卡洛芬注射液輔助治療牛呼吸道疾病的臨床療效試驗

瞿紅穎,耿智霞,賈 興,張 沛,任麗花,李卓偉*,劉 欣,楊國輝,吳聰明

(1．河北遠征藥業有限公司,石家莊 050041;2.河北省獸藥技術創新中心,石家莊 050041;3.石家莊市獸藥技術創新中心,石家莊050041;4．中國農業大學,北京 100000)

牛呼吸道疾病(BRD)是造成全世界養牛業經濟損失的主要原因之一。引起BRD的病原菌主要有溶血曼氏桿菌、多殺巴氏桿菌和睡眠嗜組織菌等,臨床上常使用抗菌藥物治療,包括β-內酰胺類、大環內酯類等。另外,由于BRD病牛常存在發熱、疼痛、肺組織炎癥反應,臨床上還常使用抗炎藥進行輔助治療,可更加快速地控制病牛癥狀,消除炎癥反應,提高治愈率[1-2]。

卡洛芬(carprofen)是2-芳基丙酸類非甾體抗炎藥,是花生四烯酸級聯酶環氧合酶COX-2的抑制劑,通過抑制前列腺素合成而發揮抗炎、鎮痛、解熱作用[3-4],其作用強于阿司匹林、保泰松、對乙酰氨基酚等,且具有吸收快、副作用小等特點,是高效的動物用抗炎藥。目前卡洛芬注射液已在美國、加拿大和歐洲多個國家廣泛用于輔助治療牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,長期的臨床應用表明在使用抗菌藥的同時聯合使用卡洛芬注射液,可以快速緩解病牛發熱并顯著降低肺組織炎癥反應,效果顯著。在我國,BRD也是一種常發病,鑒于卡洛芬的高效抗炎活性,本試驗進行了卡洛芬注射液輔助治療牛呼吸道疾病的臨床療效研究,為該藥物制劑的獸醫臨床合理應用提供科學依據。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗藥物 受試藥物:卡洛芬注射液,河北遠征藥業有限公司,規格100 mL:5 g,批號KLF020902;對照藥物:卡洛芬注射液,碩騰公司,規格100 mL:5 g,批號M4613-09。

泰拉霉素注射液,法瑞瓦公司,規格50 mL:5 g,批號B575806。

1.2 試驗動物及試驗地點 BRD病牛,1～3月齡,共80頭,從正在發生BRD的山東省青島東盛泰奶牛良種繁育基地按試驗要求標準篩選。試驗期間(D0～D14)所有試驗牛未發生伴隨治療用藥情況。

1.3 試驗設計 本試驗依據《抗菌藥物II、III期臨床藥效評價試驗指導原則》[5]設計。將遴選出來的80頭滿足試驗要求的BRD病牛按計算機生成的隨機數字表分配到A、B、C、D、E組,每組16頭,按表1給藥。

表1 試驗牛給藥方案Tab 1 Administration protocol for experimental cows

1.4 臨床檢查

1.4.1 臨床癥狀檢查 試驗期間,對試驗牛進行臨床檢查,分別在D0、D1～D7日上下午、D14日測量體溫,按BRD五項癥狀評分法系統[6]對試驗牛的發熱、咳嗽、鼻孔分泌物、眼分泌物、耳朵狀況分別進行評分。各項評分標準如表2所示。

表2 BRD癥狀評分標準Tab 2 Symptoms scoring criteria of BRD

1.4.2 降鈣素原(PCT)濃度檢查 降鈣素原(PCT)是診斷和監測細菌性疾病感染的一個重要參數。在BRD病牛血清中PCT的濃度會急劇升高,而在抗生素治愈牛的血清中則會下降至正常水平,與BRD疾病進程具有良好的符合性,是一個較好的診斷BRD的生物標志物[7]。采集各組試驗牛在D0、D3、D7日的頸靜脈血液樣品,并使用商品化試劑盒測定血清PCT濃度,分析病牛的恢復程度。

1.5 有效性評估主要指標 A．體溫恢復正常牛占比:記錄各組在D1～D7各日上下午的體溫恢復正常牛數,當試驗牛的體溫<39.5 ℃時視為體溫正常,按下述公式計算各時間點每組的體溫恢復正常牛占比并進行比較。體溫恢復正常牛占比(%)=[D1～D7各日上下午體溫恢復正常牛數/該觀測時間點組內試驗牛數]×100

