830例育齡婦女MTHFR基因A1298C位點(diǎn)多態(tài)性研究

齊國昌,王春瑋

青海紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科,青海西寧 810000

5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)主要作用是在葉酸代謝通路中將5,10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為具有生物學(xué)功能的5-甲基四氫葉酸,5-甲基四氫葉酸可以進(jìn)一步進(jìn)入甲基傳遞通路,通過同型半胱氨酸的重新甲基化過程間接為DNA甲基化和蛋白質(zhì)甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一個較低的水平[1]。MTHFR基因的缺陷將導(dǎo)致機(jī)體多個基礎(chǔ)生化過程的紊亂,包括細(xì)胞周期調(diào)控、DNA復(fù)制、DNA以及蛋白質(zhì)甲基化修飾等,進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)管缺陷、癌癥、心腦血管疾病等多種病癥[2]。在孕婦人群中MTHFR基因的缺陷會引起神經(jīng)管缺陷、先天性心臟病、唇腭裂、妊娠期高血壓疾病,自發(fā)性流產(chǎn)[3]。CAO等[4]研究提出,葉酸攝入應(yīng)該控制在一個特定的范圍之內(nèi),攝入不足或者過量,對后代健康均會產(chǎn)生不利影響。因此,本研究通過分析830例育齡婦女MTHFR基因A1298C位點(diǎn)多態(tài)性分布情況,旨在了解育齡婦女人群中MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因多態(tài)性特征,以實(shí)現(xiàn)育齡婦女可根據(jù)自己的遺傳體質(zhì)科學(xué)、合理地補(bǔ)充葉酸量,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年 1月至 2023 年4月在本院門診進(jìn)行孕前或孕期行優(yōu)生健康檢查的漢族及其他民族的育齡女性830例作為研究對象。830例中漢族590例,年齡19～46歲、平均(30.08±4.52)歲;藏族104例,年齡20～44歲、平均(30.76±5.18)歲;回族89例,年齡17～44歲、平均(27.5±5.77)歲;土族25例,年齡27～43歲、平均(30.8±3.64)歲;蒙古族22例,年齡20～40歲、平均(29.09±5.28)歲。本研究符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)要求并得到本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(LW-2024-01)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本準(zhǔn)備和核酸提取 采集所有受試者外周靜脈血2 mL于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中送檢(若不能馬上檢測則置于4 ℃保存,并在1周內(nèi)完成檢測)。吸取200 μL進(jìn)行全血DNA提取純化,核酸濃度不少于20 ng/μL,純度A260/A280為1.7～2.0。核酸提取與純化試劑均購于西安天隆科技有限公司。

1.2.2多態(tài)性位點(diǎn)基因的檢測 取待測標(biāo)本核酸和質(zhì)控品各4 μL加入MTHFR基因A1298C位點(diǎn)擴(kuò)增體系中,設(shè)置反應(yīng)條件：50 ℃ 2 min,1個循環(huán);95 ℃ 10 min,1個循環(huán);95 ℃變性15 s,60 ℃退火與延伸40 s,并在 60 ℃退火與延伸步驟收集熒光,循環(huán)數(shù)為40次。擴(kuò)增結(jié)束后依據(jù)試劑說明書進(jìn)行結(jié)果判讀,根據(jù)報告熒光的不同分辨出標(biāo)本中MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因型。嚴(yán)格按照試劑說明書操作。MTHFR A1298C檢測試劑購置于江西諾德醫(yī)療器械有限公司。

2 結(jié) 果

2.1Hardy-Weinberg平衡分析 將納入研究人群的MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因多態(tài)性分布進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn),符合遺傳平衡(P>0.05),見表1,表明標(biāo)本具有本區(qū)域群體代表性。

2.2葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性分析 830例育齡女性MTHFR基因A1298C位點(diǎn)基因型AA、AC及CC基因型頻率分別為69.64%(578/830)、27.35%(227/830)和3.01%(25/830);A等位基因頻率為83.32%,C等位基因頻率為16.68%。

2.3各年齡段間育齡女性MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)基因多態(tài)性比較 各年齡段育齡女性MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因型和等位基因頻數(shù)和頻率分布情況比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.82,P=0.34;χ2=1.91,P=0.59),見表2。

表2 各年齡段間育齡女性MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)基因多態(tài)性比較[n(%)]

