駱駝刺化學(xué)成分及其抗宮頸癌細(xì)胞活性研究

鮑 爽，宋海龍，熱依蘭木·買賽地，凱撒·蘇來曼，馬國需,4，石磊嶺，張 晶，韓莉莉*

1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118

2.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 婦科，烏魯木齊 830001

3.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002

4.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193

駱駝刺AlhagisparsifoliaShap 為豆科（Leguminosae）蝶形花亞科（Papilionoideae）駱駝刺屬AlhagiGagneb 的半灌木，7、8 月份果成熟時(shí)采集地上部分，曬干，是維吾爾醫(yī)用傳統(tǒng)藥材[1-2]。其性溫，味甘、酸，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、澀腸止痛、止渴、除煩等功效，在民間常用于治療腹痛、腹瀉、痢疾等癥[3-4]。駱駝刺屬植物全世界共有7 種，我國有3種，包括吉爾吉斯駱駝刺、駱駝刺和疏葉駱駝刺，主要集中在南疆塔木河、孔雀河、東疆吐魯番、哈密和七角井盆地，主產(chǎn)區(qū)是新疆。駱駝刺含有黃酮類、木脂素類、生物堿類等化學(xué)成分，具有抗炎抗菌、抗腫瘤、治療腹瀉等生物活性，常被應(yīng)用于維藥、中成藥[3,5]。為探索駱駝刺的物質(zhì)基礎(chǔ)，以新疆產(chǎn)駱駝刺地上部分為實(shí)驗(yàn)材料，從其95%乙醇提取物二氯甲烷部位中分離得到12 個(gè)化合物，分別鑒定為 (2S,3S)-methylhexahydro-3H-pyrrolo[NH,2-a]imidazol-1-one（1）、5,6-二羥基-7-甲氧基黃酮（neglectein，2）、漢黃芩素（wogonin，3）、2-亞乙基-3-甲基琥珀酸（2-ethylidene-3-methyl-butanedioic acid，4）、3,4′-二羥基-3′-甲氧基苯丙酮（3,4′-dihydroxy-3′-methoxyphenylacetone，5）、calendin（6）、N-苯乙基乙酰胺（N-phenylethyl acetamide，7）、對甲氧基苯甲酸（p-methoxybenzoic acid，8）、黃芩新素Ⅱ（skullcaflavone Ⅱ，9）、4-羥基苯乙醇（4-hydroxyphenethyl alcohol，10）、3′-甲氧基大豆苷元（3′-methoxydaidzein，11）、松脂素（pinoresinol，12）。其中，化合物1 為新化合物，命名為駱駝刺堿（alhagine），化合物2～11 為首次從該植物中分離得到；活性篩選結(jié)果表明，化合物1、3、9、11 具有抗宮頸癌細(xì)胞活性。

1 儀器與材料

R-1005 型雙回流旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（方圓儀器科技有限公司）；Bruker AvanceIII600 型NMR（德國布魯克公司）；KH-700DB 臺式數(shù)控超聲波清洗器（蘇州安源儀器有限公司）；BYLABUVIII 紫外燈（諾雷信達(dá)科技有限公司）；DLSB-5/10 低溫冷卻液循環(huán)泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；半制備型液相色譜儀（硅儀生化科技有限公司）；RY C18-A 型半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，北京中科恩源科技有限公司）；柱色譜硅膠（創(chuàng)益化工有限公司）；薄層色譜硅膠HF254（永德茂科技有限公司）；Rp-C18（北京譜朋科技有限公司）；純凈水（福萬家純凈水有限公司）。

人宮頸癌HeLa 細(xì)胞（中國科學(xué)院上海細(xì)胞研究所）；5-氟尿嘧啶（5-FU，Adamas，批號P1378516）。

藥材-駱駝刺2022 年8 月采自新疆吐魯番高昌區(qū)園藝鎮(zhèn)，經(jīng)新疆中藥民族藥研究所王果平研究員鑒定為豆科蝶形花亞科駱駝刺屬植物駱駝刺A.sparsifoliaShap，憑證標(biāo)本號（652101190529002 LY）保存于新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所標(biāo)本室。

2 提取與分離

取駱駝刺干燥地上部分100 kg，陰干粉碎后，用10 倍量95%乙醇加熱回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，減壓濃縮干燥后得到總浸膏。總浸膏加水混懸后，用等體積石油醚進(jìn)行萃取，得到石油醚部位90 L 和水層。將水層用HCl 調(diào)至pH 值為1～2，再用等體積的進(jìn)行萃取，得到醋酸乙酯部位39 L 和水層。再將水層用NaOH 調(diào)至pH 值為9～10 堿性，用等體積的二氯甲烷進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷部位52 L（43 g）。

