基于空間代謝組學探究川貝母抗肺纖維化的作用機制（II）

秦善博，譚 鵬，郝 露，謝俊杰，林俊芝，張 磊，趙軍寧

1.四川省中醫藥科學院，國家中醫藥管理局中藥質量生物評價重點研究室，四川 成都 610041

2.成都大學食品與生物工程學院，四川 成都 610106

3.成都中醫藥大學附屬醫院，代謝性疾病中醫藥調控四川省重點實驗室，四川 成都 610075

肺纖維化是一種慢性、進行性的肺部疾病，臨床治療難度大[1-2]。流行病學調查顯示，近10 年來肺纖維化的發病率逐漸上升，尤其是在老年人群中更為普遍[3-4]。現代醫學研究顯示，纖維化可被描述為一種不合理的損傷修復形式，持續性的肺泡上皮細胞損傷、修復異常、成纖維細胞的增殖和細胞外基質的積累會導致肺結構紊亂和肺纖維化的形成。雖然特發性肺纖維化的發病機制尚不完全清楚，但已有大量研究表明，肺泡上皮-間質轉化（epithelialmesenchymal transitions，EMT）在肺纖維化的形成和發展中具有重要作用[5-7]。目前，臨床治療肺纖維化的藥物非常少，主要有吡非尼酮和尼達尼布等，但這些藥物的療效和安全性并不令人滿意[7-8]。

近年來，傳統中醫藥在抗肺纖維化方面取得了一定進展，相關研究報道逐漸增多[9-11]。川貝母FritillariaeCirrhosaeBulbus自古以來是臨床化痰止咳和消癰散結良藥，現代臨床也用于改善肺纖維化。然而，川貝母的藥理作用機制研究非常薄弱，現有文獻報道主要集中在“止咳化痰”方面[12-13]，關于川貝母抗肺纖維化的研究幾乎一片空白[14]。隨著臨床抗肺纖維化需求的增多，開展川貝母在抗肺纖維化方面的藥理作用機制研究對于支撐其在臨床科學合理用藥提供實驗證據支撐是非常必要的。空間代謝組學是一種基于質譜成像技術的代謝組學分析方法，與現有常規代謝組學分析方法相比，該方法具備原位定性和定量分析化合物的能力，并保留化合物的空間維度信息，能夠獲得樣本特定區域目標物的空間分布譜圖，從而深入挖掘代謝物在樣本中的空間分布情況和代謝過程中的差異變化[15-17]。課題組前期研究表明川貝母對博來霉素誘導的大鼠肺纖維化確有一定的改善作用，但其作用機制尚不完全清楚，因此課題組進一步采用空間代謝組學研究其抗肺纖維化可能的作用機制，并用藥理實驗指標進行驗證，以期為探尋川貝母抗肺纖維化的藥理作用機制提供一些參考。

1 材料

1.1 動物

SPF 級雄性SD 大鼠60 只，體質量（180±10）g。所有大鼠均由四川省中醫藥科學院動物實驗中心提供，合格證號SCXK（川）2018-19，所有大鼠均經動物檢驗檢疫合格。動物于溫度22～26 ℃、相對濕度35%～50%的環境下飼養。動物實驗經四川省中醫藥科學院倫理委員會批準[批準號SYLL（2022）-017]。

