宮腔粘連患者經陰道超聲血流參數與子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達的關系

伍 娟

湖南省懷化市中醫醫院B超科 418000

宮腔粘連(intrauterine adhesion,IUA)是指發生在子宮內膜損傷后的纖維化病變,相關資料顯示[1],女性流產后IUA的發生率可高達30%左右。該病患者臨床常表現為子宮生理功能缺失、月經量減少、周期性腹痛、妊娠異常等情況,嚴重者可出現繼發性不孕不育,給患者的身心健康帶來了極大的危害[2]。因此一旦發現宮腔粘連的影像學表現,應積極采取有效的手段鑒別其患病情況,及早發現、積極治療。宮腔鏡檢查是目前診斷IUA的金標準,但該方法屬于侵入性操作,對機體產生一定創傷,陰道二維超聲檢查也是診斷IUA的常用方法,二維超聲雖然可測量子宮內膜厚度,但無法全面顯示出宮腔整體形態,對診斷IUA存在一定困難[3]。陰道三維超聲血流參數可體現出檢查者宮腔血流灌注情況,子宮內膜狀況與宮腔血供情況緊密聯系[4],但陰道超聲血流參數與子宮內膜相關指標之間是否存在關系尚不清楚。鑒于此,本研究特通過回顧性分析探討經陰道超聲血流參數與宮腔粘連患者血清ER、PR、VEGF、LIF水平及子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達的關系,更深入挖掘陰道超聲檢查在此類患者中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 對醫院2018年10月—2019年10月收治的65例IUA患者的臨床資料(設為研究組)進行回顧,同時回顧同時間段在醫院進行全身體檢及陰道超聲檢查的61例健康者的體檢資料(設為對照組),均符合納入與排除標準。研究組:年齡23～45歲,平均年齡(35.38±4.36)歲;對照組:年齡22～48歲,平均年齡(36.45±5.07)歲。2組上述臨床資料相接近(P>0.05),本次研究經過醫院倫理委員會審批通過。納入標準:(1)經檢查證實研究組為IUA者,對照組均為健康者;(2)均實施子宮內膜指標檢測、陰道超聲檢查者;(3)IUA患者均有完整的臨床資料,對照組健康者均有完整的體檢資料;(4)患者同意對其臨床資料進行分析,對照組健康者同意對其體檢資料進行調閱和分析。排除標準:(1)重要臟器功能障礙者;(2)伴有急性感染者;(3)伴有其他類型生殖系統疾病者;(4)免疫功能異常者;(5)存在精神、認知或溝通障礙者;(6)依從性差者;(7)妊娠者;(8)近3個月內獻血者;(9)陰道超聲檢查或子宮內膜容受性指標檢測結果模糊不清、難以辨認者。

1.2 方法

1.2.1 陰道三維超聲檢查方法:IUA患者與體檢者均利用GE-VolusonE8超聲診斷儀(美國GE公司)進行檢查,檢查時間均為月經周期的第18～20天,檢查所用陰道三維超聲探頭為RIC5-9,頻率為5～9MHz。排空膀胱,仰臥于檢查床上取截石位,采用探頭對子宮及其雙附件進行檢查,取子宮長軸矢狀切面作為起始平面,顯示屏上清晰顯出子宮輪廓及內膜,之后固定探頭,調節三維取樣框范圍,包含整個宮腔,設定探頭掃查60°范圍,對子宮內膜感興趣部位三維成像取樣,取樣時囑托檢查者屏住呼吸,之后進行自動掃描完成圖像采集取樣。取樣后,對所獲的圖像采用容積模式進行三維重建,得到冠狀面、橫斷面、矢狀面3個平面的聲像圖,對其進行勾畫可自動得出血流指數(FI)、血管指數(VI)、血管化血流指數(VFI)。

1.2.2 血清指標水平的檢測方法:所有患者和對照組均于陰道三維超聲檢查當天空腹抽取外周靜脈血5ml,按照3 500r/min轉速離心分離15min后,取上層清液分別采用放射免疫法、放射免疫法、酶聯免疫法、酶聯免疫法檢測血清雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、血管內皮生長因子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)水平,所用試劑盒均購自上海酶聯生物科技有限公司,所用全自動生化分析儀為美國貝克曼庫爾特公司AU5800型。

1.2.3 子宮內膜指標表達的檢測方法:所有患者進行宮腔鏡檢查過程中提取子宮內膜組織標本,將標本進行生理鹽水消毒,隨后在10%的甲醛溶液中穩定,采用免疫組化檢測方法測定子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達水平,將穩定后的組織經石蠟包埋后切片,利用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化物酶連接法進行測定,滴加的鼠抗人ER、PR、VEGF、LIF抗體均由Lecia Novocastra公司提供,嚴格按照試劑說明書進行操作,40℃條件下孵育過夜,沖洗,切片經SP染色,置于CHK型號Olympus顯微鏡下以400×觀察,共選取5個視野,每個視野計數100個細胞,ER、PR定位于細胞核染色,VEGF、LIF定位于細胞質染色,染色程度為無色、淡棕色、棕色、棕褐色,分別記為0分、1分、2分、3分,以染色范圍<5%、≥5%且<20%、≥20%且<50%、≥50%分別記為0分、1分、2分、3分,求染色程度與染色范圍評分的總和,將結果為0～1分者記為蛋白陰性表達,否則記為蛋白陽性表達。每個切片在高倍鏡下(10×40)進行篩選,篩選出陽性表達較強區域,利用Olympus顯微鏡圖像分析系統對隨機選擇的5個視野彩色圖像進行采集與儲存,分析圖像時首先對陽性目標進行彩色分割、編輯、定量分析,在取得滿意圖像后,計算出每個視野下陽性目標中的平均光密度(Mean optical density,MOD)值,MOD=sum(IOD)/sum(area)。

