查方法具有更高的敏感性和陰性預測值[4]。2021 年7 月，世界衛生組織在《預防宮頸癌前病變篩查和治療指南（第二版）》中明確提出，將HPV-DNA 檢測作為宮頸癌的初篩方法[5]。本研究中采用PCR 毛細電泳片段分析法，能同時檢測25 個HPV 常見亞型，能可靠的篩查出HPV 感染者。

本研究中，HPV 和高危型HPV 的陽性率分別為12.85%（3507/27 300）和8.52%（2327/27 300）。沈潔等[6]報道北京地區的女性高危型HPV 的陽性率為7.4%。景尉等[7]報道廣州地區女性HPV 和高危型HPV 陽性率分別為20.47%和17.25%。靳冬梅等[8]報道青海省女性高危型HPV 陽性率為10.23%。中國不同地區女性的HPV 陽性率存在差異，可能與檢測方法、各地區經濟、文化、流動人口比例和性觀念的差異有關。此外，研究人群的不同也是造成結果差異的重要原因，有的研究免費宮頸癌篩查的女性[6]，而有的研究婦科門診患者[7-8]。本研究顯示婦科門診患者HPV 及高危型HPV 陽性率顯著高于體檢人群，同時納入以上兩個群體，能較全面反映廈門市女性的HPV 感染狀況。

本研究中，體檢組高危型陽性占比56.66%，各年齡段均超過50%；門診組高危型陽性占比71.16%，各年齡段均超過65%。可見，廈門市女性HPV 感染以高危型為主，尤其是婦科門診病人。目前認為，持續性高危型HPV 感染是導致宮頸癌的一個常見的危險因素[9]。因此，對廈門市女性進行高危型HPV 檢測并及時干預，對于降低宮頸癌的發病率有重要意義。

本研究中檢出率最高的高危亞型依次為HPV-52、58、16、51 和56；而有據報道顯示，北京為HPV-16、18、52、51 和58[6]，青海為16、58 和39[8]，廣州為HPV-52、16、58、51 和53[7]。其中，廣州的報告[7]與本研究相似，這可能與地理位置鄰近有關。不同研究的差異說明HPV 基因型分布存在地域差異。了解各地區主要流行的高危亞型，能更有針對性的指導該地區的宮頸癌篩查和HPV 疫苗接種工作。

二價和四價HPV 疫苗針對的高危型為16 和18 型，九價HPV 疫苗針對的高危型有16、18、31、33、45、52、58 型等7 種[10]。本實驗檢出率最高的高危亞型前5 位依次為52、58、16、51 和56 型，其中52、58 或16 型陽性為1255 人（4.60%），陽性占比達35.79%；而16 或18 型陽性為415 人（1.52%），陽性占比僅為11.83%。因此，九價HPV 疫苗相對比二價/四價疫苗更能顯著有效地降低廈門市高危型HPV 的感染率。然而，我國的宮頸癌患者以16 和18 型HPV 感染最常見[11]，且世界衛生組織2017 年發布的《HPV疫苗立場文件》認為3 種疫苗在預防宮頸癌方面有相似的效果，HPV 疫苗可為未發生過性行為的女性提供最好的保護[10]。因此，廈門市適齡女性在預約不到九價HPV 疫苗時，不應盲目等待，應盡早接種二價或四價HPV 疫苗，以有效的預防宮頸癌的發生。

本研究結果還顯示，婦科門診組≥60 歲女性高危型HPV 陽性率、高危型HPV 陽性占比、多重高危型HPV 感染在高危型HPV 感染中的占比分別為28.79%、84.44%、23.70%，顯著高于其他年齡組；50～ 59 歲女性僅低于≥60 歲組。在體檢組中，≥60 歲也是高危型HPV 感染的高峰年齡。可見，廈門50 歲以上女性HPV 感染狀況不容樂觀，或許與該群體免疫力低下、平均受教育程度低、對宮頸癌的認知程度低、體檢或就醫意愿低以及未接種HPV 疫苗有關。因此，應加強對該群體的健康宣教，提高HPV篩查率。

據報道，2018—2019 年中國大陸大學生HPV 疫苗接種率僅為3.1%[12]，2018—2020 年中國9～45 歲女性HPV 疫苗累計估算接種率僅為2.24%[13]。在本實驗中，＜30 歲是高危型HPV 感染的第一個高峰年齡，這可能與該群體性生活活躍且我國疫苗接種率低有關。因此，應加強對青少年的健康宣教，適齡女性盡早接種疫苗，提高HPV 篩查率。

盡管本研究中體檢組高危型HPV 陽性率明顯低于門診組（P＜0.001），但體檢女性高危型HPV 的感染仍不容忽視，尤其是＜30 歲和≥60 歲的女性，應進一步推廣宮頸癌篩查。

綜上所述，廈門市女性HPV 感染以高危型為主，最常見的高危型為HPV-52 和58。50 歲以上、30 歲以下的婦科門診患者有必要接受HPV-DNA 檢測，且體檢女性應進一步推廣宮頸癌篩查。