1.2 藥材

川貝母采自四川省廣元市，經四川省中醫藥科學院譚鵬副研究員鑒定為百合科植物太白貝母FritillariataipaiensisP.Y.Li 的干燥鱗莖。

1.3 藥品與試劑

硫酸博來霉素（批號TB002314）、改良Masson三色染色液（批號0420A22）購自合肥博美生物科技有限責任公司；4%甲醛固定液（批號22192875）購自武漢博士德生物公司；化學發光試劑盒（批號H31500-1）購自天地人和生物科技有限公司；牛血清白蛋白（批號4240GR250）購自德國BIOFROXX公司；TMEDA（批號CAS110-18-9）購自KESHI 公司；大鼠轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）ELISA 試劑盒（批號ZC-37645）購自上海茁彩生物科技有限公司；總蛋白測定試劑盒（批號A045-2-2）、羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）測定試劑盒（批號A030-2-1）均購自南京建成生物工程研究所；Cryo-Gel 冷凍切片包埋劑購自德國Leica 公司；0.5%伊紅染液水溶液、蘇木素染色液購自美國Sigma 公司；靛藍染色液購自上海啟中信息有限公司；α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）一抗（批號700068）、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）一抗（批號201283）、β-肌動蛋白（β-actin）一抗（批號700068）、HRP 標記的山羊抗鼠二抗（批號511103）、HRP 標記的山羊抗兔二抗（批號511203）均購自成都正能生物技術有限公司；Smad 2 蛋白一抗（批號A16912）購自武漢愛博泰克生物科技有限公司；Smad 3 蛋白一抗（批號NB10056479ss）購自美國NOVUS 公司；磷酸化Smad 2（p-Smad 2）一抗（批號ab188334）、磷酸化Smad 3（p-Smad 3）一抗（批號ab52903）均購自英國Abcam 公司；蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）一抗（批號60203-2-Ig）、磷酸化Akt（p-Akt）一抗（批號66444-1-Ag）、α-SMA 一抗（批號201283）均購自美國Proteintech 公司。

1.4 儀器

空氣動力輔助解吸電噴霧離子化質譜成像平臺（北京維科托科技有限公司）；Q-Exactive Orbitrap 質譜儀、MK3 型酶標儀、Superfrost Plus 型正電荷防脫載玻片（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；JT-12S 型自動脫水機（武漢俊杰電子有限公司）；BMJA 型組織包埋機、PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）；RS36 型全自動染色機（常州派斯杰醫療設備有限公司）；Pannoramic 250型數字切片掃描儀（匈牙利3DHISTECH 公司）；KZ-II 型高通量組織勻漿儀、KZ-III-F 型高速低溫組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）；D3024R型臺式高速冷凍型微型離心機（美國SCILOGEX 公司）；61006-9Q 型凝膠成像系統（上海勤翔科學儀器有限公司）；SW-CJ-1D 型超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公司）；K5800C 型超微量核酸蛋白分析儀（北京凱奧科技發展有限公司）；SpectraMAX Plus384 型酶標儀（美谷分子儀器有限公司）；DZKW-4 型電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業儀器有限公司）；UV752N 型紫外可見分光光度計（上海佑科儀器儀表有限公司）；Leica CM 1950 型冷凍切片機（德國Leica 公司）。

2 方法

2.1 藥物制備

取干燥太白貝母，粉碎成細粉，過5 號篩，ig時按大鼠體質量稱取川貝母粉，用4 mL 無菌水溶解后充分搖勻，形成川貝母粉混懸液，快速ig。

2.2 動物模型的制備及給藥

60 只SPF 級雄性SD 大鼠適應性飼養7 d，隨機挑選50 只大鼠經氣管軟骨環間隙一次性向氣管內緩慢注射含硫酸博萊霉素（5 mg/kg）的無菌水。造模14 d 后剔除死亡老鼠，將剩下存活大鼠分為模型組、川貝母高劑量組（FCB-H）、川貝母中劑量組（FCB-M）和川貝母低劑量組（FCB-L），每組8 只。大鼠的給藥劑量參考《中國藥典》2020 年版推薦正常成人1～2 g 計算，川貝母低、中、高劑量組大鼠每日劑量分別按照人-鼠等效量的0.5、1、2 倍給藥。從造模后第15 天開始ig 川貝母粉，高、中、低劑量組分別按每日0.36、0.18、0.09 g/kg 劑量連續ig 28 d。空白組大鼠同上法注入無菌水，空白組和模型組正常飲食飲水。

2.3 大鼠樣本收集與處理

2.3.1 血清樣本收集與處理 末次給藥30 min 后，稱量體質量，ip 戊巴比妥鈉，麻醉后仰臥固定于動物解剖臺，切開腹腔，用不含抗凝劑的采血管，于腹主動脈取血，室溫放置2 h，然后置于4 ℃、2 570 r/min（離心半徑12 cm）冷凍離心10 min 后分離血清，用于血清細胞因子含量檢測。