2.4不同民族育齡婦女間MTHFR基因A1298C位點(diǎn)基因型多態(tài)性數(shù)據(jù)比較 漢族、藏族、回族、土族和蒙古族育齡女性MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因型均以AA為主,占比分別為70.85%、62.5%、60.67%、80.00%和90.91。漢族與本地其他少數(shù)民族間的MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)多態(tài)性分布比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同民族育齡婦女間MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)基因多態(tài)性比較[n(%)]

3 討 論

MTHFR是葉酸代謝過程的關(guān)鍵酶,A1298C 作為其最具有臨床意義的位點(diǎn)之一,它的突變會導(dǎo)致MTHFR還原酶活性下降,進(jìn)而會導(dǎo)致血清葉酸水平進(jìn)一步降低。目前,臨床上針對育齡婦女葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與出生缺陷不良妊娠關(guān)系的相關(guān)研究報道較多[5-6]。梅瑾等[7]研究發(fā)現(xiàn)有不良孕產(chǎn)史女性 MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)的CC突變純合型頻率均顯著高于無不良妊娠史的婦女;同時,有研究報道MTHFR 基因A1298C位點(diǎn)的多態(tài)性基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)結(jié)局存在一定的關(guān)系[8]。因此,開展育齡婦女葉酸還原酶MTHFR基因A1298C位點(diǎn)多態(tài)性研究,對于根據(jù)不同基因型做個性化的葉酸補(bǔ)充方案、預(yù)防出生缺陷具有重要作用。

本研究顯示：育齡婦女MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)突變率較低,AA基因型頻率為69.64%,其純合突變基因型頻率僅為3.01%;各年齡段育齡女性MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因型分布比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),這說明MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)多態(tài)性分布特征與年齡段無關(guān),這一結(jié)果與吳秋紅等[9]的研究結(jié)果一致。在對漢族與其他民族育齡女性MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的基因型和等位基因頻數(shù)和頻率分布情況進(jìn)行比較時,發(fā)現(xiàn)漢族與本地其他少數(shù)民族間的MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)多態(tài)性分布情況無明顯差異,這一結(jié)果與楊玉清等[10]開展的銀川市回族和漢族女性MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)研究結(jié)果,以及初秀敏等[11]進(jìn)行的興安盟漢族和蒙古族女性MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)研究結(jié)果一致。這說明漢族育齡女性與回族和蒙古族育齡女性之間的MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)無多態(tài)性分布特征。李君等[12]研究顯示,西藏地區(qū)藏族與漢族女性MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)多態(tài)性分布特征差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這一結(jié)果可能與同一民族不同地理分布和族裔來源存在一定關(guān)系。將本研究育齡婦女MTHFR 基因A1298C 位點(diǎn)基因型和等位基因頻數(shù)和頻率分布情況與其他地區(qū)女性比較,發(fā)現(xiàn)本研究與甘肅[13]、天津[14]、鄭州[15]和昆明[16]之間MTHFR基因 A1298C 位點(diǎn)的多態(tài)性分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與臺州[17]、淄博[18]、武漢[19]、廣州[20]和臨沂[21]地區(qū)比較發(fā)現(xiàn)MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)的多態(tài)性分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說明育齡婦女MTHFR基因A1298C位點(diǎn)基因型和等位基因頻數(shù)和頻率分布在部分地區(qū)間存在不同的多態(tài)性分布特征。

綜上所述,葉酸還原酶MTHFR基因A1298C位點(diǎn)的分布在不同年齡段育齡女性之間以及漢族與其他民族如回族、蒙古族和土族育齡女性之間沒有明顯差異,但是在部分地區(qū)間存在不同的多態(tài)性分布特征。出現(xiàn)這一結(jié)果可能與當(dāng)?shù)厮幍牡乩憝h(huán)境、人群族裔來源、氣候和飲食等相關(guān),在不同地區(qū)如果均采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的葉酸補(bǔ)充量預(yù)防出生缺陷會存在一定局限性。故明確育齡婦女MTHFR基因 A1298C位點(diǎn)基因多態(tài)性分布特點(diǎn),根據(jù)基因型判斷葉酸代謝能力的強(qiáng)弱,針對性調(diào)整葉酸劑量進(jìn)行個性化補(bǔ)充特別必要。