miR-27a和miR-128在種植體周圍炎患者齦溝液中的水平及其與骨吸收的關系

沈苗苗,陳 玲,翟云霞

1.上海長征醫院口腔科,上海 200001;2.上海中醫藥大學附屬龍華醫院病理科,上海 230032

種植體周圍炎是一種免疫介導的炎癥性疾病,表現為種植牙周圍軟組織炎癥和骨吸收加速,會長期影響種植體,甚至最終導致牙種植修復失敗[1]。大約四分之一種植牙患者患有種植體周圍炎,并且每年放置的植入物數量不斷增加,導致種植體周圍炎發生情況增加[2]。因此,種植體周圍炎的早期發現和治療對于牙齒健康至關重要。近年來關于miRNA在炎癥性疾病(如牙周病)病理過程以及骨形成和重塑中的作用研究越來越多[3]。miR-27a過表達有效減少了支氣管肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素(IL)-6和IL-1β水平[4],miR-27a能夠有效抑制炎癥反應[5-6],miR-128過表達增強了正常大鼠腎細胞中促炎細胞因子和纖維化相關基因的表達[7],但miR-27a和miR-128與種植體周圍炎骨吸收的關系鮮有報道。因此,本次研究將探討miR-27a和miR-128在種植體周圍炎患者齦溝液中的水平及其與骨吸收的關系,以期為臨床種植體周圍炎的研究提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年1月至2021年12月于上海長征醫院口腔科(下稱本院)進行牙種植修復的136例患者納入研究,根據種植牙狀況分為健康種植體患者[探診深度(PD)≤3 mm,齦溝出血指數(SBI)≤2]66例(健康組)和種植體周圍炎患者(PD>3 mm,SBI>2)70例(炎癥組)。健康組:男36例、女30例,年齡22～38歲、平均(28.50±3.12)歲,體重指數(BMI)為(22.45±2.65)kg/m2。炎癥組:男38例、女32例,年齡22～40歲,平均(28.30±3.21)歲,BMI為(22.48±2.64)kg/m2。另外,選擇同期于本院檢查的牙齦健康志愿者70例作為對照組,其中男37例、女33例,年齡21～38歲、平均(28.60±3.18)歲,BMI為(22.51±2.69)kg/m2。種植體周圍炎患者納入標準:(1)符合種植體周圍炎診斷標準[8];(2)首次進行種植牙修復術;(3)種植修復完成后6個月進行相關檢查,種植前后影像學資料完整。排除標準:(1)患有慢性咽炎等炎癥性疾病;(2)妊娠期或哺乳期女性;(3)近期使用過抗菌藥物;(4)患有免疫性疾病。

1.2方法

1.2.1齦溝液中miR-27a和miR-128的水平檢測 所有受試者使用清水漱口,采用無菌的干燥棉球擦干牙齒表面,使用探診去除菌斑,氣槍吹牙齦處,用2 mm×15 mm的濾紙條插進牙齦下1 min,取出可用于檢測的浸潤長度并剪下置于100 μL的生理鹽水中,勻速振蕩2 h,以1 500 r/min離心8 min,取其上清液待用。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qPCR)檢測齦溝液中miR-27a和miR-128的水平。使用TRIzol RNA提取試劑(貨號:R1030,北京普利萊基因技術有限公司)提取總RNA,采用反轉錄試劑盒(貨號:HY-K0510A,美國MedChemexpress生物科技公司)將RNA反轉成cDNA,使用2×SYBR Green Fast qPCR Mix(貨號:G3325-01,北京博沃爾斯生物科技有限公司)進行qPCR反應。反應總體系為18 μL:2×SYBR Green Fast qPCR Mix 9 μL,上、下游引物各0.9 μL,cDNA 0.8 μL,ddH2O 6.4 μL。反應條件:95 ℃ 5 min,95 ℃ 10 s,59 ℃ 30 s,72 ℃ 10 s,共40個循環。循環結束后,立即分析熔解曲線。重復3次,采用U6作為miR-27a和miR-128檢測的標準化內參,采用-ΔΔCt法計算miR-27a和miR-128的相對表達水平。引物序列如下,正向miR-27a 5′-ATGGTTCGTGGGTTCACA-3′,反向5′-GTGGCTAAGTTCCGACG-3;miR-128正向5′-GGTCACAGTGAACCGGTC-3′,反向5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3;U6正向5′-GCTTCGGCAGCACATATAAAAT-3′,反向5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3。所有引物由金唯智生物科技有限公司合成。

