磁微粒化學(xué)發(fā)光法在肺炎感染患者血清免疫標(biāo)志物檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值

楊小瑩,白 薇,黃 婷,楊云俠

西安大興醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,陜西西安 710000

肺炎支原體(MP)是介于病毒及細(xì)菌之間的微生物,是兒童肺炎的主要病原體類(lèi)型之一[1-2]。MP肺炎(MPP)通常是輕微的,甚至表現(xiàn)為自限性疾病[3]。然而,近年來(lái)嚴(yán)重MPP(SMPP)和難治性MPP(RMPP)比例逐漸增加,部分患者甚至迅速發(fā)展為呼吸衰竭或危及生命的肺外并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者生命健康[4],因此早診斷并給予早期治療有助于提高治療效果、改善患者預(yù)后。隨著近年免疫學(xué)說(shuō)的興起,有研究認(rèn)為MP感染后MPP的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程與機(jī)體免疫球蛋白(Ig)水平存在密切聯(lián)系[5],因此檢測(cè)免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)水平變化有助于診斷MPP。目前臨床MP感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為MP快速培養(yǎng),但此檢測(cè)方式耗時(shí)過(guò)長(zhǎng),且價(jià)格昂貴,無(wú)法作為正常篩查手段[6]。磁微粒化學(xué)發(fā)光法(CLIA)是將磁性分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、免疫分析技術(shù)3種技術(shù)相結(jié)合的新興檢測(cè)技術(shù),檢測(cè)時(shí)間快、靈敏度高,有助于提高M(jìn)PP早期診斷率[7]。本研究分析了CLIA在MPP感染患者血清免疫標(biāo)志物檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性選取2020年12月至2022年10月在本院就診的疑似MPP患者212例作為研究對(duì)象,納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)持續(xù)性咳嗽、發(fā)熱或無(wú)發(fā)熱3～5 d;(2)年齡≤12歲;(3)就診前1個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用激素類(lèi)或免疫抑制劑等藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并免疫系統(tǒng)疾病或免疫缺陷疾病。根據(jù)MP快速培養(yǎng)結(jié)果將研究對(duì)象分為MP感染組(112例)和對(duì)照組(100例),對(duì)照組中男56例、女44例,平均年齡為(4.16±1.05)歲;觀察中男71例、女41例,平均年齡為(4.25±1.26)歲。各組年齡、性別比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意(審批號(hào)：2020-06-0328-02)。

1.2方法 采集兩組清晨空腹靜脈血5 mL,4 000 r/min離心10 min,取上清液,于—40 ℃環(huán)境中低溫保存,避免反復(fù)凍融。分別采用CLIA和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)IgM、IgG、IgA水平。

1.2.1CLIA 采用肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒(購(gòu)于北京貝爾生物工程股份有限公司)、肺炎支原體IgG抗體檢測(cè)試劑盒(購(gòu)于鄭州安圖生物工程股份有限公司)、IgA抗體檢測(cè)試劑盒(購(gòu)于蘇州惠中生物科技有限公司)分別檢測(cè)血清IgM、IgG、IgA水平,試劑盒均使用磁性納米微粒,采用間接法檢測(cè)血清中IgM、IgG、IgA抗體水平,由全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀顯示結(jié)果。

1.2.2ELISA 分別采用肺炎支原體IgM和IgG試劑盒(購(gòu)于北京榮志海達(dá)生物科技有限公司)、人肺炎支原體IgA抗體(CPn-IgA)試劑盒(購(gòu)于天津科維諾生物科技有限公司)檢測(cè)血清IgM、IgG、IgA水平,試劑盒使用純化的肺炎支原體國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株(Mp-FH)富含黏附蛋白(P1)的抗原微孔板,采用間接法檢測(cè)血清中IgM、IgG、IgA抗體水平,由酶標(biāo)分析儀顯示結(jié)果。

1.2.3判定結(jié)果 IgM正常范圍為0.70～1.70 mg/mL、IgA正常范圍為0.76～3.90 g/L 、IgG正常范圍為6.00～16.00 g/L,超過(guò)或低于正常范圍均為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清免疫標(biāo)志物水平比較 MP感染組血清IgM水平明顯高于對(duì)照組,IgA、IgG水平明顯低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清免疫標(biāo)志物水平比較

