皮膚黑色素瘤差異表達基因的生物信息學分析及調控中藥預測

王梓霞，黃羽欣，謝錦楠，王沐瑤，王文輝

1.廣州中醫藥大學第二臨床醫學院，廣東 廣州 510006

2.廣州中醫藥大學第一臨床醫學院，廣東 廣州 510499

3.廣州中醫藥大學東莞醫院，廣東 東莞 523000

皮膚黑色素瘤（cutaneous melanoma）是一種高度惡性的皮膚腫瘤。2020 年，全球約共有325 000例新增黑色素瘤病例和57 000 例黑色素瘤死亡病例，占新增腫瘤發病率的1.7%和腫瘤死亡病例的0.7%[1-2]。皮膚黑色素瘤的診斷通常由皮膚科醫生在臨床檢查中發現，輔助以皮膚鏡檢查，確診比例可達到90%，但仍有10%的皮膚黑色素瘤需要進一步分子分型確診[3]。皮膚黑色素瘤的臨床治療包括手術切除、放化療、靶向治療和免疫療法等。然而，這些治療方法大多都具有不同程度的毒副作用，加之腫瘤組織的原發、繼發耐藥等，在一定程度上限制了其臨床應用[4]。因此，探索新的皮膚黑色素瘤治療手段，對提高患者的生存率，改善患者的生存質量具有重要意義[5-6]。

在中醫研究領域內，皮膚黑色素瘤常歸屬于“惡瘡”“黑痣”“黑疔”“失榮”等范疇，如《外科正宗》中記載“黑子，痣名也。此腎中濁氣混滯于陽，陽氣收束，結成黑子，堅而不散?！遍L期以來，中醫藥在與化療藥物的聯合應用防治腫瘤中表現出較大的臨床價值，其不良反應輕微且耐藥性低[7]。目前研究表明，中藥及其活性成分在促進黑色素瘤細胞凋亡、調控黑色素瘤細胞周期、抑制黑色素瘤的血管生成及對受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）傳導通路的調節均起到積極作用[8]。因此，本研究擬利用生物信息學角度分析皮膚黑色素瘤的相關生物標志物，以期為皮膚黑色素瘤的干預治療提供潛在靶點，并為中藥治療皮膚黑色素瘤提供相應理論依據。

1 資料與方法

1.1 皮膚黑色素瘤數據獲取

從GEO 數據庫下載編號分別為GSE3189、GSE114445、GSE46517 的3 個基因表達微陣列數據集。GSE3189 采用美國昂飛公司人基因組U133A Array 表達芯片GPL96 平臺，包括7 例正常組織，18 例正常痣組織和45 例惡性皮膚黑色素瘤組織樣本。GSE114445 采用美國昂飛公司人基因組U133 Plus 2.0 Array 表達芯片GPL570 平臺，包括5 例普通黑素細胞痣組織、7 例發育不良痣組織和16 例原發性皮膚黑色素瘤組織樣本。GSE46517 采用美國昂飛公司人基因組U133A Array 表達芯片GPL96 平臺，包括31 例原發性皮膚黑色素瘤組織、73 例轉移性皮膚黑色素瘤組織、9 例正常痣組織、7 例正常皮膚組織和1 例正常黑素細胞上皮組織樣本。

1.2 差異表達基因（differentially expressed genes，DEGs）的篩選

通過GEO2R 在線工具（www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r/）分別對3 個皮膚黑色素瘤相關的GEO數據集進行皮膚黑色素瘤癌癥組和正常對照組分類，下載分類數據集后刪除沒有相應基因符號的探針集。最后通過本地Excel 軟件，對皮膚黑色素瘤樣本和非癌樣本進行DEGs 的篩選。DEGs 的納入標準為Padj＜0.01，|log2FC|＞1［FC 表示差異倍數（fold change）］，使用Venny2.1 在線工具繪制最終納入DEGs 的韋恩圖。

1.3 基因本體論（gene ontology，GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路分析