取二氯甲烷部位43 g 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜分離，依次用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，合并后得到10 個(gè)組分Fr.1～10。Fr.1（7.1 g）經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯（10∶1～5∶1）以及二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脫，析出黃色針狀結(jié)晶化合物2（3.1 mg），合并相似洗脫液后得到7 個(gè)組分Fr.1-1～1-7。Fr.1-2（673.6 mg）經(jīng)硅膠（300～400 目）柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯（10∶1）以及二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脫，合并相似洗脫液后得到7 個(gè)組分Fr.1-2-1～1-2-7。Fr.1-2-3（317.5 mg）經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯（10∶1～5∶1）以及二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脫，合并相似洗脫液后得到5 個(gè)組分Fr.1-2-3-1～1-2-3-5。Fr.1-2-3-3（80.2 mg）刮板得到化合物3（2.7 mg）；Fr.2（2.9 g）經(jīng)硅膠（300～400 目）柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，合并相似洗脫液后得到4 個(gè)組分Fr.2-1～2-4。Fr.2-1（1.6 g）經(jīng)ODS 柱色譜分離，甲醇-水（30∶70～100∶0）梯度洗脫，得到7 個(gè)組分Fr.2-1-1～2-1-7。Fr.2-1-1（481.2 mg）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水20∶80）分離純化得化合物4（6.8 mg）；Fr.2-1-2（451.6 mg）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水20∶80）分離純化得化合物5（2.5 mg）、6（7.0 mg）和7（3.6 mg）；Fr.2-1-3（174.9 mg）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水45∶55）分離純化得化合物12（1.3 mg）；Fr.2-1-4（151.1 mg）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水55∶45）分離純化得化合物8（2.5 mg）和9（7.2 mg）；Fr.3（3.2 g）經(jīng)ODS 柱色譜分離，甲醇-水（30∶70～100∶0）梯度洗脫，得到6 個(gè)組分Fr.3-1～3-6，F(xiàn)r.3-1（2.3 g）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水30∶70）分離純化得化合物10（2.6 mg）；Fr.3-2（352.3 mg）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水50∶50）分離純化得化合物11（5.3 mg）；Fr.5（1.4 g）經(jīng)半制備液相色譜（甲醇-水20∶80）分離純化得化合物1（5.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：HR-ESI-MSm/z: 141.102 1 [M＋H]+，分子式為C7H12N2O，不飽和度為3。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) 譜（表1）中包括1 個(gè)活潑氫信號δ8.17 (1H, s,N-H), 2 個(gè)次甲基氫信號 [δ4.16 (1H,ddd,J= 9.0, 7.1, 1.3 Hz, H-3), 4.08 (1H, m, H-2)], 3 個(gè)亞甲基氫信號 [δ3.36 (2H, t,J= 4.0 Hz, H-6), 2.11(1H, m, H-4), 1.84 (3H, m, H-4, H-5)] 和1 個(gè)甲基氫信號δ1.21 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-7)。13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) 結(jié)合HMBC 和HSQC 譜共解析出7個(gè)碳信號，其中包括1個(gè)內(nèi)酰胺羰基碳信號δ166.6(C-1), 5 個(gè)脂肪碳信號 [δ58.7 (C-3), 50.1 (C-2), 44.9(C-6), 27.7 (C-4), 22.4 (C-5)]，1 個(gè)甲基碳信號δ15.3(C-7)。

表1 化合物1 的核磁數(shù)據(jù) (600/150 MHz, DMSO-d6)Table 1 NMR data for compound 1 (600/150 MHz,DMSO-d6)

1H-1H COSY 譜（圖1）中，H-2 與N-H，H-3與N-H 相關(guān)，證實(shí)存在C-2-NH-C-3 連接片段，結(jié)合HMBC 譜中H-2 與C-1 相關(guān)，N-H 與C-1/C-2/C-3 相關(guān)，結(jié)合以上信息確定該化合物含有結(jié)構(gòu)片段1-氧取代吡咯烷酮。HMBC 譜中，H-7 與C-1/C-2 相關(guān)，1H-1H COSY 譜中，H-7 與H-2 相關(guān)，確定在2號位存在甲基。同理，1H-1H COSY 譜中，H-3 與H-4，H-4 與H-5 以及H-5 與H-6 相關(guān)，證實(shí)存在C-3-C-4-C-5-C-6 連接片段，結(jié)合HMBC 譜中，H-6 與C-1/C-3/C-4/C-5 相關(guān)，H-4 與C-3/C-5/C-6 相關(guān)，由此推得化合物1 的平面結(jié)構(gòu)（圖1）。