2.2血清IgM、IgA、IgG對(duì)MPP的診斷價(jià)值分析 ROC曲線結(jié)果顯示,血清IgM、IgA、IgG診斷MPP的曲線下面積(AUC)分別為0.792、0.708、0.733,IgM+IgA+IgG聯(lián)合診斷MPP的AUC為0.851,明顯高于各指標(biāo)單獨(dú)診斷的AUC(P<0.05)。見(jiàn)表2、圖1。

圖1 血清IgM、IgA、IgG診斷MPP的ROC曲線

表2 血清IgM、IgA、IgG對(duì)MPP的診斷價(jià)值分析

2.3CLIA與ELISA檢測(cè)血清免疫標(biāo)志物陽(yáng)性率比較 采用CLIA檢測(cè)血清IgM、IgA、IgG的陽(yáng)性率分別為72.32%、34.82%、31.25%,采用ELISA檢測(cè)血清IgM、IgA、IgG的陽(yáng)性率分別為58.93%、20.54%、18.75%,CLIA檢測(cè)血清IgM、IgA、IgG的陽(yáng)性率均明顯高于ELISA檢測(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 CLIA與ELISA檢測(cè)血清免疫標(biāo)志物陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.4CLIA與ELISA檢測(cè)MP的陽(yáng)性率比較 金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的112例MP陽(yáng)性患者中,CLIA、ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為91.07%(102/112)、84.82%(95/112);100例MPP陰性患者中,CLIA、ELISA檢測(cè)陰性率分別為84.00%(84/100)、74.00%(74/100)。但兩種檢測(cè)方式的陽(yáng)性檢測(cè)率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4、5。

表4 CLIA檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

表5 ELISA檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

2.5CLIA與ELISA對(duì)MPP的診斷價(jià)值分析 CLIA檢測(cè)診斷MPP的準(zhǔn)確率、靈敏度及特異度分別為87.74%、91.07%、84.00%;ELISA檢測(cè)診斷MPP的準(zhǔn)確率、靈敏度及特異度分別為79.72%、84.82%、74.00%,CLIA檢測(cè)的準(zhǔn)確率、靈敏度及特異度均高于ELISA檢測(cè),且兩種檢測(cè)方式的準(zhǔn)確率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表6 CLIA與ELISA對(duì)MPP的診斷價(jià)值分析

3 討 論

肺炎是目前臨床常見(jiàn)的疾病,是3歲以下嬰幼兒死亡的常見(jiàn)原因,MPP是肺炎的常見(jiàn)類(lèi)型,占兒童肺炎的10%～40%,MPP最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)為干咳和發(fā)燒,通常伴有頭痛、肌痛、喉嚨痛及實(shí)驗(yàn)室檢查(主要是炎癥標(biāo)志物升高)和放射學(xué)檢查的異常(表現(xiàn)斑片狀氣腔實(shí)變、肺紋理增粗、呈毛玻璃影)等,癥狀一般較輕[8],但近年統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),SMPP及RMPP占比逐漸增加,不僅加重患者病癥,誘導(dǎo)肺外并發(fā)癥的發(fā)生,嚴(yán)重者還需入住重癥監(jiān)護(hù)室進(jìn)行生命支持等治療,對(duì)患者生活質(zhì)量及生長(zhǎng)發(fā)育造成嚴(yán)重影響[9],因此早期診斷并快速給予對(duì)癥治療有助于改善患者預(yù)后情況。免疫學(xué)相關(guān)研究認(rèn)為,MP入侵機(jī)體時(shí),機(jī)體在感染刺激下分泌出IgM、IgG 2種特異性抗原[10-11],而IgA作為機(jī)體局部組織對(duì)抗感染的主要抗體也出現(xiàn)異常表達(dá)[12-13]。IgM是MP感染后機(jī)體最早分泌的一種抗原,一般在1周左右對(duì)呈異常表達(dá),3～4周時(shí)IgM水平到達(dá)高峰[14],因此當(dāng)患者因病癥就診時(shí)IgM已達(dá)到較高水平,臨床多選擇IgM陽(yáng)性為MP感染的主要診斷指標(biāo)。本研究中,MP感染組血清IgM水平明顯高于對(duì)照組,IgA、IgG水平明顯低于對(duì)照組,說(shuō)明MP感染與機(jī)體Ig水平變化密切相關(guān),IgM、IgA、IgG可能參與MPP的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程,與王建斌等[15]的研究結(jié)果相近,該研究認(rèn)為,小兒肺炎應(yīng)用呼吸道病原體抗體檢測(cè)的診斷價(jià)值較高,可為臨床疾病診治提供依據(jù)。同時(shí)本研究建立的ROC曲線分析結(jié)果顯示,IgM、IgA、IgG診斷MPP的AUC分別為0.792、0.708、0.733,IgM+IgA+IgG聯(lián)合診斷MPP的AUC為0.851,說(shuō)明IgM、IgA、IgG在診斷MPP方面具有一定價(jià)值,且三者聯(lián)合診斷價(jià)值較高,可作為臨床篩查MPP的首要方式。