B．體溫恢復正常時間:記錄D1～D7期間各組每頭試驗牛的體溫恢復正常時間,即從給藥開始至體溫<39.5 ℃的時間間隔,統計各組試驗牛體溫恢復正常時間的均值與標準差(M±SD)以及50%和90%試驗牛體溫恢復正常所需時間并進行比較。

C．BRD癥狀解除牛占比:記錄各組在D1～D7各日上下午的BRD癥狀解除(五項評分均為0)牛數,按下述公式計算各時間點每組的BRD癥狀解除牛占比并進行比較。BRD癥狀解除牛占比(%)=[D1～D7各日上下午BRD癥狀解除牛數/該觀測時間點組內試驗牛數]×100

D．BRD癥狀解除時間:記錄D1～D7期間各組每頭試驗牛的BRD癥狀解除時間,即從給藥開始至BRD五項癥狀評分均為0的時間間隔,統計各組試驗牛BRD癥狀解除時間的均值與標準差(M±SD)以及50%和90%試驗牛BRD癥狀解除時間并進行比較。

E．血清PCT濃度:記錄各組試驗牛在D0、D3、D7各日采集血清測得的PCT濃度,進行比較。

F．D7日治療成功率:在D7日,如果某試驗牛滿足體溫<39.5 ℃,且BRD五項癥狀評分和<4,則視為治療成功;其他任何情況,均視為治療失敗。計算各組試驗牛的D7治療成功率進行比較:D7日治療成功率(%)=(D7日治療成功試驗牛數/接受治療試驗牛數)×100

1.6 數據處理 數據統計分析使用SPSS軟件,試驗牛的體溫、體溫恢復正常時間、BRD五項癥狀評分、BRD癥狀解除時間、PCT濃度,分別以平均值±標準差(M±SD)表示,采用T檢驗進行統計分析;各組試驗牛的體溫恢復正常牛占比、BRD癥狀解除牛占比、治療成功率等,分別以百分率(%)表示,采用卡方(χ2)檢驗進行統計分析。比較組內不同時間點和/或組間相同時間點上述指標的差異顯著性,所有假設檢驗均在0.05顯著性水平進行。

2 結果與分析

2.1 臨床檢查結果

2.1.1 體溫檢查結果 試驗牛的體溫統計表如表3所示,給藥前(D0日),所有試驗牛的體溫均≥39.5 ℃,各組之間無顯著差異(P>0.05)。給藥后,多數試驗牛的體溫迅速下降至正常范圍,僅少數試驗牛(尤其是E組)的體溫在短時內(D0～D1日)下降不明顯,給藥后D1日上午,5個組中只有E組試驗牛的平均體溫仍高于正常體溫,其中B、C組試驗牛的體溫顯著低于E組(P<0.05),A、D組試驗牛的體溫與E組無顯著差異(P>0.05);D1日下午,5個組試驗牛的體溫均值都顯著低于D0(P<0.05),回落到正常范圍內。

表3 試驗牛體溫統計Tab 3 Body temperature statistics of test cows

體溫恢復正常牛占比結果如表4所示,在D0日(給藥前),各組試驗牛的體溫均異常,體溫恢復正常牛占比均為0。在D1日上午,5組均有部分牛體溫恢復正常,其中A、B、C、D組體溫恢復正常牛占比顯著高于E組(P<0.05),B、C組顯著高于A、D組(P<0.05)。給藥后隨著時間延長,在D2日下午和D3日上午,各組絕大多數牛體溫恢復正常,其中B、C、D組體溫恢復正常牛占比顯著高于A、E組(P<0.05),在D4日下午和D5日,A、B、C、D組全部未退出試驗牛的體溫恢復正常,占比顯著高于E組(P<0.05)。

表4 體溫恢復正常牛占比統計Tab 4 Statistics on the percentage of cows with normal body temperature

試驗牛體溫恢復正常時間統計如表5所示,A、B、C、D各組試驗牛的體溫恢復正常時間均顯著快于E組(P<0.05)。B、C組試驗牛的體溫恢復時間要快于A組和D組,但差異不顯著(P>0.05)。另外,A、B、C、D組50%試驗牛體溫恢復正常時間比E組快0.5日,90%試驗牛體溫恢復正常時間比E組快0.5日～2.0日。