將DEGs 導入DAVID 數據庫分別進行KEGG通路和GO 功能富集分析，其中P＜0.05 被認為具有統計學意義。

1.4 構建蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）網絡

將DEGs 導入String 數據庫以構建PPI 網絡，同時分析DEGs 對應蛋白之間的相互作用，設置標準為Settings＞0.7。將蛋白互作文件導入Cytoscape 3.9.0 軟件，進行PPI 網絡的優化。

1.5 關鍵基因選擇與分析

通過CytoHubba 插件篩選度（degree）值位于前15 的基因為關鍵基因。分別通過GSCA 數據庫和基因表達譜交互分析網站（Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA，Gepia 2.0），對關鍵基因進行突變分析與總體生存率分析。

1.6 核心基因（集）的選擇與分析

從關鍵基因在皮膚黑色素瘤相關的癌癥基因組圖譜數據集（Cancer Genome Atlas，TCGA）的生存分析結果中，選取對皮膚黑色素瘤患者總體生存率存在顯著影響的基因，結合GEO 數據集選取其中上調基因，篩選出多個核心基因并構建核心基因集。使用GSCA 數據庫對核心基因集進行基因集變異分析（GSVA 分析），通過GSVA 評分探究基因集在皮膚黑色素瘤中免疫浸潤的特點和泛癌分析中的表達程度。使用TIMER 2.0 數據庫分別對核心基因進行免疫浸潤分析。

1.7 中藥預測分析

應用Coremine Medical 數據庫，將關鍵基因與具有潛在治療作用的中藥進行映射，選取其中P＜0.05 的中藥予以匯總分析。

2 結果

2.1 DEGs 的獲取

從GSE3189、GSE114445、GSE46517 芯片中分別獲得2 802、521、814 個DEGs，3 個數據集的共同DEGs 共114 個，如圖1 所示，其中包括36 個上調基因和78 個下調基因。

圖1 差異表達基因Venn 圖Fig.1 Venn map of differentially expressed genes

2.2 DEGs 的GO 功能和KEGG 通路分析

運用DAVID 數據庫對DEGs 進行GO 和KEGG 富集分析，得出28 個GO 分析條目和7 個KEGG 分析條目，如圖2。GO 功能富集分析表明，在生物過程（biological process，BP）中主要富集在跨膜受體蛋白酪氨酸激酶信號通路、細胞黏附、RNA 聚合酶II 啟動子轉錄的正調控、多細胞生物發育等方面；在細胞組成（cellular component，CC）中富集在基底外側質膜、雙細胞緊密連接、細胞表面、細胞基膜、質膜、細胞外區域等部位；在分子功能（molecular function，MF）中富集在整合素結合、蛋白酪氨酸激酶活性、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等方面。KEGG 通路富集分析顯示，上調基因主要富集在病毒蛋白與細胞因子和細胞因子受體的相互作用、細胞因子-細胞因子受體相互作用、Toll 樣受體信號通路等方面，而下調基因未顯示富集途徑。

圖2 差異表達基因的GO 功能 (A) 和KEGG 通路 (B) 富集分析結果Fig.2 Enrichment analysis results of GO function (A) and KEGG pathway (B) of differentially expressed genes

2.3 PPI 網絡的構建

應用Cytoscape 3.9.0 軟件對DEGs 進行分析，構建PPI 網絡，其中淺綠色代表上調基因，淺紅色代表下調基因，見圖3。

圖3 差異表達基因的PPI 網絡Fig.3 PPI network of differentially expressed genes

2.4 關鍵基因的篩選和突變分析

將度值位于前15 的基因篩選為關鍵基因，分別為EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、TYMS、PKP1、SPP1、MMP1、KLF4、EPCAM、KIF23、DTL、CLDN1、LCP2、FGFR2。關鍵基因的基因全名和功能注釋見表1。

表1 關鍵基因名稱和功能作用 (度值前15)Table 1 Names and functional roles of key genes (top 15 degrees)

利用GSCA 數據庫對關鍵基因進行突變分析，具體突變情況如圖4、5 所示。結果顯示，FGFR2、EGFR和MMP1分別為突變率最高的前3 位基因，并均以有害突變為主，其中錯義突變為主要的突變型形式。此外，15 個關鍵基因中在皮膚黑色素瘤樣本集中，突變形式以轉換（transitions，Ti）為主，并以胞嘧啶（C）轉換為胸腺嘧啶（T）的情況最多。

