北柴胡根部的化學成分研究

賈云鵬，楊曉軍*，王 超，任火冰，楊海珍

1.延安大學化學與化工學院，陜西 延安 716000

2.陜西援康中藥產業發展有限公司，陜西 綏德 718000

3.陜西華西牧業有限責任公司，陜西 榆林 719000

柴胡為傘形科柴胡屬植物，其中北柴胡BupleurumchinenseDC.被列為藥用上品之一[1]。現代藥理研究證明柴胡具有清熱解毒、保肝利膽及其抗腫瘤等作用[2-3]。為進一步明確北柴胡中的保肝有效成分，本研究主要報道對其化學成分進行分離與結構鑒定，從北柴胡醇提取物中共分離得到19 個成分，分別鑒定為蛇床子素（isthole，1）、歐前胡素（imperatorin，2）、異補骨脂素（isopsoralen，3）、對甲氧基桂皮酸乙酯（4-methoxycinnamic acid ethyl ester，4）、反式-對羥基桂皮酸（trans-4-hydroxycinnamic acid，5）、反式-3′,4′-亞甲二氧基桂皮酸（trans-3′,4′-methylenedioxy cinnamic acid，6）、反式-阿魏酸（trans-ferulic acid，7）、傘形花內酯（umbelliferone，8）、七葉內酯（esculetin，9）、迷迭香酸（labiatenic acid，10）、紫花前胡苷（marmesinin，11）、紫丁香苷（syringoside，12）、5,7,3′,4′-四甲氧基黃酮（5,7,3′,4′-tetramethoxyflavone，13）、5,7,4′-三羥基-6-異戊烯基異黃酮（5,7,4′-trihydroxy-6-isopentenyl isoflavone，14）、芹菜素（apigenin，15）、木犀草素（luteolin，16）、槲皮素（quercetin，17）、牡荊素（vitexin，18）和金絲桃苷（hyperin，19）。其中化合物3～6、8、10～14 和18～19 首次從該植物中分離得到。初步評價了單體化合物對人肝癌HepG2 細胞的增殖抑制作用。

1 儀器與材料

X-4 型顯微熔點儀（上海科學儀器有限公司）；Bruker Micro TOF QII 質譜儀（瑞士Bruker 公司），JNM-ECZ400S 型核磁共振儀（日本JEOL 株式會社），TMS 為內標；RE-6000E 型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-D（Ⅲ）型水循環真空泵（鞏義市英峪高科儀器廠）；Sephadex LH-20（Pharmacia產品）；柱色譜硅膠（200～300、300～400 目，青島海洋化工廠）；硅膠GF254薄層板（50 mm×100 mm，0.20～0.25 mm，青島海洋化工廠）；硅膠GF254薄層板（100 mm×50 mm，0.20～0.25 mm，青島海洋化工廠）；四甲基偶氮唑鹽溶液（MTT）試劑（Sigma公司）；陽性對照品 10-羥基喜樹堿（批號H42022734，黃石飛云制藥有限公司）；人肝癌細胞株HepG2（上海美軒生物科技有限公司）。

北柴胡根于2020 年5 月采集自陜西省綏德縣，經延安大學生命科學院白重炎研究員鑒定為傘形科柴胡屬植物北柴胡B.chinenseDC.的根，標本（編號CH20200517）存放于延安大學天然產物化學實驗室。石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等普通試劑均為分析純（探索試劑平臺官網）。

2 方法

2.1 提取與分離

將所采集的北柴胡根洗凈曬干后粉碎，稱取2.0 kg 裝入滲濾筒中，室溫下用3 倍量95%乙醇提取3次，提取液減壓濃縮后得浸膏300 g。將浸膏用水分散后，依次用石油醚和醋酸乙酯各萃取5 次，每次所用溶劑的體積為800 mL，萃取液經減壓濃縮后得石油醚部位浸膏55 g、醋酸乙酯部位浸膏107 g。