圖1 化合物1 的結(jié)構(gòu)和主要的1H-1H COSY ()、HMBC ()、NOESY () 相關(guān)Fig.1 Structure and main 1H-1H COSY (), HMBC() and NOESY() correlations of compound 1

從NOESY 譜中提出了化合物1 的相對構(gòu)型（圖1）。在NOESY 譜圖上觀察到H-2 與H-3 的NOESY遠(yuǎn)程相關(guān)信號，表明H-2 和H-3 處于同一平面。為了進(jìn)一步確定其絕對構(gòu)型，采用計(jì)算ECD 與實(shí)驗(yàn)ECD 相結(jié)合的方法來確定化合物1 的絕對構(gòu)型。首先對化合物1 進(jìn)行構(gòu)象搜索、優(yōu)化、激發(fā)態(tài)展寬、波爾茲曼擬合后，其計(jì)算得到的構(gòu)型為2S,3S的ECD 曲線與實(shí)驗(yàn)的ECD 曲線顯示出很好的吻合性（圖2），從而確定了1 的絕對構(gòu)型為2S,3S。綜上，化合物1 鑒定為 (2S,3S)-methylhexahydro-3H-pyrrolo[NH,2-a]imidazol-1-one，命名為駱駝刺堿。

圖2 化合物1 的實(shí)驗(yàn)ECD 和計(jì)算ECD 圖譜Fig.2 Experimental and calculated ECD spectra of compound 1

化合物2：黃色粉末，ESI-MSm/z: 285.08 [M＋H]+，分子式為C16H12O5。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 12.94 (1H, s, 5-OH), 10.85 (1H, s, 6-OH), 8.08(2H, dd,J= 7.0, 1.6 Hz, H-2′, 6′), 7.59 (3H, m, H-3′～5′), 6.99 (1H, s, H-3), 6.64 (1H, s, H-8), 3.75 (3H,s, 7-OMe)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 182.3(C-4), 163.3 (C-7), 157.7 (C-2), 152.8 (C-5), 152.6 (C-9), 132.1 (C-1′), 131.5 (C-4′), 130.8 (C-6), 129.2 (C-3′,5′), 126.5 (C-2′, 6′), 104.7 (C-10), 104.4 (C-3), 94.5 (C-8),60.0 (7-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[6]，故鑒定化合物2 為5,6-二羥基-7-甲氧基黃酮。

化合物3：黃色顆粒狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MSm/z:285.08 [M＋H]+，分子式為C16H12O5。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 12.52 (1H, s, 5-OH), 8.08 (2H, m,H-2′, H-6′), 7.62 (3H, m, H-3′～5′), 7.00 (1H, s, H-3),6.29 (1H, s, H-6), 3.85 (3H, s, 8-OMe)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 182.0 (C-4), 162.9 (C-2), 156.3 (C-5), 149.6 (C-9), 132.1 (C-1′), 130.9 (C-4′), 129.3 (C-3′,5′), 127.9 (C-8), 126.3 (C-2′, 6′), 105.0 (C-3), 103.6 (C-10), 99.3 (C-6), 61.0 (8-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[7]，故鑒定化合物3 為漢黃芩素。

化合物4：黃色固體，ESI-MSm/z: 159.07 [M＋H]+，分子式為C7H10O4。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 7.25 (1H, m, 1-OH), 6.61 (1H, dd,J= 7.3, 2.2 Hz,4-OH), 3.36 (1H, s, H-5), 2.12 (1H, m, H-3), 1.84 (3H,dd,J= 7.3, 1.3 Hz, H-6), 1.27 (3H, d,J= 7.5 Hz, H-7)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 179.4 (C-4),170.2 (C-1), 133.8 (C-2), 132.7 (C-5), 37.7 (C-3), 15.1(C-7), 14.4 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[8]，故鑒定化合物4 為2-亞乙基-3-甲基琥珀酸。