圖4 排名前10 的突變基因瀑布圖Fig.4 Waterfall diagram of top 10 mutated genes

圖5 關鍵基因集的突變情況分布Fig.5 Distribution of mutations in key gene sets

2.5 皮膚黑色素瘤臨床生存分析

通過Gepia 2.0 網站，對其收錄的481 例來自TCGA 的皮膚黑色素瘤患者數據與關鍵基因進行總體生存率分析，并以Kaplan-Meier 曲線展現，如圖6 所示。結果顯示，共有4 個基因（KPNA2、GATA3、AURKA、DTL）的差異表達對患者的生存預后存在顯著影響。其中KPNA2、AURKA、DTL為皮膚黑色素瘤的風險因子（風險比＞1），其高表達的皮膚黑色素瘤患者總體生存率較低；GATA3為皮膚黑色素瘤的保護因子（風險比＜1），其低表達的皮膚黑色素瘤患者總體生存率與正常人群相比較低。以上結果均具有統計學意義（P＜0.05）。

圖6 關鍵基因的生存分析曲線Fig.6 Survival analysis curve of key genes

2.6 核心基因（集）的篩選和分析

結合關鍵基因在皮膚黑色素瘤相關的TCGA數據集的生存分析結果，選取對皮膚黑色素瘤患者總體生存率存在顯著影響的基因，并結合GEO 數據集中表達水平上調的基因，篩選出3 個核心基因KPNA2、AURKA、DTL并構建核心基因集。利用GSCA 數據庫和TIMER 2.0 數據庫，進行基因集變異分析（GSVA 分析），以探究核心基因（集）在皮膚黑色素瘤中免疫浸潤的特點和泛癌分析中的表達程度。

2.6.1 核心基因集的泛癌分析 應用GSCA 數據庫對核心基因集進行泛癌分析，并以GSVA 評分代表核心基因集的表達程度。該數據庫共有14 種可供分析的癌癥表型，包括膀胱尿路上皮癌、結腸腺癌、食管癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肝細胞癌、肺腺癌、胃腺癌、甲狀腺癌、乳腺癌浸潤癌、腎嫌色細胞癌、腎透明細胞癌、腎乳頭狀細胞癌、前列腺癌。結果顯示，與正常組織相比，核心基因集的表達均在癌癥組織顯著上調（P＜0.01），如圖7 所示。表明選取的核心基因集在人體多種癌癥的發生進展中，均表現出基因的顯著高表達，或為后續從基因層面對癌癥發生機制共性的探討提供一定的借鑒意義。

圖7 核心基因集的泛癌表達分析Fig.7 Expression analysis of core gene set in pan-cancer

2.6.2 核心基因集的免疫浸潤分析 通過GSCA 數據庫以熱圖形式呈現皮膚黑色素瘤中免疫細胞浸潤與基因集GSVA 富集評分之間的聯系，并通過Spearman 相關性分析計算核心基因集與免疫細胞浸潤二者之間的相關性，如圖8 所示。結果顯示，在皮膚黑色素瘤組織中，核心基因集的表達與CD4+T 細胞、初始CD4+T 細胞（CD4 naive）、CD8+T細胞、Th17 細胞、Th2 細胞、黏膜相關恒定T 細胞（mucosal-associated invariant T cells，MAIT）、濾泡輔助性T 細胞（follicular helper T cell，Tfh）的浸潤呈顯著負相關，與自然調節性T 細胞（natural regulatory T cells，nTreg）、中性粒細胞（neutrophil）、樹突狀細胞（dentric cell，DC）、單核細胞（monocyte）呈顯著正相關。

圖8 核心基因在皮膚黑色素瘤中的免疫浸潤表達Fig.8 Immunoinvasive expression of core genes in cutaneous melanoma