2.3.2 肺組織樣本收集與處理 切取部分左肺置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h 以上，石蠟包埋切片，用于蘇木素-伊紅（HE）、Masson 染色分析。另切取部分左肺，置于包埋盒底部，將組織周邊涂滿包埋膠，錫箔紙包裹置于?80 ℃保存，用于空間代謝組學分析。另切取部分左肺和右肺迅速放入?70 ℃液氮中凍存，用于生化檢測和Western blotting 分析。

2.4 空間代謝組學分析

對模型組和FCB-M 組大鼠肺組織進行空間代謝組學分析。使用切片機對已固定的大鼠肺組織進行縱向切割，并隨后進行HE 染色。在確定肺纖維化區域的基礎上，對與該區域相鄰的肺組織進一步切片，用于后續質譜成像掃描分析。分析時，將切片取出后，迅速置于真空干燥器中干燥30 min。質譜成像平臺控制程序軟件設置掃描參數：X軸掃描速度為0.2 mm/s，Y軸步進間距為0.1 mm，每行延遲時間為7 s，掃描區域的X軸掃描長度為10 mm，Y軸掃描長度為10 mm。數據采集使用Xcalibur 4.4.16 軟件，依據樣本尺寸、步進間距、掃描速度等設定數據采集序列。采用正離子Full MS 掃描模式，噴霧電壓＋5 kV，傳輸管電壓±0 V，毛細管溫度350 ℃，掃描范圍m/z70～1 000，分辨率60 000，噴霧氣壓力0.6 MPa，噴霧角度60°，噴霧距切片距離0.7 mm，噴霧距傳輸管距離3 mm，傳輸管距錐孔距離10 mm，抽氣體積流量45 L/min。

2.5 肺組織差異代謝物的篩選

將質譜原始數據（raw）通過imzMLConverter version 1.3.0 軟件轉換為imzML 格式，隨后導入到Cardinal 軟件包（https://bioconductor.org/packages/release/bioc/html/Cardinal.html）中進行背景扣除、峰值對齊及峰值篩選處理。使用SmetDB 數據庫和pySM注釋框架對通過高分辨質譜成像獲得的數據進行代謝物的定性注釋。定性標準包括物質峰空間分布得分高于0.9、同位素空間強度得分高于0.1、同位素空間分布得分高于0.1。在此基礎上，依據HE 染色圖，將大鼠肺組織切片分為纖維化區域和非纖維化區域，并選擇模型組和FCB-H 組肺組織纖維化區域進行對比分析。通過對選取區域質譜數據進行峰數據提取、缺失值填充等處理獲得相對定量數據。采用有監督的正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）獲得的VIP值（VIP＞1）、T檢驗的P值（P＜0.05）以及差異倍數（fold change，FC）來篩選組間差異代謝產物。采用京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG，https://www.kegg.jp/）對篩選出的差異代謝物進行代謝通路富集分析。

2.6 檢測血清及肺組織中相關細胞因子含量

準確稱取肺組織質量，加入9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2 500 r/min 離心10 min，取上清液用生理鹽水按1∶9 稀釋成1%組織勻漿，用試劑盒測定HYP 含量，使用ELISA 試劑盒測定大鼠血清中TGF-β1 含量。

2.7 Western blotting 檢測肺組織中相關蛋白表達

使用Minute 動物組織總蛋白提取試劑盒處理肺組織，按照試劑盒說明書進行制樣。收集含有總蛋白的樣品液并使用BCA 法測定蛋白濃度。蛋白樣品經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜。隨后，將膜在室溫下用5%脫脂牛奶封閉90 min。分別加入Smad 2、Smad 3、p-Smad 2、p-Smad 3、Akt、p-Akt、E-cadherin 和α-SMA 一抗，4 ℃孵育4 h；加入二抗，37 ℃孵育1 h；加入增強化學發光試劑進行過氧化物酶標記，采用Chemi Analysis 軟件測定蛋白條帶灰度值，計算目的蛋白相對表達量。

