急性胰腺炎患者外周血CD66b+、CD177+中性粒細(xì)胞表達(dá)及意義*

郭慧敏 尚金金 褚菲菲 王麗紅 李琨琨 吳慧麗

鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院消化內(nèi)科河南省結(jié)直腸癌診治醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 鄭州市結(jié)直腸癌診治與研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南省鄭州市 450000

急性胰腺炎(AP)是消化科常見(jiàn)急性炎癥性疾病,該病起病急、病情進(jìn)展迅速,臨床普遍將其根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為輕癥AP(MAP)、中度重癥AP(MSAP)及重癥AP(SAP)三類,其中SAP患者可出現(xiàn)持續(xù)性器官衰竭,病程較長(zhǎng)且死亡風(fēng)險(xiǎn)高[1]。早期正確識(shí)別AP類型有助于延緩患者病情進(jìn)展,減少胰腺炎癥對(duì)患者造成的損傷,故采取有效手段對(duì)AP患者病情進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)測(cè)十分重要[2]。中性粒細(xì)胞(NEUT)是機(jī)體固有性免疫應(yīng)答系統(tǒng)重要組成部分,局部組織發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí),NEUT會(huì)先被募集到炎癥組織而發(fā)揮免疫作用,CD66b+、CD177+是NEUT特異性組成部分,二者均表達(dá)于NEUT細(xì)胞膜表面,參與免疫細(xì)胞應(yīng)答與調(diào)節(jié)功能[3]。研究發(fā)現(xiàn),CD66b+與CD177+NEUT在自身免疫性疾病、血管炎或腫瘤患者外周血中可明顯升高,但二者在AP患者外周血中的表達(dá)與功能尚不明確[4]。基于此,本研究通過(guò)分析不同分類AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)差異,探究二者在AP病情進(jìn)展中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取我院2020年8月—2022年9月收治的104例AP患者。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《中國(guó)急性胰腺炎多學(xué)科診治共識(shí)意見(jiàn)》中AP相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]:血清淀粉酶及脂肪酶水平≥3倍正常上限值;(2)發(fā)病時(shí)間在48h內(nèi);(3)臨床病歷資料無(wú)缺失;(4)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)慢性胰腺炎;(2)因腫瘤導(dǎo)致的胰腺炎癥;(3)以往存在器官衰竭史;(4)中斷治療轉(zhuǎn)院者。

1.2 AP分類 分類標(biāo)準(zhǔn)[6]:無(wú)局部或全身性并發(fā)癥,無(wú)臟器衰竭,臨床癥狀可在1～2周內(nèi)恢復(fù)為MAP;伴有局部或全身性并發(fā)癥,存在一過(guò)性臟器衰竭且48h內(nèi)可恢復(fù)為MSAP;出現(xiàn)持續(xù)性1個(gè)或多個(gè)臟器衰竭且持續(xù)時(shí)間>48h為SAP。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)將入組患者分為MAP組、MSAP組及SAP組。三組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。

表1 三組患者一般資料比較

1.3 病情嚴(yán)重程度評(píng)分 采用急性胰腺炎嚴(yán)重程度床邊指數(shù)(BISAP)[7]評(píng)估入組患者入院24h內(nèi)疾病嚴(yán)重程度,評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為:(1)年齡>60歲計(jì)為1分,≤60歲計(jì)0分;(2)血尿素氮>8.9mmol/L為1分,≤8.9mmol/L計(jì)0分;(3)全身炎癥反應(yīng),滿足體溫>38℃或<36℃、心率>90次/min、呼吸>20次/min、白細(xì)胞計(jì)數(shù)>12.0×109/L或<4.0×109/L中的2項(xiàng)以上者計(jì)1分,不滿足計(jì)0分;(4)精神狀態(tài)Glasgow評(píng)分[8]<15分計(jì)1分,≥15分計(jì)0分;(5)有胸腔積液計(jì)1分,無(wú)則計(jì)0分。

1.4 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 采集AP患者入院時(shí)外周血10ml,存于1支抗凝管中,加入紅細(xì)胞裂解液,室溫下靜置10min后再次裂解,10min后離心去除殘留裂解液,經(jīng)PBS清洗離心后沉淀,去除上清,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106細(xì)胞。后各取全血100μl于2支流式管中,分別加入藻紅蛋白標(biāo)記抗人CD66b單抗、異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗人CD177抗體各10μl充分混勻,室溫避光孵育15min后加500μl紅細(xì)胞溶血?jiǎng)?美國(guó)Beckman Coulter公司),振蕩混勻,室溫避光孵育15min,加入500μl鞘液混勻,室溫避光孵育5min,再加入100μl充分混勻的Flow-count絕對(duì)計(jì)數(shù)微球,上機(jī),采用DxFLEX 流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman公司)檢測(cè)標(biāo)本中CD66b+、CD177+NEUT百分比。

2 結(jié)果

2.1 三組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及病情評(píng)分比較 SAP組患者CD66b+、CD177+NEUT比例及BISAP評(píng)分均高于MAP組及MSAP組(P<0.05),且MSAP組高于MAP組(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 三組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及病情評(píng)分比較

2.2 AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)與BISAP評(píng)分相關(guān)性分析 AP患者的CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)均與BISAP評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.382、0.464,P<0.05)。

