血清miR-374a、TSGF、SCCAg對(duì)早期宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值

周 穎 王淑麗 李紅娟 田曉娜 王雅莉

作者單位：450007 鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,其中鱗癌為其最常見的病理類型,約占80%[1]。研究顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(LNM)與宮頸癌預(yù)后密切相關(guān),可導(dǎo)致較差的5年總生存率和5年無復(fù)發(fā)生存率[2]。對(duì)于早期宮頸癌患者,多采用系統(tǒng)性淋巴結(jié)切除術(shù)治療,以確定LNM的發(fā)生,為術(shù)后補(bǔ)充治療提供依據(jù),但同時(shí)導(dǎo)致一定數(shù)量未發(fā)生LNM的宮頸癌患者接受了不必要的手術(shù),進(jìn)而導(dǎo)致不必要的手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)[3]。因此,術(shù)前準(zhǔn)確評(píng)估LNM對(duì)宮頸癌的臨床決策至關(guān)重要。

微小RNA(miRNA)是一類內(nèi)源性短鏈非編碼RNA,在腫瘤細(xì)胞增殖、分化和遷移等生命活動(dòng)中有重要調(diào)控作用[4]。有研究報(bào)道,miR-374a在宮頸癌中高表達(dá),下調(diào)其表達(dá)后可抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,且與LNM密切相關(guān)[5]。TSGF,即腫瘤特異性生長因子,其是腫瘤細(xì)胞增殖及血管新生的分子基礎(chǔ),研究顯示,TSGF對(duì)宮頸癌有一定診斷價(jià)值,且與其病理特征LNM密切相關(guān)[6]。鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCCAg)是一種特異性較高的腫瘤標(biāo)志物,在宮頸癌的輔助診斷、預(yù)后判斷及復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)等方面有重要作用[7]。本研究旨在探討血清miR-374a、TSGF、SCCAg在早期宮頸癌LNM診斷中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 資料

對(duì)本院2019年4月至2022年10月收治的109例早期宮頸癌患者進(jìn)行回顧性分析,根據(jù)術(shù)后病理有無LNM分為LNM組(28例)和無LNM組(81例)。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)術(shù)后病理檢查診斷為宮頸鱗癌,且依據(jù)FIGO(2018)分期標(biāo)準(zhǔn)[8],為ⅠA2～ⅡA期;均行廣泛全子宮切除、雙附件切除及盆腔淋巴結(jié)清掃;術(shù)前均行CT檢查;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤;術(shù)前接受過化療、放療或免疫抑制劑治療;有宮頸手術(shù)史。所有患者中年齡24～70(49.64±8.89)歲;分化程度:高分化12例,中分化75例,低分化22例;FIGO分期:ⅠA2期15例,ⅠB期37例,ⅡA期57例。本研究獲本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集所有宮頸癌患者的病歷資料,包括年齡、分化程度(高、中、低分化)、FIGO分期(ⅠA2、ⅠB、ⅡA期)、間質(zhì)浸潤深度(≥1/2、<1/2)、有無淋巴脈管間隙浸潤(LVSI)、及腫瘤直徑(≥2 cm、<2 cm)等。

1.2.2 血清miR-374a檢測(cè) 于術(shù)前1周采集所有宮頸癌患者空腹肘靜脈血5 mL,經(jīng)3000 r/min離心10 min后分離、收集血清,-80 ℃保存待測(cè)。以Trizol(Invitrogen公司)法提取血清中的總RNA,借助NanoDrop 2000 C分光光度計(jì)測(cè)定濃度,隨之利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara公司)合成cDNA,最后利用RT-qPCR試劑盒(Takara公司)和ABI7500儀器對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,反應(yīng)條件:95℃ 30 s(預(yù)變性),95 ℃ 5 s(變性),60 ℃ 34 s(退火),40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參,經(jīng)2-△△CT法分析血清中miR-374a表達(dá)水平。所用引物由武漢金開瑞生物工程有限公司設(shè)計(jì)合成,引物序列如下:miR-374a-Forward:5'-CGGCGGTTATAATACAACCTG-3',miR-374a-Reverse:5'-AGCTCGAGTGGAAGTCTGTGCA-3';U6-Forward:5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3';U6-Reverse:5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。

1.2.3 血清TSGF、SCCAg檢測(cè) 以Elisa法測(cè)定血清中TSGF、SCCAg水平,試劑盒購自上海化邦生物科技有限公司,采用Beckman公司生產(chǎn)的DTX 880酶標(biāo)儀,操作全程依照說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌LNM危險(xiǎn)因素的單因素分析

單因素分析顯示,間質(zhì)浸潤深度、LVSI、腫瘤直徑、血清miR-374a、TSGF及SCCAg與宮頸癌LNM有關(guān)(P<0.05);年齡、分化程度、FIGO分期與宮頸癌LNM無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 宮頸癌LNM危險(xiǎn)因素的單因素分析

2.2 宮頸癌LNM危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

以宮頸癌是否發(fā)生LNM為因變量,以2.1中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的間質(zhì)浸潤深度、LVSI、腫瘤直徑、血清miR-374a、TSGF及SCCAg為自變量,進(jìn)行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,間質(zhì)浸潤深度≥1/2、腫瘤直徑≥2 cm、血清miR-374a、TSGF及SCCAg均是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素(P<0.05);LVSI與宮頸癌LNM無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 宮頸癌LNM危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

