甲狀腺癌組織中TIPE2、LASP1蛋白表達(dá)與其臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性分析

張 瑜 馬征澤 王 曼 閻 芳 周曉燕 劉雙雙

作者單位：450000 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院

甲狀腺癌主要起源于甲狀腺濾泡上皮,早期無明顯癥狀,多因無痛性頸部腫瘤而就診,當(dāng)腫瘤體積不斷增大后,可對(duì)周圍組織造成壓迫,誘發(fā)呼吸困難、聲嘶、吞咽困難等癥狀,若不及時(shí)治療,還可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,威脅生命安全[1-2]。手術(shù)為治療甲狀腺癌主要方式,依據(jù)患者病情制定適宜手術(shù)方案,能夠充分切除腫瘤組織,避免腫瘤持續(xù)浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移,以延長(zhǎng)患者生存時(shí)間[3-4]。但長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn),仍有部分患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,導(dǎo)致預(yù)后欠佳。若能盡早尋找到能夠?qū)谞钕侔┗颊哳A(yù)后起到一定預(yù)測(cè)作用的生物學(xué)指標(biāo),則有助于進(jìn)一步完善治療方案。人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2(TIPE2)則是近年來新發(fā)現(xiàn)的免疫負(fù)調(diào)控分子,在多種惡性腫瘤組織內(nèi)均存在分布及表達(dá),被臨床認(rèn)為是一種潛在抑癌基因,或可阻止腫瘤發(fā)生[5]。LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1(LASP1)屬于特異性黏著斑蛋白,臨床認(rèn)為其與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系[6]。但關(guān)于TIPE2、LASP1在甲狀腺癌中的表達(dá)相關(guān)報(bào)道較少,還有待進(jìn)一步研究。鑒于此,本研究旨在分析甲狀腺癌組織內(nèi)TIPE2、LASP1蛋白表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年1月至2019年5月我院收治的81例甲狀腺癌患者的臨床資料。其中男性32例,女性49例;年齡35～67歲,平均年齡(51.36±7.19)歲;體質(zhì)量指數(shù)18.5～27.4 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(23.53±1.68)kg/m2;腫瘤位置:49例單側(cè),32例雙側(cè);腫瘤分期:Ⅰ～Ⅱ期47例,Ⅲ～Ⅳ期34例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:50例轉(zhuǎn)移,31例無轉(zhuǎn)移。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理活檢或手術(shù)病理證實(shí);精神狀態(tài)正常;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):凝血功能障礙;中途隨訪失聯(lián);術(shù)前接受放化療;合并其他惡性腫瘤;存有肝腎衰竭。

1.2 方法

所有患者均依據(jù)腫瘤分期、發(fā)病部位等制定適宜的手術(shù)計(jì)劃,術(shù)中切除病理標(biāo)本后,再切除距離腫瘤2 cm以上的正常組織作為癌旁標(biāo)本,術(shù)后及時(shí)送檢。TIPE2表達(dá):采用免疫組化SP染色法檢測(cè),先將石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化等處理,以3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶,之后PBS沖洗5 min,滴加正常山羊血清,以37 ℃封閉處理15 min,再以濾紙吸取血清,直接加入一抗再以37 ℃孵育2 h,再滴加生物素化的二抗,以37 ℃孵育40 min;PBS沖洗5 min,DAB顯色處理,蘇木精復(fù)染,中性樹膠封片。顯微鏡下選取5個(gè)視野觀察,每個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞200個(gè),按著色強(qiáng)度、陽(yáng)性細(xì)胞比判斷陽(yáng)性表達(dá)情況,著色強(qiáng)度為0～3分,陽(yáng)性細(xì)胞比為0～4分,兩項(xiàng)積分相乘,得分>3分為陽(yáng)性,反之為陰性。LASP1表達(dá):采用免疫組化法檢測(cè),石蠟切片,每個(gè)組織切6片,以60 ℃烘干處理2 h,經(jīng)二甲苯脫蠟處理,采用梯度乙醇處理,分別為75%、85%、95%及無水乙醇,再行抗原修復(fù),其中3片加入兔抗人LASP1抗體為一抗,置于4 ℃內(nèi)冰箱過夜,經(jīng)PBS沖洗3次,滴加羊抗兔二抗,以37 ℃孵育20 min,之后DAB顯色及蘇木精復(fù)染,以中性樹膠封片。顯微鏡下每張切片任意選取3個(gè)高倍視野,按著色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比判斷陽(yáng)性表達(dá)情況,著色強(qiáng)度0～3分,陽(yáng)性細(xì)胞比0～4分,依據(jù)兩者乘積劃分等級(jí),>3分為陽(yáng)性,反之為陰性。所有患者均接受長(zhǎng)期隨訪,隨訪內(nèi)容為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移即為預(yù)后不良,隨訪方式為電話隨訪或門診復(fù)查隨訪,隨訪時(shí)間為3年或患者死亡。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較腫瘤標(biāo)本及癌旁標(biāo)本內(nèi)TIPE2、LASP1表達(dá)情況。(2)比較不同TIPE2表達(dá)與年齡、性別、腫瘤分期、腫瘤位置、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑等臨床病理特征的關(guān)系。(3)比較不同LASP1表達(dá)與年齡、性別、腫瘤分期、腫瘤位置、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶數(shù)、腫瘤直徑等臨床病理特征的關(guān)系。(4)比較不同TIPE2、LASP1表達(dá)患者預(yù)后的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 TIPE2、LASP1表達(dá)情況