表5 試驗牛體溫恢復正常時間統計Tab 5 Statistics on time to normalization of body temperature of test cows

2.1.2 BRD五項癥狀評分結果 如圖6所示,給藥前(D0日),所有試驗牛均表現出典型的BRD癥狀,BRD五項癥狀評分和的范圍為5～11,各組間評分均值無顯著差異(P>0.05),D1日上午(用藥后0.5日),5組試驗牛的BRD癥狀均有明顯改善,BRD五項癥狀評分和較D0日顯著下降(P<0.05),各組之間比較無顯著差異(P>0.05)。隨著給藥后時間的延長,各組癥狀評分和持續下降直至評分為0。

給藥前(D0日),所有試驗牛均表現出BRD癥狀,各組BRD癥狀解除牛占比均為0,D2日下午(用藥后2.0日),B、C組的BRD癥狀解除牛占比達100%,顯著高于A、D、E組(P<0.05),A、D、E組之間的BRD癥狀解除牛占比無顯著差異(P>0.05);直至D5日,除E組仍有個別牛表現輕微的BRD癥狀外,其他未退出試驗牛均保持健康狀態,各組之間的BRD癥狀解除牛占比無顯著差異(P>0.05),結果見表7 。

表7 BRD癥狀解除牛占比統計Tab 7 Statistics on the percentage of test cows with BRD symptoms relieved

試驗牛BRD癥狀解除時間如表8所示,B、C、D組試驗牛的BRD癥狀解除時間均顯著快于E組(P<0.05)。B、C、D組試驗牛的BRD癥狀解除時間要快于A組。此外,A、B、C、D組50%試驗牛BRD癥狀解除時間比E組快0.5日,90%試驗牛BRD癥狀解除時間比E組快0日～1.5日。

表8 試驗牛BRD癥狀解除時間統計Tab 8 Statistics on the time to relief of BRD symptoms of test cows

結果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯用治療BRD,可更加快速有效地控制病牛癥狀。與單獨使用泰拉霉素注射液相比,聯用低、中、高劑量的卡洛芬注射液或推薦劑量的碩騰公司的卡洛芬注射液,BRD病牛異常體溫的恢復更快,發熱、咳嗽、流鼻涕等癥狀的緩解及消除更迅速,疾病恢復期更短。其中,卡洛芬注射液中、高劑量的效果無明顯差異(P>0.05),與使用推薦劑量原研卡洛芬注射液的效果相當(P>0.05),均優于低劑量的仿制卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.2 血清PCT濃度 試驗牛血清PCT濃度如表9所示,用藥后D3日,5個組試驗牛的PCT值與D0日比較均顯著下降(P<0.05),組間比較,雖然A組試驗牛的PCT值高于B、C、D組,但4個組之間無顯著差異(P>0.05),E組試驗牛的PCT值則顯著高于其他4個組(P<0.05);用藥后D7日,5個組的PCT值均無顯著差異(P>0.05)。

表9 試驗牛血清PCT濃度統計Tab 9 Statistics on PCT concentration in serum of test cows

結果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯用可促進BRD病牛消除致病菌感染帶來的炎癥反應。與單獨使用泰拉霉素注射液相比,聯用低、中、高劑量的卡洛芬注射液或推薦劑量的碩騰卡洛芬注射液,可使BRD病牛異常升高的血清PCT濃度更快恢復至正常水平。其中,卡洛芬注射液中、高劑量的效果無明顯差異(P>0.05),與使用推薦劑量碩騰卡洛芬注射液的效果相當(P>0.05),均優于低劑量的卡洛芬注射液(P<0.05)。

2.3 試驗牛的治療成功率、后期復發率及死亡率 表10中數據結果顯示,A、B組試驗牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為93.75%,C、D組試驗牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為100%,E組試驗牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均為87.5%。其中,C、D組試驗牛的D7日治療成功率、D14日治療成功率均優于A、B、E組試驗牛,但組間無顯著差異(P>0.05)。

表10 試驗牛的治療成功率、后期復發率及死亡率統計Tab 10 Statistics on treatment success rate, late recurrence rate and mortality rate of test cows