1.2.2資料收集 收集所有納入研究者PD、SBI、齦溝液量及齦溝液中α、IL-6、IL-4水平的數據。

1.2.3骨吸收量測定 所有患者行種植修復術后即刻和6個月后分別行錐形束CT(CBCT)檢查,并采用相應軟件進行圖像處理及分析,采用Planmeca remexis軟件測量牙槽嵴高度[9],即為種植體根部到頸部的垂直距離,高度變低的數據即為骨吸收量。

2 結 果

2.1各組一般資料以及臨床指標比較 與對照組相比,炎癥組和健康組PD、SBI、齦溝液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平升高,IL-4水平降低,差異均有統計學意義(P<0.05);與健康組相比,炎癥組PD、SBI、齦溝液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均升高,IL-4水平降低,差異均有統計學意義(P<0.05)。三組間性別、年齡、BMI比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組一般資料及檢測指標比較(n/n或

2.2三組齦溝液中miR-27a和miR-128的水平比較 與對照組比較,炎癥組和健康組齦溝液中miR-27a水平降低,miR-128水平升高,差異均有統計學意義(P<0.05);與健康組比較,炎癥組齦溝液中miR-27a水平降低,miR-128水平升高,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 三組齦溝液中miR-27a和miR-128的相對表達水平比較

2.3種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a和miR-128的水平的相關性分析 種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a和miR-128水平呈負相關(r=-0.365,P=0.002),見圖1。

圖1 種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a和miR-128水平的相關性分析

2.4齦溝液中miR-27a和miR-128水平與臨床指標的相關性分析 種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a的水平與PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均呈負相關(P<0.05),與IL-4水平呈正相關(P<0.05);miR-128水平與PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平均呈正相關,與IL-4水平呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 齦溝液中miR-27a和miR-128水平與臨床指標的相關性分析

3 討 論

盡管種植牙成功率很高,但種植體周圍炎是種植牙中最常見的并發癥[10-12]。既往研究表明,近45%的種植體部位和近55%的種植體患者可能患有種植體周圍炎,這主要表現為種植體周圍組織損傷,特別是種植體周圍炎癥及骨吸收[13]。因此,研究與種植體周圍炎相關的生物標志物對種植體周圍炎的治療具有重要意義。

miR-27a-3p上調抑制滑膜成纖維細胞增殖和炎癥[14]。miR-27a在遭受創傷性腦損傷的腦組織中水平降低,并且miR-27a過表達會抑制促凋亡Bcl-2蛋白表達,減弱神經元凋亡[15]。有研究表明,miR-27a過表達通過抑制創傷性腦損傷后叉頭蛋白O3A抗體介導的神經元自噬來改善腦損傷部位炎癥[16]。本研究表明,與對照組相比,炎癥組和健康組齦溝液中miR-27a水平顯著降低,與健康組相比,炎癥組齦溝液中miR-27a水平顯著降低,提示miR-27a水平可能與種植體周圍炎的發生進程有關聯。進一步研究不同組別骨吸收量的情況,研究表明,與健康種植體患者和健康者相比,種植體周圍炎患者PD、SBI、齦溝液量、骨吸收量顯著升高[17]。本研究的結果表明,與對照組相比,炎癥組和健康組齦溝液中PD、SBI、齦溝液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平顯著升高,IL-4水平顯著降低,與既往研究結果一致[16],表明種植體患者存在骨吸收及炎癥。種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a水平與PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈負相關,與IL-4水平呈正相關,表明miR-27a與炎癥及骨吸收相關,進一步說明miR-27a可以成為評估種植體周圍炎骨吸收的生物學指標。

miR-128-3p在骨關節炎中的水平顯著升高[18]。發炎軟骨細胞中miR-128上調抑制軟骨細胞自噬,并通過影響Atg12加重膝關節骨關節炎[19]。本研究表明,與對照組相比,炎癥組和健康組齦溝液中miR-128水平顯著升高,與健康組相比,炎癥組齦溝液中miR-128水平顯著升高,提示miR-128可能參與炎癥反應,參與種植體周圍炎的發展。miR-128水平與PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈正相關,與IL-4水平呈負相關,表明miR-128水平與炎癥因子以及骨吸收量具有相關性,進一步表明miR-128在種植體周圍炎的發生過程中發揮重要的作用。相關性分析顯示,種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a和miR-128水平呈負相關關系,提示二者共同參與種植體周圍炎的進展。

綜上所述,種植體周圍炎患者齦溝液中miR-27a呈低水平,miR-128呈高水平,二者與骨吸收相關。但本次研究納入研究的樣本量較少,后期會擴大樣本量和延長研究隨訪時間,進行更為深層入的探討。