2.8 統計學分析

實驗數據均由IBM SPSS Statistics 2.0 進行統計分析，兩組間比較采用Student’st檢驗，多組間統計學差異采用單因素方差分析。

3 結果

3.1 川貝母對大鼠肺組織炎癥及纖維化的影響

如圖1 所示，病理切片HE 染色結果顯示，空白組大鼠的肺部結構和肺泡構造完好清晰，無明顯的炎癥細胞浸潤和纖維組織增生，幾乎未見病理性變化。模型組大鼠的肺泡構造紊亂，間質部位出現大量炎癥細胞浸潤和纖維組織增生，部分膠原形成了致密的紅色膠原沉積，表現出較為明顯的纖維化病變。與模型組比較，川貝母各劑量組大鼠肺組織中炎癥細胞浸潤情況有所減少，膠原纖維相對較少。Masson 染色結果顯示，空白組大鼠肺組織結構正常，肺泡完整清晰，未見明顯的炎癥細胞浸潤，少量藍色膠原纖維沉積（大鼠肺部靠近支氣管部位有少量纖維化為正常現象）。與空白組比較，模型組大鼠的肺泡構造紊亂，肺組織受到嚴重破損，存在大量炎癥細胞浸潤，藍色膠原纖維沉積較多，纖維化程度嚴重。與模型組比較，川貝母各劑量給藥組大鼠的肺部藍色膠原纖維沉積和炎癥細胞浸潤明顯減少，纖維化程度均有所減輕。

圖1 大鼠肺組織病理切片染色結果Fig.1 Pathological section staining results of rat lung tissue

3.2 空間代謝組學分析結果

3.2.1 肺組織空間代謝組學輪廓分析結果 運用空氣動力輔助解吸電噴霧離子化質譜成像技術對大鼠肺組織樣本進行空間代謝組學分析。在正離子模式下對肺組織掃描分析后，對掃描數據進行空間收縮質心聚類分析，然后進行K-means 聚類，共識別出12 個不同的代謝物簇，見圖2-A。值得注意的是，其中一些特定簇的分布與纖維化區域表現出了明顯的相關性。通過HE 染色圖分析，確定模型組和FCBM 組肺組織上纖維化病灶區域，用于代謝組學對比分析。分別采用有監督的主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）及OPLS-DA 進行多元數據分析。PCA 結果顯示，模型組和FCB-M 組的樣本在無監督模式下表現出良好的聚類特性，且兩者之間存在顯著的區分，見圖2-B。同樣，PLS-DA 的結果展示了模型組與FCBM 組之間的明顯分離，且模型的解釋率R2Y（cum）和預測率Q2（cum）均接近1，表明模型具有良好的預測能力，見圖2-C。OPLS-DA 結果顯示，模型組和FCB-M 樣本在得分圖上具有顯著的差異，見圖 2-D。根據OPLS-DA 模型得到變量權重值（variable importance of projection，VIP）用于后續潛在的生物標記物的尋找。為防止模型出現過擬合現象，采取了7 輪交叉驗證以及200 次響應排序檢驗的方法來評估模型的性能。R2和Q2的值從左至右均低于最右側的原始值，且Q2與Y軸在負半軸上交叉，表明實驗的模型沒有出現過擬合現象，預測能力表現良好，見圖2-E。

圖2 不同肺組織樣本的空間代謝組學分析結果Fig.2 Spatial metabolomics analysis results of different lung tissue samples

3.2.2 相關差異代謝物篩選結果 基于OPLS-DA的V-plots 得分圖，選取VIP＞1 且P＜0.05 的指標，篩選出模型組與給藥組間比較分析出的顯著差異的代謝產物，共篩選并鑒定出71 種差異代謝物（圖3-A、B）。圖中，紅點表示實驗組中顯著上調的代謝產物，藍點表示顯著下調的代謝產物，灰點則代表不顯著的代謝產物，篩選后的差異代謝物熱圖見圖3-C。與模型組比較，FCB-M 組肺組織纖維化區域中，精胺、亞精胺等25 個代謝物顯著上調，L-精氨酸、2-甲氧基雌二醇等46 個差異代謝物顯著下調。

