冠心病患者外周血濾泡輔助性T細(xì)胞及IL-21異常表達(dá)的臨床意義*

李傳波 李恒立

河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院CCU 473000

冠心病(Coronary heart disease, CHD)是一種極為常見(jiàn)的以動(dòng)脈粥樣硬化為病理基礎(chǔ)的心血管疾病,好發(fā)于中老年人群,致死率較高[1]。現(xiàn)有研究表明炎癥反應(yīng)是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要使動(dòng)因素,其過(guò)程復(fù)雜貫穿病程始終,涉及多種細(xì)胞及炎癥介質(zhì)[2],因此了解其具體過(guò)程及機(jī)制在冠心病的防治過(guò)程中意義重大。濾泡輔助性T細(xì)胞(Follicular helper T cells, Tfh)是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群,是體內(nèi)IL-21的主要來(lái)源,也是輔助體液免疫激活的關(guān)鍵細(xì)胞,主要功能是促進(jìn)B細(xì)胞分化成熟、抗體類(lèi)別轉(zhuǎn)換及抗體分泌,其功能異常與多種自身免疫疾病及腫瘤明確相關(guān)[3]。近年來(lái)多個(gè)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),在動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型中Tfh細(xì)胞可通過(guò)多種途徑促進(jìn)病情進(jìn)展[4]。本研究通過(guò)檢測(cè)CHD患者及排除CHD者外周血Tfh細(xì)胞及IL-21,結(jié)合CHD患者Gensini評(píng)分,探討CHD患者Tfh細(xì)胞及IL-21與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年1—12月就診于我院擬診為CHD并完善冠脈造影術(shù)的患者186例。結(jié)合患者病史、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及心電圖結(jié)果,最終確診CHD者163例為CHD組,排除CHD者23例為對(duì)照組。CHD組由我科富有經(jīng)驗(yàn)的主治或以上職稱(chēng)醫(yī)師根據(jù)2013年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)定義的冠狀動(dòng)脈圖像及分隔標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步完善Gensini評(píng)分[5]。排除近半年發(fā)生過(guò)急性心肌梗死者、合并自身免疫疾病者、心臟瓣膜病者、臟器功能不全者(如肝功能不全、腎功能不全)、近6周使用過(guò)糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑者、合并惡性腫瘤者。本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)過(guò)我院倫理委員會(huì)備案并批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集:抽取患者晨起空腹靜脈血2ml,分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),一部分用于Tfh細(xì)胞檢測(cè),另一部分用于IL-21檢測(cè)。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Tfh細(xì)胞:在PBMC樣本中加入CD4-PE、CXCR5-FITC(BD Biosciences, Franklin Lakes,NJ) 各10μl,混勻后室溫避光孵育30min,每100μl全血加入2ml 1X紅細(xì)胞裂解液,室溫裂解10min,至細(xì)胞懸液呈澄清透明狀后,離心,洗滌細(xì)胞,離心后棄上清。加入300μl PBS,使用DxFLEXcell sorter(Beckman Coulter Brea California,USA)流式分析儀檢測(cè),軟件使用FlowJo software(Becton Dickinson)進(jìn)行分析。

1.2.3 血清IL-21檢測(cè):使用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒檢測(cè)各樣本血清IL-21,根據(jù)制造商說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。使用微板閱讀器在450nm處用分光光度法測(cè)量吸光度,并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制,標(biāo)準(zhǔn)水平以pg/ml表示。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組年齡、性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CHD組收縮壓、舒張壓均高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般臨床資料比較

2.2 兩組外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21水平比較 與對(duì)照組相比,CHD組外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 兩組外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21水平比較

2.3 CHD患者外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21與Gensini評(píng)分相關(guān)系數(shù) CHD患者外周血Tfh細(xì)胞百分比及IL-21與Gensini評(píng)分呈正相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.715、0.695,P均<0.001)。

3 討論

CHD是一種常見(jiàn)的心血管疾病,好發(fā)于中老年人群,其基本病理改變是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)是一種慢性炎癥性疾病,炎癥反應(yīng)是AS的重要使動(dòng)因素,并貫穿病程始終促進(jìn)病情進(jìn)展[2]。近年來(lái)T細(xì)胞在AS過(guò)程中的疾病促進(jìn)或血管內(nèi)壁保護(hù)作用得到了學(xué)者們的高度關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞亞群如Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞功能異常是AS發(fā)生發(fā)展的重要原因之一[4]。以上結(jié)果表明未來(lái)T細(xì)胞有可能成為AS診治的新靶點(diǎn)。