2.6.3 核心基因的免疫浸潤分析 應用TIMER 2.0數據庫，選擇免疫浸潤細胞為B 細胞、CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、樹突狀細胞6 種，分別對3 個核心基因KPNA2、AURKA、DTL進行分析，如圖9 所示。由P值可知，3 種核心基因與所選免疫細胞浸潤均顯著相關。Spearman 相關系數結果顯示，KPNA2、AURKA均分別與CD8+T細胞和樹突狀細胞呈正相關，DTL則與CD4+T 細胞、中性粒細胞呈正相關。

圖9 3 種核心基因與皮膚黑色素瘤腫瘤純度及6 種免疫細胞的浸潤分析Fig.9 Tumor purity of three core genes in cutaneous melanoma and infiltration analysis of three core genes in six immune cells

2.7 潛在調控中藥預測分析

應用Coremine Medical 數據庫，將3 個核心基因與具有潛在治療作用的中藥進行映射，選取其中具有統計學意義（P＜0.05）的藥物進行分析，可以得到對核心基因具有潛在治療作用的一系列中藥，如油桐葉、豬苓、云芝、構皮、高良姜、甘草、丹參、人參等，如表2 所示。

表2 基于核心基因的中藥預測Table 2 Traditional Chinese medicines prediction based on core genes

3 討論

3.1 免疫相關的腫瘤微環境（tumor microenvironment，TME）與皮膚黑色素瘤密切相關

對于皮膚黑色素瘤免疫機制的研究涉及TME、抗原呈遞和檢測、淋巴細胞和免疫細胞亞群、免疫檢查點等多個方面[9]。皮膚黑色素瘤的發生與TME密切相關，TME 包括腫瘤細胞、免疫細胞、血管和基質成分等，它們的相互作用對于腫瘤的發展起著至關重要的作用[10]。研究表明，黑色素瘤細胞可通過分泌細胞因子和化學物質來抑制免疫細胞的功能，從而促進免疫逃逸[11]。此外，免疫細胞的浸潤程度和類型也會影響皮膚黑色素瘤的發生和發展。在皮膚黑色素瘤中，腫瘤浸潤淋巴細胞數量較少，且其免疫耐受性較強，說明TME 抑制免疫反應的能力是導致皮膚黑色素瘤逃逸的重要因素[12]。皮膚黑色素瘤的發生還與人類白細胞抗原系統（human leukocyte antigen，HLA）和腫瘤抗原有關，HLA 與T 細胞受體結合后可引發T 細胞免疫反應，從而殺傷腫瘤細胞[13]。同時，在皮膚黑色素瘤中T 細胞和B 細胞都受到不同程度的影響[14]。T 細胞在體內的主要作用是殺傷腫瘤細胞，然而，在皮膚黑色素瘤中腫瘤抑制T 細胞的功能是導致其免疫逃逸的主要機制之一。但是B 細胞在皮膚黑色素瘤中的作用尚不清楚，其在腫瘤免疫治療中的作用亦有待進一步研究和探討，本研究對于B 細胞免疫浸潤趨勢分析結果也無明顯特異性改變。此外，免疫細胞亞群的存在也會影響皮膚黑色素瘤的發生和發展。在皮膚黑色素瘤患者中，調節性T 細胞（regulatory cells，Tregs）數量增加，自然殺傷（natural killer，NK）細胞活性降低，這些因素都可能導致免疫逃逸，且與本研究分析的結果相符，即Treg 細胞免疫浸潤趨勢與疾病呈正相關[15]。