石油醚部位浸膏經硅膠柱色譜（200～300 目）分離，用石油醚-二氯甲烷（20∶1～0∶20）梯度洗脫，TLC 檢測，主成分相同的合并后得到18 個餾分（Fr 1B～18B）。Fr 10B（1 050 mg），繼續硅膠柱色譜（200～300 目）分離，用二氯甲烷-醋酸乙酯（15∶1～0∶8）梯度洗脫，TLC 檢測，合并后得到4 個餾份（Fr 10B1～10B4）。Fr 10B1（102.1 mg）和Fr 10B2（87.4 mg）用石油醚反復重結晶分別得到化合物1（20.3 mg）和2（19.0 mg）；Fr 10B3（75.5 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱分離，洗脫劑為石油醚-二氯甲烷（1∶1），洗脫得到化合物3（10.5 mg）；Fr 10B4（51.1 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱分離，二氯甲烷洗脫得到化合物4（15.3 mg）。

醋酸乙酯部位浸膏經硅膠柱色譜分離（200～300 目），用石油醚-醋酸乙酯（15∶1～0∶15）梯度洗脫，TLC 檢測，主成分相同的合并后得到20 個餾份（Fr 1A～20A），然后繼續用醋酸乙酯-乙醇（15∶1～0∶15）梯度洗脫，又得到7 個餾份（Fr 21A～27A）。Fr 1A（120.1 mg）經硅膠（300～400目）柱色譜分離，用石油醚-醋酸乙酯（15∶1～0∶15）梯度洗脫，TLC 檢測，合并后得到4 個餾分（Fr 1A1～1A4）。Fr1A1 經醋酸乙酯重結晶得到化合物5（19.6 mg），Fr 1A2（60.7 mg）經硅膠（300～400目）柱色譜分離，用石油醚-醋酸乙酯-丙酮（150∶10∶5～50∶10∶5）梯度洗脫，得到化合物6（15.2 mg）。Fr 2A 經石油醚-丙酮中反復重結晶得到化合物7（35.0 mg）。Fr 4A（270.3 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用石油醚-醋酸乙酯-丙酮（200∶10∶5～40∶10∶5）梯度洗脫得到化合物8（26.5 mg）和9（13.3 mg）。Fr 7A（502.1 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用二氯甲烷-醋酸乙酯（14∶1～1∶14）梯度洗脫，TLC 檢測，合并后得到3 個餾份（Fr 7A1～7A3）。Fr 7A2（96.8 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用石油醚-醋酸乙酯-丙酮（110∶10∶5～30∶10∶5）梯度洗脫，得到化合物10（18.5 mg）；Fr 7A3（87.5 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱分離，甲醇作為洗脫劑，得到化合物11（10.5 mg）和12（14.3 mg）。Fr 16A（423.2 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用石油醚-丙酮（10∶1～0∶10）梯度洗脫，TLC 檢測，合并后得到4 個餾分（Fr 16A1～16A4）。Fr 16A1（31.2 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用二氯甲烷-甲醇（14∶1）進行洗脫純化，得到化合物13（15.1 mg）和14（13.8 mg）；Fr 16A2（79.1 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用氯仿-丙酮（10∶1～0∶10）梯度洗脫得到化合物15（32.3 mg）和16（31.2 mg）；Fr 16A3（46.7 mg）經Sephadex LH-20 凝膠柱分離，甲醇作為洗脫劑，分離純化得到化合物17（11.4 mg）和18（10.9 mg）；Fr 16A4（33.6 mg）經硅膠（300～400 目）柱色譜分離，用醋酸乙酯-甲醇（15∶1）洗脫，得到化合物19（18.2 mg）。

2.2 細胞毒活性[4]

取對數生長期的HepG2 細胞，配成細胞密度為1×104個/mL 的單細胞懸液，按1 000 個/孔接種于96 孔板中，每組設3 個復孔。待細胞貼壁后，每孔加入10 μL 不同濃度（600、300、150、75、37.5、18.75 μmol/L）的含藥樣品溶液，同時設對照組和陽性對照組（10-羥基喜樹堿）。置于37 ℃、5% CO2培養箱中孵育48 h 后，每孔加入10 μL MTT 溶液（5 mg/mL），繼續孵育4 h。除去上清液，加入100 μL DMSO 振蕩混勻，490 nm 波長下測吸光度（A）值，按以下公式計算細胞生長抑制率。

細胞生長抑制率＝(A對照－A給藥)/A對照

以樣品濃度為橫坐標（X），抑制率為縱坐標（Y），利用Origin 7.0 軟件繪制出濃度-抑制率曲線圖。根據回歸曲線方程計算出抑制率為50%時對應樣品的濃度即為半數抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值。