本研究著眼于Tfh細(xì)胞及其分泌的重要促炎細(xì)胞因子IL-21,通過(guò)檢測(cè)CHD患者外周血Tfh細(xì)胞及血清IL-21水平,與非CHD患者進(jìn)行比較;同時(shí)結(jié)合CHD患者Gensini評(píng)分發(fā)現(xiàn):CHD患者外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21水平明顯升高;CHD患者外周血Tfh細(xì)胞百分比及血清IL-21水平與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)。

Tfh細(xì)胞是一群獨(dú)立的CD4+T細(xì)胞亞群,在體液免疫激活過(guò)程中起重要的輔助作用,其主要功能是促進(jìn)B細(xì)胞分化成熟、抗體類(lèi)別轉(zhuǎn)換及抗體分泌,其功能異常與多種自身免疫疾病及腫瘤明確相關(guān)[3]。作為體內(nèi)重要的促炎細(xì)胞,Tfh細(xì)胞在AS病程中同樣具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)AS易感小鼠的Tfh細(xì)胞功能亢進(jìn)[4];在高膽固醇飲食小鼠模型中可阻斷Tfh細(xì)胞,誘導(dǎo)共刺激因子通路(ICOS),使Tfh細(xì)胞明顯減少,同時(shí)減緩AS病情進(jìn)展[6]。表明Tfh細(xì)胞參與AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程,并可能在其中起重要的調(diào)節(jié)作用,但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究,并且目前少有類(lèi)似針對(duì)人類(lèi)的研究。本研究主要探討CHD患者外周血Tfh細(xì)胞與患者病情嚴(yán)重程度的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)CHD患者外周血Tfh細(xì)胞百分比明顯升高,且與Gensini評(píng)分呈正相關(guān),表明在CHD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有Tfh細(xì)胞參與,且Tfh細(xì)胞百分比升高對(duì)CHD病情進(jìn)展具有促進(jìn)作用。此結(jié)果與以往研究結(jié)果類(lèi)似,但其具體機(jī)制及過(guò)程有待進(jìn)一步研究。推測(cè)CHD過(guò)程中Tfh細(xì)胞數(shù)量、比例或功能異常可能促進(jìn)CHD發(fā)生發(fā)展。

本文結(jié)果還發(fā)現(xiàn),CHD患者血清IL-21明顯升高。體內(nèi)IL-21的主要由Tfh細(xì)胞分泌[7],CHD患者血清IL-21升高可能是因?yàn)橥庵苎猅fh細(xì)胞升高導(dǎo)致。同時(shí)本研究也發(fā)現(xiàn),CHD患者血清IL-21水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度呈正相關(guān)。表明IL-21與CHD發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雖然目前尚缺乏研究闡明IL-21在AS過(guò)程中的具體作用,但研究發(fā)現(xiàn)IL-21與Th17細(xì)胞分化成熟及其功能密切相關(guān),阻斷IL-21通路可使小鼠Th17細(xì)胞比例明顯減低[8],IL-21受體表達(dá)減低的Th17細(xì)胞功能減退[9]。同時(shí)IL-21還可以通過(guò)抑制FoxP3表達(dá)抑制Treg細(xì)胞分化成熟,直接影響Th17/Treg比值[8]。Th17細(xì)胞或Th17/Treg比值升高已被證明與CHD發(fā)病密切相關(guān)[10],推測(cè)IL-21可能通過(guò)促進(jìn)Th17細(xì)胞分化成熟或影響Th17/Treg比值參與CHD發(fā)生發(fā)展。IL-21在CHD中的作用及具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究證明。

綜上所述,CHD患者Tfh細(xì)胞及IL-21水平升高,且與患者冠脈狹窄程度呈正相關(guān),提示Tfh細(xì)胞及IL-21參與CHD發(fā)生發(fā)展,但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。此外本實(shí)驗(yàn)仍有一定局限性。本實(shí)驗(yàn)樣本量有限,今后需要進(jìn)行深入的多中心研究以便更好地驗(yàn)證以上結(jié)論。同時(shí)在以后的研究中應(yīng)對(duì)Tfh細(xì)胞及IL-21參與CHD發(fā)病的具體機(jī)制進(jìn)一步深入研究,有利于更全面了解CHD的發(fā)病機(jī)制,為CHD的診治尋找可能的新方向。