化合物5：白色粉末，ESI-MSm/z: 197.08 [M＋H]+，分子式為C10H12O4。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 7.50 (1H, dt,J= 8.3, 1.4 Hz, H-6′), 7.43 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.85 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-5′), 3.81(3H, s, 3′-OMe), 3.74 (2H, m, H-3), 3.04 (2H, t,J= 6.4 Hz, H-2)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 197.2 (C-1), 152.0 (C-4′), 147.9 (C-3′), 128.7 (C-1′), 123.2 (C-6′),114.9 (C-2′), 111.0 (C-5′), 57.3 (C-3), 55.6 (3′-OMe), 40.9(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定化合物5 為3,4′-二羥基-3′-甲氧基苯丙酮。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm/z: 197.12 [M＋H]+，分子式為C11H16O3。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 5.78 (1H, s, H-3), 4.08 (1H, t,J= 3.5 Hz, H-6),2.29 (1H, dt,J= 13.3, 2.6 Hz, H-7a), 1.86 (1H, dt,J=14.1, 2.6 Hz, H-5), 1.66 (3H, d,J= 0.8 Hz, 7a-Me),1.62 (1H, dd,J= 13.3, 4.0 Hz, H-7b), 1.41 (1H, dd,J=14.1, 3.7 Hz, H-5), 1.37 (3H, s, H-9), 1.19 (3H, s, H-10)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 183.1 (C-3a),171.1 (C-2), 112.2 (C-3), 86.6 (C-7a), 64.9 (C-6), 46.6(C-5), 45.3 (C-7), 35.7 (C-4), 30.5 (C-8), 26.9 (C-10),26.2 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定化合物6 為calendin。

化合物7：無色膠狀物，ESI-MSm/z: 164.11[M＋H]+，分子式為C10H13NO。1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ: 7.94 (1H, t,J= 5.8 Hz, N-H), 7.29 (2H,m, H-2′, 6′), 7.20 (3H, m, H-3′～5′), 3.23 (2H, ddd,J=8.5, 7.4, 5.8 Hz, H-3), 2.69 (2H, t,J= 7.5 Hz, H-4), 1.77(3H, s, H-1)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 169.1(C-2), 139.6 (C-1′), 128.7 (C-3′, C-5′), 128.4 (C-2′, C-6′), 126.1(C-4′), 40.3 (C-3), 35.3 (C-4), 22.7 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[10]，故鑒定化合物7 為N-苯乙基乙酰胺。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm/z: 153.05 [M＋H]+，分子式為C8H8O3。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 7.50 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2, 6), 6.99 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3, 5), 3.78 (3H, s, 4-OMe)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 174.6 (C-7), 158.9 (C-1), 130.1 (C-2, 6), 124.3 (C-4), 113.6 (C-3, 5), 55.2 (4-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[11]，故鑒定化合物8 為對甲氧基苯甲酸。

化合物9：黃色片狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MSm/z:175.11 [M＋H]+，分子式為C19H18O8。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 12.64 (1H, s, 5-OH), 10.33 (1H, s,2′-OH), 7.32 (1H, t,J= 8.3 Hz, H-4′), 6.62 (2H, dd,J=8.5, 1.5 Hz, H-3′, 5′), 6.34 (1H, s, H-3), 4.00, 3.82, 3.79,3.75 (3H×4, s, 6, 7, 8, 6′-OMe)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ: 182.6 (C-4), 162.5 (C-2), 158.3 (C-7),156.8 (C-5), 152.6 (C-6′), 148.6 (C-9), 146.3 (C-2′),135.8 (C-6), 132.6 (C-8, 4′), 112.0 (C-3′), 108.9 (C-1′),108.8 (C-3), 106.3 (C-10), 102.2 (C-5′), 61.8, 61.6,60.7, 55.9 (6, 7, 8, 6′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[12]，故鑒定化合物9 為2′,5-二羥基-6,6′,7,8-四甲氧基黃酮，即黃芩新素Ⅱ。

化合物10：無色針晶（甲醇），ESI-MSm/z:139.08 [M＋H]+，分子式為C8H10O2。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 6.98 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2, 6),6.65 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3, 5), 3.50 (2H, td,J= 7.3,4.9 Hz, H-8), 2.59 (2H, t,J= 7.3 Hz, H-7)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ: 155.5 (C-4), 129.7 (C-2, C-6),129.5 (C-1), 115.0 (C-3, 5), 62.7 (C-8), 40.1 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[13]，故鑒定化合物10 為4-羥基苯乙醇。