1.3 觀察指標 (1)對比2組陰道超聲血流參數(FI、VI、VFI水平)變化情況。(2)對比2組血清ER、PR、VEGF、LIF水平。(3)統計研究組子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF (MOD值)表達情況。(4)研究組陰道超聲血流參數與血清子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達的相關性。

2 結果

2.1 2組陰道超聲血流參數對比 研究組FI、VI、VFI水平均低于對照組(P<0.05),見表1。

表1 2組陰道超聲血流參數對比

2.2 2組血清ER、PR、VEGF、LIF水平對比 研究組血清ER、PR水平均低于對照組(P<0.05),VEGF和LIF水平均高于對照組(P<0.05),見表2。

表2 2組血清ER、PR、VEGF、LIF水平對比

2.3 研究組子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF (MOD值)表達結果 研究組ER、PR、VEGF、LIF表達水平(MOD值)分別為(9.74±1.54)、(7.45±1.09)、(2.35±0.27)、(2.59±0.31),見圖1。

a b

2.4 研究組陰道超聲血流參數與血清水平及子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達的相關性分析 研究組FI、VI、VFI均與血清ER、PR水平及子宮內膜ER、PR表達呈正相關(P<0.05),與血清VEGF、LIF水平及子宮內膜VEGF、LIF表達呈負相關(P<0.05),見表3和表4。

表3 患者陰道超聲血流參數與血清ER、PR、VEGF、LIF水平的相關性分析

表4 患者陰道超聲血流參數與子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達的相關性分析

3 討論

IUA的發生機制尚不明確,宮腔手術操作不當、宮腔感染、放射性環境等均可導致該病的發生,當女性子宮內膜發生損傷后,短時間內膠原纖維會出現過度增生,隨之抑制機體的內膜生長,一旦膠原纖維增生超過生理限度則會有瘢痕出現,最終導致IUA的發生[6-7]。診斷IUA的常用方法有宮腔鏡、陰道超聲檢查等,但宮腔鏡檢查存在創傷大、疼痛等問題,陰道二維超聲檢查不能全面顯示出宮腔情況,易出現誤診、漏診情況。三維陰道超聲檢查可清晰顯示出患者宮腔冠狀面圖像,可直觀觀察到全面宮腔情況,并可對患者子宮內膜的血流信號進行分析[8]。目前關于經陰道超聲血流參數是否可作為評價IUA患者子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達情況的指標尚不明確,仍需進一步探討,探索IUA患者陰道超聲血流參數差異及其與子宮內膜相關指標表達的關系對此類患者的診斷、治療具有重大的意義。

本次研究發現,研究組FI、VI、VFI水平均低于對照組,表明在IUA患者中經陰道超聲血流參數均有典型的異常表現,是反映患者疾病狀況的重要參考指標;研究組IUA患者子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達均存在異常。VI是患者血流信號的容積在感興趣區容積的占比;FI反映了感興趣區內的血流平均速度,以0～100之間的數字表示;VFI可反映患者感興趣區內血流灌注情況[9]。子宮內膜與女性囊胚定位、侵入、胚胎著床緊密相關,IUA患者因為粘連處內膜無法正常生長,進而導致其血供不佳,血流灌注減少,則表現為內部血流信號弱,故通過計算子宮內膜內血流及血管指數,可對IUA患者子宮內膜血供、粘連情況進行判斷[10]。LIF是一種多效性糖蛋白,在細胞生長、增殖、分化中起到重要作用,表達水平隨著女性月經情況發生變化。研究表明[11],LIF主要在子宮內膜中發揮作用,通過調控細胞中的基因表達對胚胎著床結果產生影響,進而影響子宮內膜相關指標的表達。雌、孕激素是影響子宮內膜功能的重要激素,屬于蛋白質分子,通過與其受體結合并相互作用,在子宮內膜發育至容受狀態起到調節作用,直接影響胚胎著床、發育,故ER、PR的表達水平直接影響子宮內膜的功能。VEGF是血管生成因子,具有誘導血管內皮細胞增殖分裂、促使新血管生成的作用,VEGF表達水平可反映出子宮內膜的血供情況,是胚胎著床過程中的重要影響因子。既往研究表明[12],在IUA患者中,ER、PR表達偏低,而VEGF、LIF表達水平偏高,本研究結果中血清ER、PR、VEGF、LIF水平及子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達結果與上述報道均相符,提示上述指標均可作為評價IUA患者子宮內膜功能的重要指標。

另外,本研究還發現,研究組FI、VI、VFI均與血清ER、PR水平及子宮內膜ER、PR表達均呈正相關,與血清VEGF、LIF水平及子宮內膜VEGF、LIF表達均呈負相關,表明經陰道超聲血流參數與宮腔粘連患者子宮內膜功能有緊密的關系。分析其原因可能為:雌、孕激素及細胞生長因子直接影響著患者的子宮內膜功能,雌、孕激素通過對子宮內膜發育至容受狀態的調節,直接或間接使相關因子的表達水平出現變化,對子宮內膜的血流狀況產生影響,進而使經陰道超聲檢查血流參數發生異常;VEGF、LIF的表達可顯著影響患者的子宮內膜營養狀況及血供情況,使患者血管、血流情況發生異常,對經陰道超聲檢查血流參數產生一定影響[13]。

綜上所述,IUA患者陰道超聲血流參數FI、VI,血清及子宮內膜ER、PR等均有明顯異常,且陰道超聲血流參數與子宮內膜ER、PR、VEGF、LIF表達均有相關性,提示在IUA患者的診斷中可將陰道超聲血流參數作為參考,并將其作為評估子宮內膜功能的重要依據,充分利用陰道超聲檢查的價值。