3.2 細胞周期異常和細胞侵襲是皮膚黑色素瘤的潛在機制

皮膚黑色素瘤的形成主要包括黑素細胞的增殖、細胞周期和凋亡失控、細胞浸潤和侵襲、血管生成、免疫逃逸等生物過程。正常情況下，黑素細胞僅會在皮膚、眼睛等部位分散分布，而遺傳基因突變、線粒體損傷等會導致黑素細胞的惡性增殖，進而形成黑色素瘤。另外，黑色素瘤細胞的細胞周期和凋亡過程受到了調節失控的影響：多數黑色素瘤患者的細胞周期調控基因存在突變，這種突變會使得細胞周期G1/S 檢查點失調，從而促進黑色素瘤細胞的增殖和生長；黑色素瘤細胞中許多細胞周期調節蛋白cyclin-dependent kinase（CDK）抑制劑p16INK4a的基因缺失或基因突變會導致細胞周期蛋白D1-周期蛋白依賴性激酶4/6 復合物活性上調，促進細胞進入DNA 復制和細胞分裂期[16]；黑色素瘤細胞的凋亡受到抑制，導致細胞周期過程不被中斷，進而導致細胞過度增殖和擴散。黑色素瘤細胞還可以穿透正常組織，進入血管和淋巴系統，并在其他部位進行擴散形成轉移灶，這一過程與黑色素瘤細胞表面的特定黏附分子和基質金屬蛋白酶等相關因素有密切關系[17]。此外，黑色素瘤細胞能夠通過表面分子的改變、免疫細胞浸潤抑制等，逃避身體免疫系統的攻擊，并促進皮膚黑色素瘤的生長和擴散。

本研究通過分析3 個數據集得出114 個皮膚黑色素瘤組織與正常組織的DEGs，其中包括上調基因36 個、下調基因78 個。GO 功能和KEGG 通路富集分析顯示，皮膚黑色素瘤的發生發展與信號轉導、凋亡過程、基因表達的正調控、細胞因子與細胞因子受體相互作用、Toll 樣受體信號通路等密切相關。在信號轉導方面，Malekan 等研究表明，缺氧誘導因子-1α（hypoxia-inducible factor 1-alpha，HIF-1α）能夠通過RAS/RAF/MEK/ERK 信號級聯通路、磷脂酰肌醇-3- 羥激酶（phosphatidylinositol-3-hydroxykinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）和核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）等常見通路影響皮膚黑色素瘤進程中細胞增殖、轉移、血管生成和有關代謝[18-19]。其中，作為皮膚黑色素瘤發病機制的核心，RAS/RAF/MEK/ERK 信號通路通常由致癌突變（如B-RAF、N-RAS）和上游膜受體突變（例如KIT）激活[20]。其中，部分致癌突變會激活PI3K/Akt/mTOR 通路，從而通過一系列信號轉導使得Akt 磷酸化和活性增加，導致細胞凋亡減少和增殖信號增加，促進腫瘤的生成[21]。在細胞因子方面，研究表明細胞因子可以通過抑制增殖和促進凋亡2 個方面來直接抑制腫瘤細胞的生長。在臨床前癌癥模型中，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子已被證明可以介導有效的抗腫瘤免疫[22]。此外，細胞因子通過信號通路可對皮膚黑色素瘤中的細胞浸潤侵襲起到促進作用。Rathore 等[23]研究表明，腫瘤來源的正五聚蛋白3（pentraxin 3，PTX3）通過可靶向的炎癥相關途徑促進黑色素瘤細胞侵襲，并通過Toll 樣受體4（Tolllike receptor 4，TLR4）/NF-κB 信號通路促進黑色素瘤細胞遷移?？傮w而言，以上研究結果均與本研究的分析結果一致。

3.3 核心基因可能成為皮膚黑色素瘤潛在治療靶點

本研究共篩選得到15個關鍵基因，包括EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、TYMS、PKP1、SPP1、MMP1、KLF4、EPCAM、KIF23、DTL、CLDN1、LCP2、FGFR2，其中KIF23、KPNA2、DTL、TYMS、MMP1、AURKA、LCP2、SPP1表達上調，EGFR、GATA3、EPCAM、CLDN1、KLF4、FGFR2、PKP1表達下調。此外，繼續優化關鍵基因篩選，得到3個核心基因KPNA2、AURKA、DTL并構建核心基因集。KPNA2是在核質運輸中發揮重要作用的蛋白，在介導腫瘤抑制因子的核轉運方面，可通過影響細胞分化、增殖和凋亡促進腫瘤形成和進展。已有研究表明，KPNA2在黑色素瘤組織和細胞系中呈高表達狀態，其過表達可以通過NF-κB-p65 信號通路促進皮膚黑色素瘤細胞增殖、遷移和侵襲，對預后有顯著不良影響[24-25]。AURKA作為AURK 家族的代表性成員，對有絲分裂過程以及維持基因組完整性具有重要作用。其在腫瘤細胞中作為轉錄因子可促進細胞遷移與入侵，并定位于線粒體調節線粒體動態和三磷酸腺苷生產[26-27]。另有研究表明，AURKA下調可促進皮膚黑色素瘤胞凋亡并誘導細胞周期阻滯[28]。而DTL可以通過調節參與細胞周期的調節蛋白的表達，影響DNA 復制和修復的完整性[29]。有研究表明，DTL連同細胞因子受體4（Cullin-RING ligase 4，CRL4）形成CLR4Cdt2連接酶，抑制其活性可以阻滯黑色素瘤在體內外生長增殖[30]。此外，有數據顯示DTL高表達的皮膚黑色素瘤患者，其無病生存期和總生存期均較短[29]。

