血清IL-7和Hcy水平與胃癌患者Lauren分型及病灶內上皮間質轉化的關系

宮向良,劉 征,徐愛芳,李世龍,丁 梅,宋 揚

1.唐山中心醫院腔鏡外科,河北唐山 063000;2.唐山市人民醫院檢驗科,河北唐山 063000

胃癌發病的隱匿性較高,大部分患者確診時已為中晚期,盡管通過治療能延長一段生存時間,但胃癌復發率較高,預后不良者較多。胃癌的診斷主要依靠胃鏡、組織病理檢查,但均存在一定的局限和不足,大范圍篩查比較困難。腫瘤標志物的研究取得較大進展,很大程度提升了診斷效率[1]。白細胞介素(IL)-17是重要促炎因子,與各種炎癥的發生均緊密相關[2]。同型半胱氨酸(Hcy)屬氨基酸代謝物,在各種癌癥患者血清中呈高水平[3]。為了結合癌細胞生物學評估預后,人們提出了多種胃癌分型方法,其中Lauren分型是臨床中應用最廣的一種,腸型與彌漫型胃癌的高發年齡、性別、生長轉移方式存在區別[4]。研究表明,炎癥在胃癌的疾病進展中起到十分關鍵的作用,炎癥微環境可以促進腫瘤侵襲轉移。炎癥可誘導上皮間質轉化(EMT),促進腫瘤侵襲。同時,神經降壓素(NTS)/IL-8介導的炎癥反應也已被證實在結腸癌侵襲中發揮作用[5]。在前期工作中,本課題組通過生物信息學挖掘,發現胃癌中NTS與炎癥基因表達緊密相關。因此,本研究通過免疫組化法驗證胃癌中是否存在NTS異常表達,同時也分析了胃癌患者血清IL-17、Hcy水平與胃癌患者Lauren分型及病灶內EMT相關指標的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 將唐山中心醫院2021年5月至2023年5月收治的原發性胃癌患者78例納入研究作為胃癌組。納入標準:(1)經胃鏡、病理檢查確診;(2)無法手術,局部晚期或轉移性胃癌;(3)可耐受且愿意接受治療;(4)血常規及肝功腎功檢查結果正常。排除標準:(1)近1個月服用過影響研究的藥物;(2)合并其他惡性腫瘤,或有嚴重感染、心梗、中風;(3)有既往治療史;(4)混合型或其他無法分型胃癌患者。另外,選取同期于唐山中心醫院就診及治療的78例胃良性病變者作為良性病變組,選取同期于唐山中心醫院體檢的健康者78例作為健康對照組。胃癌組中,男41例、女37例,年齡40～75歲、平均(56.19±10.01)歲;病變部位:胃竇19例、胃體28例、賁門31例;侵入深度:早期34例、進展期44例;TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期33例,Ⅲ～Ⅳ期45例;分化程度:高、中、低分化分別24、19、35例;轉移:有轉移31例,無轉移47例。良性病變組中,男39例、女39例,年齡41～76歲、平均(56.22±10.02)歲;病變類型:慢性淺表性、萎縮性胃炎分別為37、26例,不典型增生15例。對照組中,男44例、女34例,年齡41～76歲、平均(56.12±10.06)歲。3組間,年齡、男女性別比例等一般資料比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。納入研究者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1血清IL-7和Hcy檢測 胃癌組于術前(良性病變組和健康對照組分別于就診日或體檢當日)取清晨空腹靜脈血3～5 mL,置于低溫離心機,以2 500 r/min,離心10 min,取上清液,置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶連免疫吸附測定法(ELISA)檢測IL-17,檢測試劑盒購自上海臻科生物科技有限公司,檢測儀器為多功能酶標儀(型號為EnVision Nexus,瑞孚迪生物醫學公司)。采用全自動生化分析儀(型號為SK6000,深圳市盛信康科技有限公司)檢測Hcy,檢測試劑盒購北京康思潤業生物。嚴格按相關說明書及性能操作。

1.2.2病灶內EMT相關指標檢測 根據Lauren分型標準[6]將胃癌患者分為彌漫型胃癌組(35例)和腸型胃癌組(43例)。將胃癌組患者經手術切除的胃癌組織做成組織切片,取良性病變組胃鏡活檢組織做成病灶組織切片。采用免疫組化法檢測組織中的NTS、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)、血管內皮生長因子(VEGF)、β-連接素(β-catenin)、上皮性鈣黏附蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CD68D等EMT相關指標。具體步驟:取標本切片經脫蠟、抗原修復、去過氧化物酶及封閉后,每個樣品滴加50 μL上述指標的相應一抗4 ℃過夜,二抗于37 ℃孵育0.5 h,DAB顯色,復染,脫水干燥,透明,封片,顯微鏡下觀察染色結果。兔抗人MMP-9多克隆抗體、鼠抗人VEGF、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin單克隆抗體、CD68、抗鼠/兔二步法檢測試劑盒、稀釋液、DAB顯色劑、均購自福州邁新生物公司。NTS、IL-8的一抗則購自上海恪敏生物科技。陽性細胞評定標準:細胞質、胞膜有棕黃色顆粒,NTS、IL-8、VEGF、MMP-9著色于胞質,CD68著色于胞質和胞膜。顯微鏡下隨機選10個高倍鏡(×400)視野,每個視野計數100個細胞[7],計算細胞染色陽性率(PR)。

