特發性血小板減少性紫癜患兒血清LXA4、ADAMTS-1水平及其在預后評估中的價值

劉朝陽,李 琛,宮經新,王文娟,朱翠敏,劉娜娜,劉秀芬

滄州市中心醫院兒內科,河北滄州 061000

特發性血小板減少性紫癜(ITP)是獲得性器官特異性自身免疫性疾病,是一種常見的臨床出血性疾病,發病機制尚不明確[1]。相關研究發現ITP的主要病理生理機制為體液免疫機制出現異常,引發血小板表面結合自身抗體,促使血小板在降解過程中暴露出隱匿性表位,此時抗原提呈細胞識別隱匿性表位的T細胞,激活血小板相關抗體,最終導致血小板減少[2]。脂氧素A4(LXA4)是內源性抗炎脂質介質中的一種,具有較強的抗炎作用,能在炎癥反應消退過程中發揮重要作用[3-4]。相關研究顯示,在培養的巨噬細胞中,LXA4能夠抑制脂多糖(LPS)誘導的炎癥極化,從而減少促炎細胞因子[白細胞介素(IL)-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)]的釋放并增加抗炎細胞因子(IL-4及IL-10)的釋放[5]。含凝血酶敏感素1型基序的解聚素樣金屬蛋白酶(ADAMTS-1)是血小板結合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(ADAMTS)的一個家族成員,該家族在調節血液及細胞外基質中細胞外蛋白的功能與結構方面發揮關鍵作用[6]。ADAMTS-1主要在巨噬細胞、血管平滑肌細胞及內皮細胞表達,參與生理病理過程的方式為降解細胞外基質蛋白[7]。雖然LXA4與ADAMTS-1表達都與巨噬細胞相關,但二者在ITP中的表達情況尚不清楚,本研究探討LXA4與ADAMTS-1在ITP患兒預后評估中的價值,以期能為ITP的治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2020年8月至2022年8月于本院確診的112例ITP患兒納入研究作為ITP組。其中,男59例,女53例,平均年齡(5.16±1.21)歲。納入標準:(1)符合ITP的相關診斷標準[8];(2)年齡1～12歲;(3)首次確診,依從性良好。排除標準:(1)先天畸形或發育不全;(2)肝腎等臟器功能受損或異常;(3)有感染性或慢性疾病;(4)有惡性腫瘤或惡性血液病;(5)有繼發性的血小板減少性疾病;(6)有免疫性或內分泌疾病。另選取同期于本院體檢的106例健康志愿者作為對照組。其中,男56例,女50例,平均年齡(5.14±1.18)歲。本研究經過醫院倫理委員會批準(批號:202000612-20),所有納入研究者臨床資料完整且本人及家屬均知曉本研究內容并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1標本采集 采集所有受檢者的血液標本,抽取患兒入院后次日清晨(對照組抽取體檢當天)的空腹靜脈血4 mL,室溫靜置25 min,離心10 min(3 000 r/min),對血清進行分離,取血清置于-80 ℃超低溫冰箱保存待用。

1.2.2指標檢測 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清LXA4與ADAMTS-1水平(試劑盒購自上海科艾博生物科技有限公司,貨號:CB11748-Hu、CB12469-Hu),嚴格按照試劑盒說明書的步驟操作。

1.2.3病情評估 依據血小板計數(PLT)以及出血情況對患兒病情進行評估[9]。輕度:受傷后出血且PLT為50×109/L～100×109/L;中度:未出現廣泛性出血,PLT為25×109/L～50×109/L;重度:自發性或廣泛性出血,病情嚴重,PLT<25×109/L。

1.2.4隨訪及預后的評價 對患兒進行為期6個月隨訪,隨訪方式為門診復查。隨訪截止時間為2023年2月28日。依據《血液病及治療標準》[10],將患兒分為預后良好組(32例)及預后不良組(80例)。預后良好判斷標準:出血消失,PLT恢復正常或PLT升高幅度>30×109/L,2個月內未復發;預后不良判斷標準:PLT升高不足30×109/L,2個月內復發,出血癥狀減輕但未消失。

2 結 果

2.1兩組血清LXA4、ADAMTS-1水平比較 與對照組相比,ITP組血清LXA4與ADAMTS-1的表達水平升高,差異均有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組血清LXA4、ADAMTS-1水平比較

2.2血清LXA4與ADAMTS-1水平的相關性分析 Pearson相關分析顯示,ITP組血清LXA4與ADAMTS-1水平呈正相關(r=0.577,P<0.05),見圖1。

圖1 血清LXA4與ADAMTS-1水平的相關性分析

2.3不同病情患兒血清LXA4與ADAMTS-1水平比較 與輕度組比較,中度組與重度組的血清LXA4與ADAMTS-1表達水平較高,差異有統計學意義(P<0.05);與中度組比較,重度組血清LXA4與ADAMTS-1水平較高,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同病情患兒血清LXA4與ADAMTS-1水平比較

2.4不同預后患兒血清LXA4與ADAMTS-1水平比較 預后不良組血清LXA4、ADAMTS-1水平高于預后良好組,差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 不同預后患兒血清LXA4與ADAMTS-1水平比較

2.5血清LXA4與ADAMTS-1用于預測ITP預后不良的價值分析 ROC曲線分析顯示,LXA4單獨預測ITP預后不良的AUC為0.695,ADAMTS-1單獨預測ITP預后不良的AUC為0.816,聯合預測ITP預后不良的AUC為0.882。聯合預測的AUC大于LXA4單獨診斷的AUC(Z=3.363,P=0.001)及ADAMTS-1單獨診斷的AUC(Z=2.534,P=0.011)。見表4,圖2。