3 結果

3.1 結構鑒定

化合物1：白色棒晶（石油醚），mp 79.8～82.4 ℃。ESI-MSm/z: 245.31 [M＋H]+，分子式C15H16O3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.96 (1H,d,J= 10.8 Hz, H-4), 7.55 (1H, d,J= 9.6 Hz, H-5), 7.04(1H, d,J= 10.0 Hz, H-6), 6.26 (1H, d,J= 9.6 Hz, H-3), 5.11 (1H, dd,J= 14.4, 7.2 Hz, H-2′), 3.88 (3H, s, 7-OCH3), 3.38 (2H, dd,J= 14.4, 7.2 Hz, H-1′), 1.76 (3H,s, H-5′), 1.60 (1H, s, H-4′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 160.8 (C-2), 160.2 (C-7), 152.6 (C-9),145.3 (C-4), 132.4 (C-3′), 127.7 (C-5), 121.7 (C-2′),116.6 (C-8), 113.2 (C-10), 112.8 (C-3), 108.5 (C-6),56.8 (7-OCH3), 26.0 (C-4′), 22.0 (C-1′), 18.2 (C-5′)。以上數據與文獻報道基本一致[5-6]，故鑒定化合物1為蛇床子素。

化合物2：白色針晶（石油醚），mp 100.3～102.1 ℃。ESI-MSm/z: 299.39 [M＋H]+，分子式C19H22O3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.12 (1H,d,J= 13.2 Hz, H-2′), 7.67 (1H, d,J= 13.2 Hz, H-4),7.08 (1H, s, H-5), 6.42 (1H, d,J= 9.2 Hz, H-3′), 5.49(1H, dd,J= 14.8, 8.0 Hz, H-2″), 4.90 (2H, d,J= 6.0 Hz, H-1″), 1.68 (3H, s, H-4″), 1.63 (3H, s, H-5″)；13CNMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 160.3 (C-2), 152.2 (C-7), 148.4 (C-2′), 148.2 (C-7), 145.9 (C-4), 143.7 (C-9),139.6 (C-8), 131.0 (C-3″), 126.2 (C-6), 120.2 (C-2″),116.9 (C-10), 114.7 (C-3), 114.6 (C-5), 107.6 (C-3′),69.8 (C-1″), 26.0 (C-4″), 18.3 (C-5″)。以上數據與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物2 為歐前胡素。

化合物3：白色針晶（二氯甲烷），mp 129.6～130.9 ℃。ESI-MSm/z: 209.15 [M＋Na]+，分子式C11H6O3。1H-NMR (400 MHz, CD3Cl)δ: 7.81 (1H, d,J= 9.6 Hz, H-4), 7.68 (1H, d,J= 2.4 Hz, H-2′), 7.42(1H, d,J= 8.4 Hz, H-6), 7.39 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-8),7.14 (1H, d,J= 2.8 Hz, H-3′), 6.38 (1H, d,J= 9.6 Hz,H-3)；13C-NMR (100 MHz, CD3Cl)δ: 161.0 (C-2),157.4 (C-7), 148.6 (C-9), 146.0 (C-2′), 144.6 (C-4),123.9 (C-8), 117.0 (C-5), 114.2 (C-3), 113.6 (C-10),109.0 (C-6), 104.2 (C-3′)。以上數據與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物3 為異補骨脂素。

化合物4：無色晶體（二氯甲烷），mp 47.1～48.4 ℃。ESI-MSm/z: 229.23 [M＋Na]+，分子式C12H14O3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.66 (2H,dd,J= 6.8, 3.2 Hz, H-2′, 6′), 7.59 (1H, d,J= 16.0 Hz,H-3), 6.96 (2H, dd,J= 6.8, 3.2 Hz, H-3′, 5′), 6.47 (1H,d,J= 15.6 Hz, H-2), 4.16 (2H, q,J= 21.2 Hz, H-1′′),1.22 (3H, t,J= 14.4 Hz, H-2′′), 3.78 (3H, s, 4′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 167.0 (C-1), 161.6(C-4′), 144.7 (C-3), 130.7 (C-1′), 127.2 (C-2′, 6′), 115.9(C-2), 114.9 (C-3′, 5′), 60.3 (C-1′′), 55.8 (4′-OCH3),14.8 (C-2′′)。以上數據與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物4 為對甲氧基桂皮酸乙酯。