2.3 血清miR-374a、TSGF、SCCAg對(duì)宮頸癌LNM的診斷價(jià)值

ROC曲線顯示,血清miR-374a、TSGF、SCCAg單獨(dú)及三者聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸癌LNM的AUC分別為0.695、0.681、0.714、0.786,敏感度分別為53.57%、82.14%、78.57%、82.14%,特異度分別為90.12%、53.09%、65.43%、72.84%。見圖1、表3。

圖1 血清miR-374a、TSGF、SCCAg診斷宮頸癌LNM的ROC曲線

表3 ROC曲線參數(shù)

3 討論

病理活檢是診斷宮頸癌LNM的金標(biāo)準(zhǔn),但其為侵入性操作,易引發(fā)盆腔淋巴囊腫、下肢淋巴水腫等并發(fā)癥的發(fā)生,并不是臨床常規(guī)方法[9]。隨著醫(yī)學(xué)影像學(xué)的發(fā)展,CT、MRI、PET/CT等顯像技術(shù)在宮頸癌LNM的診斷中得到了廣泛應(yīng)用,雖然具有較高的特異度,但敏感度并不理想,分別為51.4%、24.3%和48.6%[10],且成本高。因此,亟待尋求成本低且更加準(zhǔn)確判斷早期宮頸癌LNM的方法,以指導(dǎo)其臨床決策。

各國學(xué)者對(duì)宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素進(jìn)行了有關(guān)研究,但目前仍無一致結(jié)論。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)間質(zhì)浸潤深度≥1/2、腫瘤直徑≥2 cm亦是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素。鄒婷等[11]通過對(duì)376例宮頸癌患者進(jìn)行分析,得出了間質(zhì)浸潤深度是LNM危險(xiǎn)因素的結(jié)論,且間質(zhì)浸潤深度≥1/2時(shí)LNM的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)約是間質(zhì)浸潤深度<1/2時(shí)的4倍。Gulseren等[12]對(duì)283例宮頸癌患者的研究表明,腫瘤直徑是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素,且腫瘤直徑≥2 cm時(shí)LNM的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)約是腫瘤直徑<2 cm時(shí)的3倍。這與本研究結(jié)果相符。另有研究報(bào)道,LVSI亦是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素[13]。而本研究與之不一致,顯示LVSI與宮頸癌LNM無關(guān),可能與本研究例數(shù)較少有關(guān)。

miRNA是一類小的單鏈RNA分子,調(diào)節(jié)約1/3人類基因的表達(dá),越來越多的研究證實(shí)miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)聯(lián)密切,在腫瘤的診斷及預(yù)后評(píng)估中有重要價(jià)值[14]。有文獻(xiàn)報(bào)道,miR-374a在骨肉瘤、乳腺癌中高表達(dá),下調(diào)其表達(dá)后可明顯抑制癌細(xì)胞的遷移和侵襲[15-16]。此外,亓穎芝等[5]發(fā)現(xiàn),miR-374a在宮頸癌中亦高表達(dá),同時(shí)與LNM、臨床分期、病理分級(jí)等病理特征密切相關(guān),提示miR-374a是一種潛在的宮頸癌LNM診斷標(biāo)志物。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)血清miR-374a是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素,其診斷LNM的AUC為0.695,敏感度為53.57%,特異度為90.12%,表明miR-374a對(duì)宮頸癌LNM有一定診斷價(jià)值,特異度較高。TSGF是一種眾所周知的生長因子,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及血管新生,其血清水平對(duì)諸多腫瘤的早期診斷、預(yù)后以及療效評(píng)估均有良好的臨床價(jià)值[17]。近期研究發(fā)現(xiàn),TSGF在宮頸癌的診斷中亦有一定作用,同時(shí)與LNM密切相關(guān)[18-19]。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)血清TSGF是宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素,其診斷LNM的AUC為0.681,敏感度為82.14%,特異度為53.09%,表明TSGF對(duì)宮頸癌LNM有一定診斷價(jià)值,敏感度較高。SCCAg是一種眾所周知的鱗癌標(biāo)志物,其在宮頸癌診斷中的良好輔助作用已得到廣泛證實(shí)[20]。此外,有研究發(fā)現(xiàn),SCCAg對(duì)宮頸癌LNM亦有一定診斷價(jià)值,其AUC、敏感度、特異度分別為0.733、66.7%、73.6%[21]。而本研究中SCCAg診斷宮頸癌LNM的AUC、敏感度、特異度分別為0.714、78.57%、65.43%,與之基本相符。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),血清miR-374a、TSGF、SCCAg聯(lián)合診斷LNM的AUC為0.786,敏感度為82.14%,特異度為72.84%,表明三者聯(lián)合診斷的效能更佳。

綜上,血清miR-374a、TSGF、SCCAg是早期宮頸癌LNM的危險(xiǎn)因素,三者聯(lián)合診斷LNM的效能較好,為LNM提供了新診斷思路,有助于指導(dǎo)臨床決策的制定。