圖3 差異代謝物篩選分析Fig.3 Differential metabolites screening analysis

3.2.3 差異代謝通路分析結果 利用模型組和FCB-M 組比較篩選得到的71 個差異代謝物的KEGG ID 進行通路富集分析。應用超幾何檢驗，在顯著性差異表達代謝物中顯著富集的通路條目，共富集到8 條可能的代謝通路，代謝通路氣泡圖見圖4，結合課題組前期的實驗結果及文獻報道，從中篩選出4 條可能與肺纖維化相關的代謝通路，分別為精氨酸和脯氨酸代謝途徑、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號通路、谷胱甘肽代謝途徑、類固醇激素生物合成途徑。這些途徑中共涉及13 個關鍵的差異代謝物，其中L-精氨酸（m/z175.118 9）、精胺（m/z203.223 0）、亞精胺（m/z146.164 9）和2-甲氧基雌二醇（m/z325.177 2）4 個內源性差異代謝物在大鼠肺組織上的質譜成像圖見圖5。

圖4 差異代謝通路富集氣泡圖Fig.4 Enriched bubble diagram of differential metabolic pathways

圖5 典型的關鍵差異代謝物質譜成像圖Fig.5 Typical key differential metabolites mass spectrometry imaging images

3.3 川貝母對大鼠血清中TGF-β1 及肺組織中HYP 水平的影響

如圖6 所示，與空白組比較，模型組大鼠血清中TGF-β1 和肺組織中HYP 含量均明顯升高（P＜0.01）；連續28 d ig 不同劑量川貝母粉后，與模型組比較，FCB-H 組大鼠血清中TGF-β1 顯著降低（P＜0.05），FCB-H、FCB-M 組肺組織中HYP 含量顯著降低（P＜0.05）。結果表明，川貝母粉能夠調控博來霉素誘導的肺纖維化大鼠體內TGF-β1 和HYP 的表達。

圖6 川貝母對各組大鼠血清及肺組織中相關細胞因子含量的影響 (±s, n = 3)Fig.6 Effects of Fritillariae Cirrhosae Bulbus on contents of related cytokines in serum and lung tissue of rats in each group(±s , n = 3)

3.4 川貝母對大鼠肺組織中肺纖維化相關蛋白表達的影響

如圖7 所示，與空白組比較，模型組大鼠肺組織中E-cadherin蛋白表達水平顯著降低（P＜0.001），Smad 2、Smad 3 的磷酸化水平和α-SMA 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.05、0.01），p-Akt/Akt 蛋白表達量升高；與模型組比較，FCB-H 組大鼠肺組織中Smad 2 和Smad 3 磷酸化水平顯著降低（P＜0.05），E-cadherin 蛋白表達水平顯著升高（P＜0.05）；FCBH 組和FCB-M 組α-SMA 蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05），各給藥組p-Akt/Akt 蛋白表達量有降低趨勢。結果表明，川貝母粉能夠調控博來霉素誘導的肺纖維化大鼠體內TGF-β1/Smad 2/3 信號通路和EMT 相關蛋白表達。

圖7 川貝母對各組大鼠肺組織中相關蛋白表達的影響 (±s , n = 3)Fig.7 Effect of Fritillariae Cirrhosae Bulbus on related protein expressions in lung tissue of rats in each group (±s , n = 3)