化合物5：白色粉末，mp 213.5～214.9 ℃。ESIMSm/z: 165.16 [M＋H]+，分子式C9H8O3。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.58 (1H, brs, H-1), 9.98,(1H, brs, 4′-OH), 7.55 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.49(1H, d,J= 14.4 Hz, H-3), 6.77 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.28 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-2)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 168.5 (C-1), 161.5 (C-4′), 147.7(C-3), 130.6 (C-2′, 6′), 125.8 (C-1′), 116.3 (C-3′, 5′),115.8 (C-2)。以上數據與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物5 為反式-4-羥基桂皮酸。

化合物6：白色粉末，mp 240.1～242.5 ℃。ESIMSm/z: 193.18 [M＋H]+, 分子式C10H8O4。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.49 (1H, brs, H-1), 7.49(1H, d,J= 16.0 Hz, H-3), 7.36 (1H, s, H-2′), 7.14 (1H,d,J= 7.6 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-5′), 6.38(1H, d,J= 16.0 Hz, H-2), 6.05 (2H, s,O-CH2-O)；13CNMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 168.4 (C-1), 149.6 (C-3′), 148.5 (C-4′), 144.4 (C-3), 129.2 (C-1′), 125.2 (C-6′), 117.6 (C-2), 109.0 (C-5′), 107.2 (C-6′), 102.1 (OCH2-O)。以上數據與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物6 為反式-3′,4′-亞甲二氧基桂皮酸。

化合物7：白色粉末，mp 170.2～172.8 ℃。ESIMSm/z: 217.18 [M＋H]+，分子式C10H10O4。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.16 (1H, brs, H-1), 9.56(1H, brs, 4′-OH), 7.47 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-3), 7.26(1H, s, H-2′), 7.07 (1H, dd,J= 6.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.77(1H, d,J= 7.6 Hz, H-5′), 6.35 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-2), 3.81(3H, s, -OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSOd6)δ: 168.6 (C-1), 149.6 (C-3′), 148.4 (C-4′), 145.1(C-3), 126.3 (C-1′), 123.4 (C-6′), 116.1(C-2), 116.0 (C-5′),111.6 (C-6′), 56.2 (-OCH3)。以上數據與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物7 為反式-阿魏酸。

總之，音樂是情感藝術，“樂”由情起，這說明音樂由情感引起。情感教育在小學音樂教學中無處不在。在小學音樂教學實踐中我們應以情感教育為核心，牢牢地把握情感教育原則，不時點燃學生的情感火花，使情感教育在小學音樂教學中真正實現其教育功能，在素質教育中發揮其應有的作用。

化合物8：淡黃色片晶（丙酮），mp 224.6～225.8 ℃。ESI-MSm/z: 185.13 [M＋Na]+，分子式C9H6O3。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 10.58 (1H,brs, 7-OH), 7.92 (1H, d,J= 9.2 Hz, H-4), 7.51 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-5), 6.73 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-6), 6.67(1H, s, H-8), 6.19 (1H, d,J= 9.2 Hz, H-3)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ: 161.8 (C-2), 161.0 (C-7), 156.0(C-9), 145.1(C-4), 130.3 (C-5), 113.7 (C-6), 111.9 (C-3), 111.8 (C-10), 102.7 (C-8)。以上數據與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物8 為傘形花內酯。

化合物9：淡黃色針晶（丙酮），mp 271.8～273.9 ℃。ESI-MSm/z: 179.15 [M＋H]+，分子式C9H6O4。1H- NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.83 (1H,d,J= 9.2 Hz, H-4), 6.93 (1H, s, H-5), 6.69 (1H, s, H-8), 6.13 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 161.3 (C-2), 150.9 (C-7), 149.0 (C-9),145.0 (C-4), 143.4 (C-4), 112.8 (C-5), 112.0 (C-3),111.2 (C-10), 103.1 (C-8)。以上數據與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物9 為七葉內酯。