2 結 果

2.13組血清IL-7和Hcy水平比較 胃癌組血清IL-17、Hcy水平均高于良性病變組及健康對照組,良性病變組血清IL-17、Hcy水平均高于健康對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 3組血清IL-7和Hcy水平比較

2.2胃癌組與良性病變組病灶EMT相關指標PR比較 胃癌組病灶組織NTS、IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin的PR均高于良性病變組(P<0.05),見表2。

表2 3組EMT相關指標PR比較

2.3不同Lauren分型胃癌患者的血清IL-7和Hcy水平比較 腸型胃癌組血清IL-17、Hcy水平高于彌漫型胃癌組(P<0.05),見表3。

表3 不同Lauren分型胃癌患者的血清IL-7和Hcy水平比較

2.4血清IL-7和Hcy水平與病灶內EMT相關指標PR的關系 Pearson相關分析顯示,血清IL-7和Hcy水平與病灶組織NTS、IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、β-catenin、E-Cadherin、Vimentin等EMT相關指標PR均呈正相關(P<0.05),見表4。

表4 血清IL-7和Hcy水平與病灶內EMT相關指標PR的關系

續表4 血清IL-7和Hcy水平與病灶內EMT相關指標PR的關系

3 討 論

胃癌是消化道常見腫瘤,其發病受諸多因素共同影響。臨床實踐證實,慢性胃炎、潰瘍等均可發展為胃癌,因其早期無典型癥狀,大部分患者確診時已發展為胃癌晚期,錯過了最佳治療時機[8]。胃癌的發病機制尚未完全明確,但可以肯定的是,通過有效篩查可以降低胃癌病死率[9]。胃鏡及病理檢查作為臨床診斷金標準,雖然診斷準確率高,但胃鏡檢查造成的痛苦大,而且心腦血管疾病患者對此無法耐受,存在局限性[10]。

炎癥是誘發胃癌的重要因素,隨病情進展,機體炎癥免疫反應會加重。IL-17是由Th17細胞分泌,IL-17與其受體IL-17R結合,誘導炎癥因子分泌,發揮促炎效應,增強免疫反應及造血功能等[11]。IL-17在多種類型癌癥患者血清中呈高水平,而且與腫瘤血管生成緊密相關[12]。RAO等[13]的研究顯示,與健康者相比,胃癌患者血清IL-17水平更高。胃癌組織中IL-17B、IL-17RBD均高表達,提示IL-17與胃癌疾病進展可能存在關系。本研究結果顯示,胃癌組血清IL-17水平高于良性病變及健康對照組,原因可能為IL-17能促進腫瘤微血管生成和細胞分化。Hcy是蛋氨酸去甲基化的產物,能在維B12及葉酸等的催化下再代謝。談利等[14]的研究結果與本研究結果相似,但是其未具體分析Lauren分型與IL-17水平的關系。ZHAO等[15]的研究顯示,Hcy在癌前病變組織中均有不同程度的表達,也在胃癌中高表達,此外,其還參與胃癌的發生發展,可作為早期鑒別診斷胃癌及癌前病變的指標。

EMT屬生物過程,可使上皮細胞發生多次生化改變,是上皮源性癌癥復發轉移的基礎。在NTS、IL-8均為陽性的胃癌樣本中觀察到很多炎癥蛋白及E-Cadherin膜表達丟失和胞漿內β-catenin和Vimentin堆積,VEGF、MMP-9高表達,CD68+腫瘤相關巨噬細胞(TAMs)浸潤,提示NTS/IL-8活化致胃癌中炎癥反應增強,NTS/IL-8活化參與胃癌EMT[16]。

胃癌屬于異質性疾病,有腸型及彌漫型兩種組織分化類型[17]。本研究分析了兩種Lauren分型的胃癌患者間血清IL-7和Hcy水平差異,發現腸型胃癌組血清IL-7和Hcy水平較高,提示血清IL-7和Hcy水平與胃癌組織病理分型緊密相關。彌漫型胃癌主要由活動性炎癥引起,大面積侵襲胃壁,在胃體和全胃較為高發,腸型胃癌在胃竇和胃角等部位較為高發。彌漫型胃癌胞外基質重塑致腫瘤基質致密、血管生成,導致腫瘤抗原低表達,因此彌漫型胃癌的炎癥活動性較低。反之,腸型胃癌主要由慢性炎癥進展而來[18]。不同Lauren分型的胃癌患者的炎癥反應存在區別,可能為延緩胃癌的病情進展或阻斷其侵襲轉移的研究提供新思路。相關性分析結果提示,Hcy與胃癌患者Lauren分型及病灶內EMT相關指標PR有相關性。余璠等[19]分析發現胃癌患者外周血Hcy水平升高,其水平與腫瘤分化程度、病理分期、淋巴結轉移有關,Hcy水平可作為疾病診斷/篩查與預后評估指標,但是該研究并未進一步分析Hcy與胃癌患者Lauren分型及病灶內EMT相關指標的關系。

綜上所述,IL-17、Hcy在胃癌患者血清中呈高水平,與Lauren分型及病灶內EMT相關指標有關。