HPV E6/E7 mRNA 檢測在宮頸高級別病變診斷中的價值分析

周秀琴

宮頸癌是婦科惡性腫瘤, 對女性健康構成嚴重威脅, 宮頸癌篩查是我國公共衛生項目, 大部分宮頸癌的產生均與HPV 感染有關, 臨床對宮頸癌篩查的主要方式為宮頸液基薄層細胞學檢查(TCT)和HPV DNA 檢查, 但是有關研究表明, HPV E6/E7 mRNA 的表達可以反映HPV 基因活性, 能夠以此推斷感染水平以及致癌程度, 所以該項檢測逐漸被臨床所應用［1-3］。本次對于本院接收的進行宮頸高級別病變診斷的患者實施HPV E6/E7 mRNA 檢測以及HPV DNA 檢測的效果進行探究,報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2019 年12 月～2020 年12 月院內3200 例進行宮頸癌篩查的患者入組研究, 患者年齡為22～73 歲, 平均年齡為(42.84±10.06)歲。所有患者均進行TCT。對檢測結果轉陰者進行隨訪, 如果持續陽性且細胞學篩查沒有升級, 半年后復查行TCT, 并進行2 年的隨訪。所有患者均了解本研究內容, 已經簽訂知情協議, 本研究的開展經過醫學倫理相關組織批準。將患者隨機分為對照組與研究組, 每組1600 例。1. 2 納入及排除標準 納入標準：自愿接受宮頸癌篩查者；性生活史為3 年或以上者；TCT 為意義不明的非典型鱗狀上皮細胞者；檢查前24 h 沒有性生活者；未接受過宮頸治療者。

排除標準：已確診為宮頸上皮內瘤變者；已確診為宮頸癌者；既往TCT 異常者；妊娠期患者；檢查3 d內具有陰道用藥史者；急性生殖道炎癥者；存在盆腔放療史者；具有宮頸手術史者。

1. 3 方法 對照組行HPV DNA 檢測, 研究組行HPV E6/E7 mRNA 檢測。對照組HPV DNA 陽性患者與研究組HPV E6/E7 mRNA 陽性患者均進行陰道鏡檢查、病理組織學檢查。在對照組及研究組陽性患者中分別抽取185 例患者, 并分別行HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA 檢測, 即共370 例患者同時行HPV DNA 與HPV E6/E7 mRNA 檢測。

HPV DNA 分型檢測：通過凱普醫用核酸分子快速雜交因子分型試劑盒實施病毒分型檢測, 并檢測21 型別病毒亞型, 含有高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)以及低危型HPV。本研究中HPV 陽性即高危型HPV 陽性。提取宮頸分泌物細胞DNA, 實施聚合酶鏈反應基因信號擴增, 以基因芯片為基礎, 實施導流充分雜交, 再進行顯色。

HPV E6/E7 mRNA 檢測：通過美國Hologic 公司出品的Aptima HPV E6/E7 mRNA 檢測試劑盒檢測, 以Quantivirus 支鏈DNA 雜交捕獲原理, 對14 種高危型HPV E6/E7 mRNA 進行定量檢測, 檢測探針針對14 種高危病毒, 其中任一種存在即顯示陽性。操作步驟嚴格遵循試劑盒說明, 結果涵蓋HPV16、HPV18、其他高危型, 由計算機軟件按照E6/E7 mRNA 拷貝數、產品臨床實驗閾值等判讀。若檢測值≥1.0 即陽性, ＜1.0 即陰性。

TCT 檢測：患者體位為膀胱截石位, 使用窺陰器徹底展現宮頸, 使用無菌棉簽擦拭宮頸表面分泌物, 使用宮頸刷順相同方向刷取脫落細胞, 放置毛刷于取樣瓶中進行檢測。通過南京鍵邦錦源公司出品的TCT 制片系統, 依據國際癌癥協會推薦的伯塞斯達系統分類標準分成6 種類型, 分別為未見上皮內病變和惡性細胞、不確定意義的非典型鱗狀細胞、低級別鱗狀上皮內瘤變、高級別鱗狀上皮內瘤變、宮頸癌。

陰道鏡及病理組織學檢查：病理標本均由兩位正高級病理醫師閱片、診斷, 包括宮頸炎、宮頸上皮內瘤變(CINⅠ)、CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌, 若CINⅡ級或以上則定性為高級別宮頸上皮內病變。若檢測結果顯示異常, 如不確定意義的非典型鱗狀細胞、更高級別細胞學異常結果, 或者出現HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測陽性者, 則實施陰道鏡檢查和宮頸活檢病理學檢查, 病理組織學診斷結果包括以下5 種：慢性宮頸炎、宮頸浸潤癌、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級。通過電子陰道鏡系統對宮頸表面色澤、形態、血管和邊界情況進行觀察。涂抹4%醋酸溶液于整個宮頸, 仔細觀察后使用碘液涂抹。對可疑病變處進行多點活檢, 如白色病變、碘不著色等, 對3 型轉化區進行宮頸管搔刮術。

1. 3 觀察指標 比較兩組患者的檢測結果及病理檢查結果；比較兩種檢測方法的檢測結果、病理檢查結果及診斷高級別宮頸病變的準確率、特異度、靈敏度。準確率=(真陰性+真陽性)/(真陰性+真陽性+假陰性+假陽性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%。