化合物10：淡黃色晶體（丙酮），mp 170.1～173.4 ℃。ESI-MSm/z: 383.29 [M＋Na]+，分子式C18H16O8。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.91 (1H,d,J= 16.0 Hz, H-3), 7.43 (1H, s, H-2′), 7.32 (1H, s, H-2?), 7.16 (2H, dd,J= 8.4, 2.8 Hz, H-6′, 6?), 7.04 (2H,dd,J= 8.0, 2.4 Hz, H-5′, 5?), 6.65 (1H, d,J= 16.0 Hz,H-2), 5.48 (1H, dd,J=13.2, 3.4 Hz, H-2′′), 3.71 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-3a′′), 3.71 (1H, d,J= 17.2 Hz, H-3b′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 177.0 (C-1′′), 168.4(C-1), 148.7 (C-3), 146.1 (C-4′, 4?), 145.9 (C-3′, 3?),145.3 (C-3), 144.1 (C-4?), 130.5 (C-1?), 127.3 (C-1′),122.2 (C-6?), 121.0 (C-6′), 116.8 (C-5′), 115.7 (C-5?),115.5 (C-2), 114.9 (C-2?), 114.4 (C-2′), 77.0 (C-2′′),38.1 (C-3′′)。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物10 為迷迭香酸。

化合物11：白色晶體（甲醇），mp 216.8～218.3 ℃。ESI-MSm/z: 409.41 [M＋H]+，分子式C20H24O9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.93 (1H,d,J= 10.0 Hz, H-4), 7.48 (1H, s, H-5), 6.82 (1H, s, H-8), 6.21 (1H, d,J= 9.2 Hz, H-3), 4.87 (1H, dd,J= 8.4,4.4 Hz, H-2′), 4.36 (1H, d,J= 7.2 Hz, β-D-Glu-H-1),3.64, 3.33 (2H, d,J= 12.8 Hz, β-D-Glu-H-6), 3.25 (1H,d,J= 8.0 Hz, H-3′), 3.11 (1H, dt,J= 7.6 Hz, β-D-Glu-H-5), 3.08 (1H, dt,J= 7.6 Hz, β-D-Glu-H-2), 2.99 (1H,dd,J= 9.2 Hz, β-D-Glu-H-4), 2.87 (1H, dt,J= 7.6 Hz,β-D-Glu-H-3), 1.23 (3H, s, H-5′), 1.08 (3H, s, H-6′)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 163.6 (C-7), 161.0(C-2), 155.5 (C-9), 145.2 (C-4), 126.0 (C-6), 124.5 (C-5), 112.8 (C-3), 111.9 (C-10), 97.7 (β-D-Glu-C-1), 97.4(C-8), 90.6 (C-2′), 77.6 (C-4′), 77.4 (β-D-Glu-C-5),77.2 (β-D-Glu-C-2), 74.0 (β-D-Glu-C-3), 70.8 (β-DGlu-C-4), 61.7 (β-D-Glu-C-6), 29,7 (C-3′), 23.7 (C-5′),21.2 (C-6′)。以上數據與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物11 為紫花前胡苷。

化合物12：白色粉末，mp 191.2～192.5 ℃。ESI-MSm/z: 373.37 [M＋H]+，分子式C17H24O9。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 6.72 (2H, s, H-3, 5),6.46 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-1′), 6.35 (1H, dt,J= 10.0,5.0 Hz, H-2′), 4.91 (1H, d,J= 7.6 Hz, β-D-Glu-H-1),4.17 (2H, d,J= 5.0 Hz, H-3′), 3.76 (6H, s, 2, 6-OCH3),3.42 (2H, d,J= 9.6 Hz, β-D-Glu-H-6), 3.35 (1H, dt,J= 7.6 Hz, β-D-Glu-H-5), 3.16～3.20 (3H, m, β-DGlu-H-2～4)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ:152.8 (C-2, 6), 133.9 (C-1), 132.7 (C-4), 130.3 (C-1′),128.5 (C-2′), 104.5 (C-3, 5), 102.6 (β-D-Glu-C-1), 77.3(β-D-Glu-C-5), 76.6 (β-D-Glu-C-3), 74.3 (β-D-Glu-C-2), 70.0 (β-D-Glu-C-4), 61.0 (β-D-Glu-C-6), 61.6 (C-3′), 56.4 (2, 6-OCH3)。以上數據與文獻報道基本一致[17-18]，故鑒定化合物12 為紫丁香苷。