2.3 外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)對(duì)AP患者病情嚴(yán)重程度預(yù)測(cè)價(jià)值分析 外周血CD66b+、CD177+NEUT及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)AP患者病情嚴(yán)重程度的AUC分別為0.785、0.805、0.855,敏感度分別為78.95%、94.74%、73.68%,特異度分別為71.76%、57.65%、87.07%,見(jiàn)表3及圖1。

圖1 外周血CD66b+、CD177+ NEUT表達(dá)預(yù)測(cè)AP患者病情嚴(yán)重程度的ROC曲線

表3 外周血CD66b+、CD177+ NEUT表達(dá)對(duì)AP患者病情嚴(yán)重程度預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

AP是因胰酶大量分泌而導(dǎo)致胰腺自身消化、出血及壞死的炎性疾病,而AP患者炎癥反應(yīng)發(fā)生及加重與胰腺組織炎癥因子與胰蛋白酶過(guò)度釋放密切相關(guān)[9]。由于AP病情變化快,其中SAP起病兇險(xiǎn),病程較長(zhǎng),伴有嚴(yán)重感染及持續(xù)性臟器衰竭,是AP患者死亡的主要原因,故臨床將早期準(zhǔn)確識(shí)別SAP作為治療重點(diǎn),這將有助于選擇合適的治療方案及預(yù)后評(píng)估[10]。有研究發(fā)現(xiàn),除臨床癥狀評(píng)估及影像學(xué)檢查外,生物學(xué)標(biāo)志物也能用于判斷AP病情進(jìn)展,如降鈣素原、動(dòng)脈血?dú)夥治龅萚11]。因此尋找一種準(zhǔn)確、靈敏的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)AP患者病情進(jìn)行早期預(yù)測(cè)十分必要。

CD66b+、CD177+是NEUT效應(yīng)細(xì)胞重要亞群之一,參與消化系統(tǒng)組織中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)的病理免疫過(guò)程,NETs是NEUT殺滅病原體的新型免疫機(jī)制,有研究表明,NETs是AP病情進(jìn)展的重要因素[12]。本研究檢測(cè)了不同病情AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)隨病情嚴(yán)重程度呈明顯增高趨勢(shì),提示CD66b+、CD177+NEUT與AP病情進(jìn)展密切相關(guān),表明CD66b+、CD177+NEUT可能在AP患者炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮作用。分析原因可能為,CD66b+是NEUT特異性顆粒上的成分,可在NEUT脫顆粒過(guò)程中通過(guò)特異性顆粒與細(xì)胞膜融合從而轉(zhuǎn)移至胞膜表面上,其過(guò)表達(dá)提示NEUT發(fā)生脫顆粒現(xiàn)象,此現(xiàn)象能夠?qū)е翹EUT胞質(zhì)內(nèi)充滿含組胺、趨化因子等的粗大分泌顆粒,當(dāng)NEUT所在的局部組織受到炎癥或過(guò)敏原刺激時(shí),將以胞吐的方式釋放大量顆粒內(nèi)物質(zhì)如溶酶體酶類,進(jìn)一步加重周圍組織及血管損傷[13]。CD177+作為糖基化磷脂酰肌醇錨定的糖蛋白,主要表達(dá)于NEUT胞膜表面,能夠與胞膜上蛋白酶結(jié)合,形成的復(fù)合體可使NEUT與血小板內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子-1結(jié)合,促進(jìn)NEUT向外周循環(huán)系統(tǒng)組織及炎癥部位遷移,從而加重炎癥反應(yīng)及其范圍,造成循環(huán)損傷甚至衰竭[14]。由此可以看出,CD66b+、CD177+NEUT參與了AP疾病進(jìn)展過(guò)程,二者在外周血中的過(guò)表達(dá)狀態(tài)可能說(shuō)明患者胰腺及周圍組織損傷嚴(yán)重。

BISAP評(píng)分是目前臨床針對(duì)AP患者研發(fā)的病情評(píng)估系統(tǒng),該評(píng)價(jià)方法簡(jiǎn)單,所需指標(biāo)不煩瑣且易于獲得,可對(duì)AP患者并發(fā)癥、臟器衰竭、病死率等進(jìn)行較為準(zhǔn)確的評(píng)估[15]。本研究結(jié)果顯示:CD66b+、CD177+NEUT與BISAP評(píng)分呈正相關(guān),進(jìn)一步提示CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)可在一定程度上反映AP嚴(yán)重程度。本研究通過(guò)ROC曲線分析得出外周血CD66b+、CD177+NEUT及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)SAP的AUC分別為0.785、0.805、0.855,表示二者對(duì)AP患者病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值較高,二者在外周血的表達(dá)可考慮作為評(píng)估AP病情的臨床指標(biāo)。俞秋興等人[16]研究發(fā)現(xiàn)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膿毒癥患者外周血中被CD66b+識(shí)別的NETs表達(dá)在診斷疾病中有重要臨床價(jià)值。張艷婷等人[17]研究也表明,CD177+NEUT在腸炎患者外周血中表達(dá)明顯增高,且與疾病活動(dòng)程度密切相關(guān),CD177+NEUT可能通過(guò)固有性免疫應(yīng)答效應(yīng)而參與腸黏膜炎癥中的免疫調(diào)節(jié),促使NEUT向周圍組織內(nèi)浸潤(rùn),發(fā)揮免疫病理?yè)p傷作用。

綜上所述,AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表達(dá)隨病情嚴(yán)重程度呈明顯增高趨勢(shì),二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)患者疾病進(jìn)展有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。