4 討論

為了探尋川貝母抗肺纖維化可能的藥理作用機制，本研究先利用空間代謝組學結合多變量統計分析，從不同給藥組對比篩選出與川貝母抗肺纖維化可能的相關代謝通路，再利用常規藥理實驗對其中一些相關性強的代謝通路進行驗證。差異代謝通路富集分析結果顯示川貝母可能是通過調控mTOR、精氨酸、脯氨酸和谷胱甘肽等代謝途徑發揮抗肺纖維化作用。越來越多的研究發現肺纖維化過程中會出現mTOR 信號通路過度活化，抑制該信號通路可以抑制EMT 和減少細胞外基質的表達，從而抑制纖維化形成[18-20]。EMT 是一種完全分化的上皮細胞在外界因素作用下逐漸轉變為間充質細胞，并失去上皮細胞原有功能的過程，是肺纖維化發生和發展的重要機制[21]。在EMT 過程中，上皮細胞標志物如E-cadherin、緊密黏連蛋白-1 等表達降低，間質細胞標志物如α-SMA、成纖維細胞特異蛋白等表達升高。研究表明，L-精氨酸是mTOR 信號通路中一個重要的調節因子，L-精氨酸的攝入可以增加細胞內的蛋白質合成速率，增加氨基酸傳感器的表達，從而激活mTOR 信號通路調控EMT 階段[22-23]。本研究中質譜成像結果顯示，肺纖維化大鼠給藥川貝母粉28 d 后，其肺組織纖維化區域的L-精氨酸含量明顯低于模型組大鼠肺纖維化區域中L-精氨酸含量，表明在肺纖維化模型基礎上，給藥川貝母會影響大鼠體內L-精氨酸含量水平，從而調控EMT 階段。此外，Akt 是mTOR 信號通路中的關鍵靶點，mTOR 復合物可以通過直接磷酸化激活Akt，調控細胞的肌動蛋白骨架，從而調控EMT[24-25]。TGF-β1 被認為是肺纖維化發生的核心因素[26]。當 TGFβ1/Smad 信號通路被激活時，會導致減少上皮細胞標志物（如E-cadherin）的表達，并增加間質細胞標志物（如α-SMA）的表達，從而促進EMT 過程[27-28]。細胞因子檢測結果顯示，與模型組比較，FCB-H 組能夠明顯抑制由博來霉素引起的TGF-β1 升高。Western blotting 分析結果顯示，與模型組比較，FCBH 組大鼠肺組織中α-SMA、p-Akt 表達量降低，Ecadherin 表達量升高，Smad 2 和Smad 3 磷酸化水平降低。表明川貝母可能通過TGF-β1/Smad 和Akt/mTOR 等信號通路來抑制EMT，從而發揮抗肺纖維化作用。

此外，空間代謝組學分析結果顯示，川貝母抗肺纖維化還可能與抑制細胞外基質沉積有關。細胞外基質是組織中的非細胞部分，主要由膠原蛋白、纖維連接蛋白等多種蛋白質和多糖組成。研究表明，細胞外基質的沉積在肺纖維化的發展過程中起著重要作用，是肺纖維化的主要病理特征之一[29]。精氨酸和脯氨酸代謝是人體內重要的代謝途徑，在蛋白質合成和多種信號傳導途徑各種生物化學過程中發揮關鍵作用。脯氨酸參與膠原蛋白的合成，其代謝異常可能會影響到膠原蛋白的產生，進而導致細胞外基質沉積[30]。亞精胺是精氨酸和脯氨酸代謝途徑的主要產物之一，在衰老、細胞自噬等領域都有重要的生理功能。研究表明，亞精胺會導致纖維化小鼠細胞外基質相關蛋白表達水平明顯下降，從而起到抗纖維化的作用[31]。質譜成像結果顯示，肺纖維化大鼠給藥川貝母粉28 d 后，其肺組織纖維化區域的亞精胺含量明顯高于模型組大鼠肺纖維化區域中亞精胺含量。HYP 是膠原蛋白的主要組成成分，而膠原蛋白是細胞外基質的核心組成部分，因此HYP常被當作評估肺纖維化程度及其疾病進展的生物標志物[32]。細胞因子檢測結果顯示，與模型組比較，FCB-H、FCB-M 組均能夠明顯抑制由博來霉素引起的HYP 升高的情況。此外，病理切片分析結果顯示，與模型組比較，給藥川貝母后大鼠肺組織藍色膠原纖維沉積明顯減少，表明川貝母可能是通過調控與細胞外基質沉積相關的代謝途徑來發揮抗肺纖維化作用。

綜上，川貝母粉能夠在一定程度上改善博來霉素誘導的大鼠肺纖維化，其作用機制可能是通過調控EMT 階段、抑制細胞外基質沉積等途徑來實現的。本研究基于空間代謝組學技術初步研究了川貝母抗肺纖維化的藥理作用機制，為川貝母抗肺纖維化研究提供了一些參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突