化合物13：棕色針晶（甲醇），mp 191.3～192.6 ℃。ESI-MSm/z: 343.35 [M＋H]+，分子式C19H18O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.63 (1H,dd,J= 8.8, 3.0 Hz, H-6′), 7.52 (1H, d,J= 3.0 Hz, H-2′), 7.10 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-5′), 6.87 (1H, d,J= 3.0 Hz, H-6), 6.77 (1H, s, H-3), 6.49 (1H, d,J= 3.0 Hz, H-8), 3.89 (3H, s, 3′-OCH3), 3.87 (3H, s, 5-OCH3), 3.83(3H, s, 4′-OCH3), 3.82 (3H, s, 7-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 176.3 (C-4), 164.2 (C-7), 160.7 (C-2), 160.2 ( C-5), 159.7 (C-9), 152.1 (C-3′), 149.5 (C-4′), 123.6 (C-1′), 119.8 (C-6′), 112.1 (C-5′), 109.5 (C-2′), 108.8 (C-10), 107.6 (C-3), 96.7 (C-8), 93.9 (C-6),56.6 (3′-OCH3), 56.5 (5-OCH3), 56.4 (4′-OCH3), 56.2(7-OCH3)。以上數據與文獻報道基本一致[19]，故鑒定化合物13 為5,7,3′,4′-四甲氧基黃酮。

化合物15：淡黃色粉末，mp 346.8～348.1 ℃。ESI-MSm/z: 271.25 [M＋H]+，分子式C15H10O5。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.96 (1H, brs, 5-OH),10.84 (1H, brs, 4′-OH), 10.37 (1H, brs, 7-OH), 7.92(2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.90 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.78 (1H, s, H-3), 6.48 (1H, s, H-8), 6.18 (1H, s,H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ:182.3 (C-4),164.7 (C-2), 164.3 (C-7), 162.0 (C-9), 161.7 (C-5),157.8 (C-4′), 129.0 (C-2′, 6′), 121.7(C-1′), 116.5 (C-3′,5′), 104.2 (C-3), 103.3 (C-10), 99.3 (C-6), 94.5(C-8)。以上數據與文獻報道基本一致[22]，故鑒定化合物15為芹菜素。

化合物16：棕色粉末，mp 322.6～323.7 ℃。ESI-MSm/z: 287.26 [M＋H]+，分子式C15H10O6。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.94 (1H, brs, 5-OH),10.82 (1H, brs, 7-OH), 9.91 (1H, brs, 4′-OH), 9.38 (1H,brs, 3′-OH), 7.39(1H, dd,J= 8.0, 2.4 Hz, H-6′), 7.35(1H, d,J= 2.4 Hz, H-2′), 6.85 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′),6.64(1H, s, H-3), 6.40 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.15(1H, d,J= 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSOd6)δ: 182.2 (C-4), 164.6 (C-2), 164.4 (C-7), 162.0 (C-5), 157.8 (C-9), 150.2 (C-4′), 146.2 (C-3′), 122.0 (C-1′),119.5 (C-6′), 116.5 (C-5′), 113.9 (C-2′), 104.2 (C-10),103.4 (C-3), 99.3 (C-6), 94.4 (C-8)。以上數據與文獻報道基本一致[23]，故鑒定化合物16 為木犀草素。

化合物17：黃色粉末，mp 312.4～313.7 ℃。ESI-MSm/z: 303.27 [M＋H]+，分子式C15H10O7。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.51 (1H, brs, 5-OH), 10.73 (1H, brs, 7-OH), 9.65 (1H, brs, 3′-OH),9.39 (1H, brs, 3-OH), 9.34 (1H, brs, 4′-OH), 7.74(1H, d,J= 2.4 Hz, H-2′), 7.63 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.84 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.36 (1H,d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.14 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 176.3 (C-4),165.5 (C-7), 161.2 (C-9), 156.6 (C-5), 148.2 (C-4′),147.3 (C-2), 145.6 (C-3′), 136.3 (C-3), 122.5 (C-1′),120.5 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.5(C-2′), 103.5 (C-10),98.7 (C-6), 93.9 (C-8)。以上數據與文獻報道基本一致[24-25]，故鑒定化合物17 為槲皮素。