此外，FGFR2基因的突變對皮膚黑色素瘤的產生和進展也存在相關影響。正常生理狀態下，由FGFR介導的信號傳導通路參與新血管生成、細胞增殖和遷移、調節器官發育、傷口愈合等過程。然而，當FGFR發生突變或者過表達時，會引起FGFR 信號通路的過度激活，并進一步誘發正常細胞癌變[31]。FGFR常見的變異情況有以下5 種[32-33]：（1）由于基因擴增導致FGFR過表達；（2）EC 區域（胞外結構域）的FGFR突變（SNV與indel）；（3）TK 區域（激酶結構域）的FGFR突變（SNV 與indel）；（4）FGFR融合I 型：FGFRs的TK 區域前與另一個基因5’端發生基因融合；（5）FGFR 融合II 型：FGFRs的TK 區域后與另一個基因的3’端發生基因融合。有研究顯示，功能喪失的FGFR2突變發生在黑色素瘤的1 個亞群中，突變譜顯示其70%的突變方式為轉換，與本研究結果相符合。其中 A648T 突變消除了FGFR2的酪氨酸激酶活性，但黑色素瘤中FGFR2功能喪失的生物學后果仍未有研究發現[30]。

3.4 相關中藥可能是皮膚黑色素瘤治療的潛在藥物

本研究篩選出作用于皮膚黑色素瘤關鍵基因的中藥可分為以下9 類：補虛藥（人參、甘草）、清熱解毒藥（油桐葉）、拔毒生肌藥（木薯）、消腫拔毒藥（蓖麻子）、溫里藥（高良姜）、健脾利濕藥（蠶豆、云芝）、利水滲濕藥（豬苓、構皮）、活血化瘀藥（丹參）、安神藥（靈芝）。

皮膚黑色素瘤在中醫范疇雖無明確病名對應，但根據發病特點可歸屬“黑痣”“黑疔”“惡瘡”“失榮”等，亦與“脫癰”“厲癰”“翻花”等發病形式極為類似[34]。其形成機制多以正氣虛損為基礎，進而陽氣束結，或外邪搏于血氣，致氣血瘀滯形成烏黑腫塊。此外，血癖氣滯、濕毒淤滯、外感六淫等病因皆可變生惡瘡導致本病。上述補虛藥中，人參性平、味甘，屬微苦微溫之品，既能大補元氣，又能益血生津、安神定魄，為補藥之良品，虛證之要藥?！妒備洝匪d“人參丸”，以人參1 分為末入藥，主治小兒瘡子黑色。甘草味甘性平、氣薄味厚，既能補脾胃之不足，益三焦之元氣，又能調和諸藥?！叭藚?甘草”作為經方常見藥對，相須為用，共同補益脾肺之氣，使氣血津液得生，虛損諸證自解。故而上述補虛藥的使用及配伍，輔以補氣安神之靈芝，可針對皮膚黑色素瘤起病的前提基礎“虛損內生”起到對證治療作用。此外，高良姜作為辛熱之品，有溫中止嘔、散寒止痛之功，可針對寒濕停聚型皮膚黑色素瘤患者起溫化水濕之效；丹參活血止痛、祛瘀生新，可有效緩解皮膚黑色素瘤中由于氣血瘀滯所致的烏黑腫塊；豬苓、構皮、蠶豆、云芝均有祛濕之功，可用于濕毒瘀滯型皮膚黑色素瘤。