腫瘤標(biāo)本內(nèi)TIPE2陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁標(biāo)本,LASP1陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁標(biāo)本,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組TIPE2、LASP1表達(dá)情況對(duì)比(例,%)

2.2 TIPE2表達(dá)與其臨床病理特征相關(guān)性

TIPE2表達(dá)陽(yáng)性組Ⅰ～Ⅱ期、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑<2 cm占比高于陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 TIPE2表達(dá)與其臨床病理特征的相關(guān)性/例

2.3 LASP1表達(dá)與其臨床病理特征相關(guān)性

LASP1表達(dá)陽(yáng)性組Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥2 cm占比高于陰性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 LASP1表達(dá)與其臨床病理特征相關(guān)性/例

2.4 TIPE2、LASP1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪3年,81例患者共31例出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,預(yù)后不良發(fā)生率為38.27%(31/81);TIPE2表達(dá)陽(yáng)性組預(yù)后不良率為17.24%(5/29),低于陰性組的50.00%(26/52),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.457,P=0.004);LASP1表達(dá)陽(yáng)性組預(yù)后不良率為45.00%(27/60),高于陰性阻的19.05%(4/21),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.435,P=0.035)。

3 討論

甲狀腺癌病因復(fù)雜,臨床認(rèn)為癌基因、多肽生長(zhǎng)因子在疾病發(fā)展中具有重要作用,該類因素持續(xù)作用于甲狀腺濾泡細(xì)胞,可促使甲狀腺發(fā)生惡性變化,形成腫瘤組織[7-8]。同時(shí),電離輻射、碘攝入也與甲狀腺癌發(fā)病關(guān)系密切,長(zhǎng)期受輻射照射可促使甲狀腺細(xì)胞核變形,影響甲狀腺素正常合成,增加癌變風(fēng)險(xiǎn),碘缺乏也會(huì)促使甲狀腺素合成減少,并引起促甲狀腺激素異常升高,導(dǎo)致甲狀腺濾泡肥大增生,久之則可誘發(fā)甲狀腺癌[9-10]。手術(shù)是臨床治療甲狀腺癌的首選方式,多數(shù)患者術(shù)后預(yù)后良好,可提高長(zhǎng)期生存率,但仍有部分患者術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等不良事件,導(dǎo)致預(yù)后不良[11]。

TIPE2最早在自身免疫性疾病中檢出,在天然及獲得性免疫系統(tǒng)中能夠發(fā)揮重要作用。而隨著臨床深入研究發(fā)現(xiàn),TIPE2在多種腫瘤組織內(nèi)也存在分布及表達(dá),能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的分化成熟進(jìn)行調(diào)控,從而抑制腫瘤細(xì)胞過度增殖,以穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞周期,降低G1/S期細(xì)胞比例,并能夠阻礙上皮細(xì)胞調(diào)控異常所致的DNA持續(xù)擴(kuò)增,進(jìn)而阻止惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[12-13]。同時(shí),TIPE2屬于抗炎因子,能夠抑制炎癥反應(yīng)在腫瘤細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮作用,故TIPE2被臨床視為潛在的抑癌基。本研究結(jié)果顯示,腫瘤標(biāo)本內(nèi)TIPE2陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁標(biāo)本,TIPE2表達(dá)陽(yáng)性組Ⅰ～Ⅱ期、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑<2 cm占比高于陰性組。提示TIPE2在腫瘤標(biāo)本內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)率低,且陽(yáng)性表達(dá)患者普遍腫瘤分期低、腫瘤直徑小、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。其原因?yàn)楫?dāng)患者機(jī)體內(nèi)缺乏TIPE2,則難以通過抗炎、細(xì)胞調(diào)控等多種途徑抑制腫瘤增殖,故腫瘤發(fā)展更為迅速,腫瘤病情更為嚴(yán)重。LASP1則屬于肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,能夠在調(diào)控細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及偽足延伸中起到重要作用,最初發(fā)現(xiàn)于乳腺癌中,當(dāng)LASP1表達(dá)水平較高時(shí),可能作為轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白參與腫瘤發(fā)展,并能夠在細(xì)胞骨架形成中起到一定作用,有助于增強(qiáng)腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲能力[14-15]。本研究結(jié)果顯示,腫瘤標(biāo)本內(nèi)LASP1陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁標(biāo)本,LASP1表達(dá)陽(yáng)性組Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥2 cm占比高于陰性組。提示LASP1在腫瘤標(biāo)本內(nèi)具有較高陽(yáng)性表達(dá)率,且陽(yáng)性表達(dá)組腫瘤分期更高,腫瘤直徑大及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)更大。其原因?yàn)楫?dāng)LASP1過表達(dá)時(shí),可為腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移創(chuàng)造良好條件,從而促使腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示,隨訪3年,81例患者共31例出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,預(yù)后不良發(fā)生率為38.27%(31/81);TIPE2陽(yáng)性組預(yù)后不良率低于陰性組,LASP1表達(dá)陽(yáng)性組預(yù)后不良率高于陰性組。提示TIPE2低表達(dá)、LASP1高表達(dá)患者預(yù)后欠佳,可作為早期評(píng)估預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

綜上所述,TIPE2、LASP1蛋白表達(dá)在甲狀腺癌中存在不同表達(dá),且表達(dá)水平與腫瘤分期、腫瘤直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系,而TIPE2低表達(dá)、LASP1高表達(dá)可作為預(yù)后不良的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。