結果表明,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯用治療BRD,可小幅提高BRD病牛的治療成功率。無論是泰拉霉素注射液單一治療還是與卡洛芬注射液聯用治療,治療成功牛在7日內未見病情反復。

2.4 試驗牛退出情況說明 試驗期間(D0～D14日),A組有1頭、B組有1頭、E組有2頭試驗牛退出試驗,退出原因為BRD惡化(達到治療失敗判斷標準),A、B、C、D、E組都未出現其他原因(如死亡、并發其他疾病、沒有依從試驗方案、出現嚴重不良反應等)導致退出的試驗牛。

3 討論與結論

卡洛芬為2-芳基丙酸類非甾體抗炎藥,主要通過抑制花生四烯酸環氧酶,導致前列腺素等炎癥介質的生成減少,從而發揮解熱、鎮痛、消炎作用。卡洛芬注射液于20世紀70年代由美國輝瑞公司研究開發,目前已在美國、加拿大和歐洲多個國家廣泛應用,輔助治療牛呼吸道疾病和急性乳腺炎,臨床效果顯著,是一種高效的動物用抗炎藥。

卡洛芬具有良好的抗炎效果,其抗炎作用較一些常用的抗炎藥物要強。T.V. Balmer[8]等用抗菌劑和卡洛芬聯合治療了自然爆發的犢牛的呼吸道疾病,同時用氟尼辛作對比研究。試驗結果表明,單次以1.4 mg/kg bw的平均劑量皮下注射卡洛芬,與3 d連續以2.0 mg/kg bw的平均劑量通過靜脈注射氟尼辛葡甲胺的效果相同,證明了單劑量的卡洛芬與三劑量的氟尼辛葡甲胺作為犢牛急性呼吸道疾病的輔助用藥有同樣的療效。

本試驗研究了卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯合用于治療牛的呼吸道疾病的臨床效果,與單獨用泰拉霉素治療對比,結果卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯合用藥的病牛異常體溫恢復的更快,發熱、咳嗽、流鼻涕等癥狀的緩解和消除更迅速,疾病恢復期更短,且聯合用藥可促進病牛消除致病菌感染帶來的炎癥反應,小幅提高病牛的治療成功率。

卡洛芬不僅與泰拉霉素聯合使用能起到良好的臨床療效,與其他的抗菌藥聯合使用,同樣能明顯改善臨床癥狀,降低炎癥反應。例如Elitok B[9]等在研究卡洛芬治療牛呼吸道疾病方面的臨床療效時,使用了替米考星作為基礎治療。用藥后,用卡洛芬-替米考星治療的動物的體溫和呼吸頻率都有所下降,且明顯低于單獨用替米考星治療的動物(P< 0.05),表明卡洛芬-替米考星治療病牛的臨床癥狀改善程度明顯大于單獨用替米考星,證明了卡洛芬輔助用藥的臨床效果。Lockwood P W[10]等研究了卡洛芬與頭孢噻呋一起治療自然發生的牛呼吸道疾病的臨床療效,同時用氟尼辛、酮洛芬做了對比研究。試驗將入選病牛分為四組,且都接受了頭孢噻呋(1.1 mg/kg,肌內注射)為期三天的治療,其中三組還分別接受了單劑量的氟尼辛(2.2 mg/kg,靜脈注射)、酮洛芬(3 mg/kg,靜脈注射)、卡洛芬(1.4 mg/kg,皮下注射)的輔助治療。結果表明,24 h內,用非甾體抗炎藥聯合治療的三組的熱射病的減輕程度明顯高于單獨用頭孢噻呋治療的組。證明了卡洛芬與不同抗菌藥物聯合使用,對于病癥的改善速度和程度均明顯優于單獨的抗菌藥物治療,且卡洛芬的推薦用藥劑量為1.4 mg/kg bw,與本研究的結果相同。

綜上所述,卡洛芬與抗菌藥物泰拉霉素、替米考星或頭孢噻呋聯用,均能有更好的治療BRD的臨床效果。根據本研究結果,卡洛芬注射液與泰拉霉素注射液聯用治療牛呼吸道疾病,治療安全、有效,推薦卡洛芬注射液的使用劑量為:一次量,每1 kg體重,牛1.4 mg皮下注射。