中藥外治法亦在一定程度上有助于皮膚黑色素瘤的治療，如蓖麻子善祛風活絡、消腫拔毒，《本草經疏》載其可“追膿取毒，能出有形之滯物”，外用能“退消陽毒紅腫，及發頤、瘰疬、乳癰等癥”?！洞褥饩w醫方選議》曾載有蓖麻子膏一方，以蓖麻子1 兩“攤布光上，貼面跳動處，或摻于大肥皂內貼之”，可治手臂風疾及癰疽腫毒。對于血瘀日久化熱，致使皮膚紅腫焮痛的皮膚黑色素瘤患者或有一定療效。此外，油桐葉清熱解毒、殺蟲消腫，木薯消腫解毒，均可搗爛或絞汁敷抹于患處，用以緩解癰疽瘡瘍、瘀腫疼痛等皮膚病癥，對于患處破潰、出血的皮膚黑色素瘤病灶或有一定療效。

目前多項研究[35-36]表明人參活性成分對皮膚黑色素瘤細胞有誘導凋亡、抑制轉移的作用，人參皂苷Rh2可以誘導人皮膚黑色素瘤細胞A375-S2 凋亡，人參皂苷Rg3可明顯抑制B16 皮膚黑色素瘤肺轉移等。此外，丹參提取液可能通過抑制皮膚黑色素瘤細胞對基底膜的侵襲能力以及降低其運動能力顯著減輕皮膚黑色素瘤肺轉移程度[37]。丹參的主要成分丹參酮I、丹參酮IIA和隱丹參酮可以抑制皮膚黑色素瘤細胞的增殖活性，促進其凋亡[38]。同時，丹參-人參可協同抑制髓源抑制性細胞（myeloidderived suppressor cells，MDSCs）在轉移灶中的浸潤，從而重塑轉移灶局部免疫抑制的微環境，達到抑制腫瘤轉移的目的[39]。另有研究表明，高良姜素可以抑制人皮膚黑色素瘤A375細胞的生長和轉移，同時降低A375 細胞內酪氨酸酶的活性[40]。豬苓多糖可以通過促進巨噬細胞釋放NO 抑制皮膚黑色素瘤細胞生長[41]。靈芝多糖可促進黑素瘤和骨肉瘤抗原誘導巨噬細胞CD86 和主要組織相容性復合體II類（major histocompatibility complex-II，MHC-II）（IA/I-E）表達，促進巨噬細胞對腫瘤抗原的提呈作用[42]。云芝多糖可誘導細胞凋亡，并抑制小鼠黑色素瘤B16 細胞的生長[43]。多項研究表明，甘草的活性成分甘草查耳酮A 和光甘草定可以通過抑制皮膚黑色素瘤細胞糖酵解表型誘導細胞凋亡，異甘草素可以通過抑制酪氨酸酶的活性抑制皮膚黑色素瘤細胞的生長[44-47]。這表明中藥及其活性成分在延緩皮膚黑色素瘤進展方面扮演重要角色。這些結果可為中醫藥治療皮膚黑色素瘤組方配伍提供一定參考價值。

4 結論

本研究通過生物信息學方法說明皮膚黑色素瘤的發生進展是一個多基因異常表達的復雜過程，主要與細胞周期調控、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶信號通路、細胞黏附等生物過程及Toll 樣受體信號通路等有關，同時如nTreg 等免疫細胞的浸潤及相關TME 對皮膚黑色素瘤發生發展也密切相關。此外，本研究從基因層面挖掘出皮膚黑色素瘤的關鍵基因和優化核心基因（集），有望成為疾病診斷和預后的潛在生物標志物和藥物作用靶點。丹參、人參、構皮、高良姜、甘草、蓖麻子、油桐葉等可作為皮膚黑色素瘤治療的潛在中藥，為中醫藥防治皮膚黑色素瘤提供新的思路。由于本研究只是基于公共數據集進行挖掘，其結果及機制仍需在基礎實驗與臨床研究中進一步驗證。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突