表4 血清LXA4、ADAMTS-1單獨及聯合檢測對ITP預后不良的預測價值分析

圖2 血清LXA4、ADAMTS-1單獨及聯合預測ITP預后不良的ROC曲線

2.6Logistic回歸分析影響ITP預后的因素 以ITP預后是否良好為因變量(0=否,1=是),將血清LXA4、ADAMTS-1作為自變量,Logistic回歸分析顯示,LXA4與ADAMTS-1是ITP預后不良的危險因素,見表5。

表5 Logistic回歸分析影響ITP患兒預后的因素

3 討 論

ITP是一種獲得性自身免疫性疾病,在遺傳及環境因素的影響下,機體釋放出針對血小板的自身抗體,介導血小板的免疫清除過程,導致患者外周血的PLT降低[11]。目前還沒有針對ITP的明確診斷性檢查,因此ITP的診斷仍為排除性診斷[12]。所以尋找與開發與ITP相關的血清生物標志物對于ITP的診斷與預后具有重要意義。相關研究發現,在ITP的病理過程中,有細胞免疫的參與,免疫細胞能夠分泌相關的活性蛋白因子,調節機體細胞的生長分化,進而參與機體的免疫應答,最終在ITP的發生與發展中發揮關鍵作用[13-14]。

脂氧素(LX)是一類內源性的自體有效物質,其作用為減少組織損傷以及促進炎癥的消退。LXA4是LXs家族的一員,是內源性花生四烯酸的代謝物,其可以在與甲酰肽受體樣1(FPRL1)的G蛋白偶聯受體結合時,表現出有效的抗炎和促催化功能[15]。LXA4主要由內皮細胞、上皮細胞及免疫細胞(包括巨噬細胞及中性粒細胞)產生,能夠在細胞中起到抗炎反應及促炎反應消退的作用。LXA4在多種疾病發病及發展中發揮抗炎作用以及促炎的消退作用[16-17]。LXA4通過抑制細胞因子和基質金屬蛋白酶的釋放抑制人滑膜成纖維細胞的炎癥反應,在類風濕關節炎患者的滑膜組織及滑液中LXA4的水平升高[18]。LXA4對炎性巨噬細胞極化的抑制作用與NF-κBp65和IRF5活性下調相關[5]。過敏性紫癜患兒中血清LXA4的表達水平升高,與患兒病情嚴重程度相關[19]。本研究結果顯示,在ITP患兒血清中,血清LXA4的表達水平升高,而且隨著病情的不斷加重,血清LXA4的水平也逐漸升高,這提示LXA4不僅參與了ITP的發生而且與患兒的病情嚴重程度相關,可能的原因是ITP疾病發生時引發花生四烯酸的代謝異常升高,作為花生四烯酸的代謝物,LXA4的水平也異常上升,具體的作用機制及作用過程還需要進一步的探索。

ADAMTS細胞外蛋白酶家族由19個成員組成,在組織發育和體內平衡中具有不同的作用。ADAMTS-1基因定位在染色體21q21-q22,其相對分子質量約為100×103,由其編碼的蛋白質包含951個氨基酸,該基因能在機體的不同組織中廣泛表達,進而參與機體的生長發育過程、組織的炎癥反應、生殖系統的形成過程等一系列生理病理活動[20]。相關研究顯示,牙周炎患者ADAMTS-1水平顯著升高,并且與臨床附著水平及探查袋深度顯著相關[21]。在冠心病患者血清中ADAMTS-1與炎癥因子IL-18、IL-8、IL-6、高遷移率族蛋白B1(HMGB1)呈正相關,ADAMTS-1可以反映冠心病患者機體的炎癥程度[22]。在本研究中,ITP患兒血清ADAMTS-1水平高于健康兒童,并且隨著病情的嚴重,ADAMTS-1的水平進一步升高,ADAMTS-1可能是通過炎癥反應進而引發ITP患兒病情的加重,具體的作用途徑尚需探索。

本研究中,LXA4與ADAMTS-1呈正相關,可能通過同一信號通路參與了ITP的發生與發展過程,具體作用路徑還需要進一步研究。預后不良組血清LXA4與ADAMTS-1水平明顯高于預后良好組,這提示血清LXA4與ADAMTS-1可能與ITP患兒的預后相關,可能是ITP潛在的治療靶點。ROC曲線分析顯示,LXA4單獨預測預后不良的AUC為0.695,ADAMTS-1單獨預測的AUC為0.816,這表明ADAMTS-1的單獨預測具有一定的價值,LXA4與ADAMTS-1單獨預測的截斷值分別為71.33 nmol/L、17.15 μg/L,提示當患兒血清中LXA4>71.33 nmol/L或ADAMTS-1>17.15 μg/L時,可能有較大的預后不良風險。二者聯合預測的AUC進一步的提升為0.882,這表明二者聯合預測ITP患兒預后不良具有更大的價值,能夠彌補血清單項檢測的不足,在臨床中的參考價值更大。Logistic回歸分析顯示,LXA4與ADAMTS-1是ITP預后不良的危險因素,這提示LXA4、ADAMTS-1與ITP患兒的預后密切相關,可以為ITP患兒的治療提供參考。

綜上所述,ITP患兒血清LXA4與ADAMTS-1表達水平升高,二者呈正相關,是ITP預后不良的危險因素,二者聯合使用對ITP預后不良具有一定的預測價值。但本文選取的樣本量還不夠大,人群范圍也不夠大,后期將擴大樣本量進一步分析LXA4與ADAMTS-1在ITP中發生發展的作用機制,以期能為ITP的治療提供幫助。