目前臨床診斷MP感染的主要方式包括血清學(xué)鑒定、MP快速培養(yǎng)法及PCR法;PCR法具有快速、靈敏度高、特異度高等特點(diǎn),但因操作方法煩瑣及患兒配合度較低等原因,PCR可能造成假陰性,且PCR過(guò)程中易出現(xiàn)基因擴(kuò)增產(chǎn)物污染等情況,假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)較高。血清學(xué)鑒定為臨床篩查診斷的主要方式,但多需手工操作,操作步驟煩瑣[16-17]。血清學(xué)中ELISA較為常見(jiàn),ELISA多用于定性檢測(cè)及要求不高的半定量檢測(cè),但ELISA無(wú)法區(qū)分各種核型,易受低親和力抗體的影響,靈敏度較低,易出現(xiàn)誤診和漏診,且ELISA無(wú)法實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)檢測(cè),需人力配合檢測(cè)且檢測(cè)步驟較為煩瑣,檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng),檢測(cè)效率偏低,因此在臨床早期診斷中作用受限。CLIA是近年新興技術(shù),基于磁性分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、免疫分析技術(shù)3種技術(shù)原理而成,具有磁性分離技術(shù)的快速易自動(dòng)化性、化學(xué)發(fā)光技術(shù)的高靈敏度、免疫分析的高特異度等優(yōu)點(diǎn),具有全自動(dòng)、全定量、隨機(jī)上樣等特點(diǎn),操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速,是自身抗體檢測(cè)新技術(shù)[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn),CLIA檢測(cè)血清IgM、IgA、IgG陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于ELISA檢測(cè),說(shuō)明CLIA以發(fā)光強(qiáng)度為檢測(cè)原理,陽(yáng)性檢測(cè)率較高,不易受突變抗體的干擾,有效克服ELISA檢測(cè)的不足,可提高臨床檢測(cè)的準(zhǔn)確性,究其原因可能為CLIA采用順磁性微粒固相載體,具有反應(yīng)面積大、可循環(huán)利用標(biāo)志物等特點(diǎn),可實(shí)現(xiàn)自身抗體的高效率、全自動(dòng)化、多元化定量檢測(cè),極大減少漏診和誤診,對(duì)MPP的診斷及病情監(jiān)測(cè)方面具有重要意義。另外,本研究采用四格表法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CLIA準(zhǔn)確率、靈敏度及特異度均高于ELISA檢測(cè),也進(jìn)一步說(shuō)明CLIA穩(wěn)定性高,可作為臨床篩查MPP的首要手段,幫助早期診斷MPP并及時(shí)進(jìn)行治療,提高治療效果,同時(shí)CLIA易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,檢測(cè)試劑均為原裝,并配有自動(dòng)采樣,可以有效避免人為因素造成的誤差,提高診斷的準(zhǔn)確性,具有良好的重復(fù)性,且節(jié)省人力物力,可減少醫(yī)療資源的浪費(fèi),具有較大的潛在價(jià)值。

綜上所述,MPP感染患者血清IgM、IgA、IgG明顯異常表達(dá),三者在診斷MPP方面具有一定價(jià)值,CLIA檢測(cè)IgM、IgA、IgG的陽(yáng)性率較高,可提高診斷MPP的準(zhǔn)確性,故CLIA可作為臨床篩查MP感染的檢查方式進(jìn)行推廣應(yīng)用。