化合物18：黃色粉末，mp 134.3～135.7 ℃。ESI-MSm/z: 462.38 [M＋Na]+，分子式C21H20O10。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 13.17 (1H, brs, 5-OH), 10.91 (1H, brs, 7-OH), 10.36 (1H, brs, 4′-OH),8.01 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.87 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.78 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-3), 6.26 (1H,d,J= 2.0 Hz, H-6), 4.69 (1H, d,J= 11.6 Hz, H-1″),3.82 (1H, d,J= 10.5 Hz, H-6″a), 3.76 (1H, d,J= 3.6 Hz, H-6″b), 3.15～3.50 (4H, m, H-2″～5″)；13C-NMR(100 MHz, DMSO-d6)δ: 182.6 (C-4), 164.4 (C-2),162.7 (C-7), 161.1 (C-4′), 160.9 (C-5), 156.5 (C-9),129.5 (C-2′, 6′), 122.1 (C-1′), 116.3 (C-3′, 5′), 105.1 (C-8), 104.5 (C-10), 102.9 (C-3), 98.7 (C-6), 82.4 (C-5″),79.1 (C-1″), 73.9 (C-2″), 71.3 (C-3″), 71.0 (C-4″), 61.8(C-6″)。以上數據與文獻報道基本一致[26]，故鑒定化合物18 為牡荊素。

化合物19：黃色粉末，mp 333.1～334.5 ℃。ESI-MSm/z: 487.37 [M＋Na]+，分子式C21H20O12。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 12.63 (1H, brs, 5-OH), 10.81 (1H, brs, 7-OH), 9.72 (1H, brs, 3′-OH), 9.14(1H, brs, 4′-OH), 7.67 (1H, dd,J= 8.8, 2.2 Hz, H-6′),7.51 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-2′), 6.79 (1H, d,J= 8.8 Hz,H-5′), 6.39 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 5.36 (1H, d,J= 7.6 Hz, β-D-Gal-H-1),5.15 (1H, d,J= 4.8 Hz, β-D-Gal-H-1a), 4.88 (1H, d,J= 5.0 Hz, β-D-Gal-H-1b), 3.29～3.65 (4H, m, β-DGal-H-2″～5″)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ:178.0 (C-4), 164.7 (C-7), 161.7 (C-5), 156.8 (C-9),156.7 (C-2), 149.0 (C-4′), 145.4 (C-3′), 133.9 (C-3),122.5 (C-6′), 121.6 (C-1′), 116.4 (C-2′), 115.7 (C-5′),104.4 (C-10), 102.2 (β-D-Gal-C-1), 98.7 (C-6), 94.0(C-8), 76.4 (β-D-Gal-C-5), 73.7 (β-D-Gal-C-3), 71.7(β-D-Gal-C-2), 68.4 (β-D-Gal-C-4), 60.6 (β-D-Gal-C-6)。以上數據與文獻報道基本一致[27]，故鑒定化合物19 為金絲桃苷。

3.2 活性測試結果

通過對柴胡中所分離得到的19 個化合物進行細胞毒活性測試，測試結果見表1，結果表明19 個化合物均有抑制人肝癌HepG2 細胞的增殖作用，其中化合物2、8～11、16 和18 對HepG2 細胞具有顯著的細胞毒活性，IC50＜50 μmol/L，特別值得一提的是化合物8 對HepG2 的細胞毒活性與臨床用藥10-羥基喜樹堿注射液相當，因此，就該化合物的生物活性及其作用機制有待于進一步深入研究，為其在保肝方面的應用提供科學依據。

表1 化合物1～19 對人肝癌細胞HepG2 的細胞毒活性Table 1 Cytotoxicity of compounds 1—19 against HepG2

4 討論

本研究主要報道了從北柴胡根部中分離得到的兩類化合物，其中1～12 為苯丙素類化合物，13～19 為黃酮類化合物；化合物3～6、8、10～14 和18～19 為首次從該植物中分離得到。據文獻報道，香豆素和黃酮類化合物均具有對多種腫瘤細胞的增殖有抑制作用[28-29]。本研究活性測試結果也證明了這一結論。

另外，本實驗活性篩選結果還發現，香豆素類化合物的C-6、C-7、C-8 位取代基的變化對抑制人肝癌細胞HepG2 的增殖有著密切的關系，其中C-7位上有羥基取代基時活性最強（化合物8 的IC50為6.91 μmol/L），其次是C-6、C-7 位上有取代基，當取代基的位置在C-7、C-8 位上時活性進一步減弱。這一發現也與已有對香豆素構效分析結果基本一致[30-31]。綜上研究結果不僅豐富了北柴胡的植物化學信息及化合物的結構類型，同時通過初步分析了香豆素的構效關系，在一定程度上可為該類成分的結構修飾和抗腫瘤藥物的研究提供參考，為北柴胡的進一步開發利用奠定基礎。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突