1. 4 統計學方法 采用SPSS22.0 統計學軟件進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 兩組患者的檢測結果及病理檢查結果比較 對照組患者HPV DNA 檢測結果陽性415 例, 陽性檢出率為25.94%；研究組患者HPV E6/E7 mRNA 檢測結果陽性400 例, 陽性檢出率為25.00%。兩組的陽性檢出率比較, 不具有統計學意義(χ2=0.370, P=0.5423＞0.05)。研究組高級別宮頸上皮內病變患者72 例, 陽性率為4.50%(72/1600)；對照組高級別宮頸上皮的病變者76 例, 陽性率為4.75%(76/1600)。兩組高級別宮頸上皮的病變陽性率比較, 不具有統計學意義(χ2=0.013,P=0.908＞0.05)。見表1。

表1 兩組患者的檢測結果及病理檢查結果比較［n(%)］

2. 2 HPV DNA 檢測、HPV E6/E7 mRNA 檢測的高級別宮頸病變檢查結果及病理檢查結果分析 370 例患者同時進行HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測及陰道鏡及病理組織學檢查。陰道鏡、病理組織學檢查結果顯示陽性88 例, 陰性282 例。HPV DNA 檢測結果顯示, 陽性188 例, 陰性182 例；HPV E6/E7 mRNA 檢測結果顯示, 陽性168 例, 陰性202 例。見表2。

表2 HPV DNA 檢測、HPV E6/E7 mRNA 檢測高級別宮頸病變檢查結果及病理檢查結果分析(n)

2. 3 HPV DNA 檢測、HPV E6/E7 mRNA 檢測診斷高級別宮頸病變的準確率、特異度、靈敏度比較 HPV DNA 檢測的特異度、靈敏度、準確率分別為56.38%、73.86%、60.54%, HPV E6/E7 mRNA 檢測的特異度、靈敏度、準確率分別為67.73%、87.50%、72.43%。HPV E6/E7 mRNA 檢測的特異度、靈敏度、準確率均高于HPV DNA 檢測, 存在明顯差異(P＜0.05)。見表3。

表3 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 檢測診斷高級別宮頸病變的準確率、特異度、靈敏度比較(%)

3 討論

宮頸癌是病因明確且能夠預防的惡性腫瘤, 早期發現癌前病變、宮頸癌的患者通過及時有效的治療,能夠降低發病率和死亡率, 我國兩癌篩查的終極目標為消滅宮頸癌, 主要篩查方式為TCT 檢查, 但因為閱片者的主觀因素會影響診斷結果, 加之該項檢測的重復性較差, 所以檢測結果準確率并不高, 檢出率波動幅度也較大, 檢測結果并不理想［4］。宮頸癌的發生、進展通常與高危型HPV 感染相關, 因此HPV DNA 檢測篩查成為宮頸癌的主要輔助篩查方式, 也是意義不明的非典型鱗狀上皮細胞患者的主要分流管理方式, 但大部分HPV 感染屬于一過性, 在2 年內可清除, 不會致病, 所以該項檢查下假陽性率較高, 檢測效果也不盡如人意［5］。因此, 尋求一種高危型HPV 持續感染患者的有效檢查方式, 提升宮頸癌篩查準確率, 是醫學領域研究的熱點［6］。

相關研究顯示, HPV 病毒種引起宮頸癌的致病基因主要為E6/E7 基因, 其中E6 基因會阻斷細胞凋亡過程, 對細胞抗癌效果產生影響；E7 基因會影響細胞周期, 促使炎性細胞增殖惡變進而形成癌癥, 而HPV E6/E7 mRNA 水平可以預測HPV 病毒活性和癌變風險, 從而區分一過性感染以及宮頸病變, 進而對意義不明的非典型鱗狀上皮細胞患者進行分流［7］。HPV E6/E7 mRNA 是一種HPV 病毒致癌活動提示指標, 也是宮頸上皮細胞癌變進展預測指標, 該項指標的表達說明HPV 整合入宿主細胞DNA 種, 癌基因轉錄異常造成E6/E7 癌蛋白表達過度, 導致細胞惡性轉化, 說明HPV 癌基因E6/E7 處在表達活動期, 會促使癌變進展［8］。HPV E6/E7 mRNA 表達伴隨宮頸病變級別的上升而上升, 隨著其陽性率的提升, 高級別病變的陽性檢出率也會提升, 其高表達表示HPV 處在持續感染狀態, 因為該項檢測更關注病變情況, 能夠更好地反映宮頸病變嚴重程度, 所以屬于高級別病變的特異性標志物［9-11］。

劉曉旭等［12］研究中顯示, 宮頸病變診治中應用HPV E6/E7 mRNA 檢測的靈敏度為87.50%, 高于HPVDNA 檢測；本文研究中, HPV E6/E7 mRNA 檢測的靈敏度高于HPV-DNA 檢測, 和劉曉旭等研究結果一致,表明HPV E6/E7 mRNA 檢測靈敏度更高, 且本文研究中HPV E6/E7 mRNA 檢測的準確率也更高, 說明該項檢測方式可以作為宮頸高級病變患者分流管理方式,能夠更精確地預測細胞向高度病變、癌癥病變轉變的風險。

綜上所述, 將HPV E6/E7 mRNA 檢測作為宮頸高級病變篩查指標, 能夠對宮頸癌、高級別上皮內瘤變進行有效檢測, 對于宮頸高級病變診斷具有積極的指導價值。