化合物11：黃色粉末，ESI-MSm/z: 285.08 [M＋H]+，分子式為C16H12O5。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 8.24 (1H, s, H-2), 7.90 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-5),7.04 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.95 (1H, d,J= 8.5 Hz,H-6), 6.93 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-8), 6.87 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-6′), 6.78 (1H, s, H-5′), 3.78 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 174.5 (C-4), 157.6(C-7), 154.8 (C-9), 152.9 (C-2), 147.5 (C-3′), 146.0 (C-4′), 127.1 (C-5), 124.9 (C-3), 123.2 (C-1′), 120.9 (C-6′),120.4 (C-10), 119.7 (C-5′), 116.5 (C-6), 111.9 (C-2′),102.1 (C-8), 55.7 (3′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[14]，故鑒定化合物11 為3′-甲氧基大豆苷元。

化合物12：白色固體，ESI-MSm/z: 359.15 [M＋H]+，分子式為C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, DMSOd6)δ: 6.88 (2H, d,J= 1.9 Hz, H-2, 2′), 6.75 (2H, dd,J= 8.1, 1.9 Hz, H-6, 6′), 6.72 (2H, d,J= 8.1 Hz, H-5,5′), 4.60 (2H, d,J= 4.1 Hz, H-7, 7′), 4.11 (1H, dd,J=8.9, 6.8 Hz, H-9a), 3.79 (1H, m, H-9′a), 3.76 (6H, s, 3,3′-OCH3), 3.71 (2H, dd,J= 9.2, 3.3 Hz, H-9b, 9′b), 3.03(2H, d,J= 5.8 Hz, H-8, 8′)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ: 147.5 (C-3, 3′), 145.9 (C-4, 4′), 132.2 (C-1, 1′), 118.7 (C-6, 6′), 115.1 (C-5, 5′), 110.4 (C-2, 2′),85.2 (C-7, 7′), 70.9 (C-9, 9′), 55.6 (3, 3′-OCH3), 53.6 (C-8, 8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道波譜數(shù)據(jù)基本一致[15]，故鑒定化合物12 為松脂素。

4 活性篩選

采用MTT 法測試化合物1～12 對宮頸癌細(xì)胞株HeLa 的體外抑制作用，以5-FU 為陽性對照藥。取對數(shù)生長期的HeLa 細(xì)胞株，胰酶消化，稀釋成濃度6×104個(gè)/mL 的單細(xì)胞懸液，各濃度均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，以每孔100 μL 置于96 孔板中，在37.0 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，分別加入配制好的化合物1～12 和5-FU，培養(yǎng)24 h，每孔加入10 μL MTT 試劑染色，孵育5.0 h，棄去上層培養(yǎng)液，每孔加入100 μL DMSO，輕輕搖動(dòng)均勻，用酶標(biāo)儀檢測570 nm 波長下的吸光度（A）值，根據(jù)公式 [抑制率＝(A對照－A實(shí)驗(yàn))/(A對照－A空白)] 計(jì)算細(xì)胞抑制率，采用SPSS 22.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算各化合物的半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值。結(jié)果表明，化合物1、3、9、11 對HeLa 細(xì)胞株具有較強(qiáng)的體外抑制作用，其IC50值分別為20.20、35.25、49.11、48.73 μmol/L，見表2。

表2 化合物1～12 對HeLa 細(xì)胞的抑制作用Table 2 Inhibitory effects of compounds 1—12 on HeLa cells

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對駱駝刺地上部分進(jìn)行化學(xué)成分研究，從乙醇提取物二氯甲烷部位中分離得到12 個(gè)化合物，包括2 個(gè)生物堿類化合物、4 個(gè)黃酮類化合物、2 個(gè)苯丙素類化合物、1 個(gè)降碳倍半萜類化合物、3個(gè)酚酸類化合物。其中，化合物1 為新化合物，且化合物1～11 為首次從該植物中分離得到。采用MTT 法對所分得化合物進(jìn)行抗宮頸癌細(xì)胞活性篩選，結(jié)果表明，化合物1、3、9、11 對HeLa 細(xì)胞具有抑制作用。通過分析發(fā)現(xiàn)化合物3、9、11 具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，且骨架均由C6-C3-C6構(gòu)成，可以推測駱駝刺化學(xué)成分中黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。因?yàn)榛衔? 也由C6-C3-C6構(gòu)成，且抗腫瘤活性不顯著，因此可以推測甲氧基和羥基基團(tuán)的連接位置是影響抗腫瘤活性強(qiáng)弱的原因。本研究豐富了駱駝刺化學(xué)成分與抗宮頸癌細(xì)胞活性之間的關(guān)系，為其活性篩選和資源的開發(fā)利用奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突