變形桿菌屬中抗菌藥物亞胺培南稀釋法和紙片法的對(duì)比研究

伍萃欣，廖志玲，黃順?gòu)桑瑓菨嵱?/p>

廣東省英德市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東英德 513000

變形桿菌屬?gòu)V泛存在于泥土和污水及人、畜糞便中，為條件致病菌，可引起尿路感染、呼吸道感染、腹膜炎、胃腸炎等[1-2]，也可產(chǎn)生超廣譜β 內(nèi)酰胺酶，產(chǎn)酶株對(duì)青霉素、第一代、第二代、第三代頭孢素及單酰胺抗生素均產(chǎn)生耐藥[3-4]。該菌屬具有多重耐藥和交叉耐藥的特性，給臨床的治療和醫(yī)院感染的控制帶來(lái)了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，而亞胺培南是碳青霉烯類抗菌藥物，是臨床重要抗菌藥物[5]，對(duì)治療感染疾病非常重要，掌握亞胺培南的藥物敏感性對(duì)指導(dǎo)臨床用藥十分重要[6-7]。如今，由于時(shí)代的進(jìn)步，大型實(shí)驗(yàn)儀器的投入使用，使得臨床上獲知感染源和相應(yīng)抗菌藥物信息的速度迅速加快，同時(shí)也需保證儀器性能的準(zhǔn)確性。儀器稀釋法的藥敏試驗(yàn)屬于微型的肉湯試驗(yàn)，通過(guò)應(yīng)用光電比濁原理得到最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration, MIC）值，而紙片擴(kuò)散法，是將浸有抗菌藥的紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長(zhǎng)被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈，抑菌圈直徑的大小與待檢菌的MIC 呈負(fù)相關(guān)，抑菌圈越大，MIC 越小[8]。本研究選取廣東省英德市人民醫(yī)院2021 年5 月—2023 年8 月臨床標(biāo)本分離出的208株變形桿菌屬進(jìn)行兩種方法學(xué)的藥物敏感試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院各科室門診及住院患者各臨床標(biāo)本，包括痰液、尿液、分泌物、膿液、血液等送檢標(biāo)本208 份。

1.2 儀器與試劑

VITEK2 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀、分析儀所配套的革蘭陰性菌鑒定卡和藥敏卡片、血瓊脂培養(yǎng)基，含萬(wàn)古霉素的巧克力瓊脂培養(yǎng)基、無(wú)菌鹽水、一次性無(wú)菌塑料管、VITEK2 DensiCHEK 比濁儀、標(biāo)準(zhǔn)比濁管、無(wú)菌棉拭、水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（mueller-hinton agar medium plate, M-H）平板、亞胺培南藥物紙片、游標(biāo)卡尺、標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）等。

1.3 方法

儀器稀釋法:使用新鮮菌，用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的VITEK2 DensiCHEK 制備相當(dāng)于麥?zhǔn)蠞岫?.50～0.63的均質(zhì)懸液，選取VITEK2 COMPACT（法國(guó)生物梅里埃）全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏分析儀配套的革蘭陰性菌鑒定卡和藥敏卡進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，儀器進(jìn)行6～18 h 的測(cè)試后根據(jù)其工作原理分析得出MIC 值。

K-B 紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer method, K-B）:挑選新鮮菌制備成0.5 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙海脽o(wú)菌棉拭蘸取菌液均勻涂布整個(gè)MH 平板表面，用無(wú)菌鑷子取藥敏紙片貼于平板中心表面，置35℃孵育18～24 h 后觀察結(jié)果。

1.4 觀察指標(biāo)

儀器稀釋法應(yīng)用光電比濁原理得到MIC 值，MIC 值≤1:判讀敏感，MIC 值≥4:判讀耐藥MIC 值=2:判讀中介。紙片擴(kuò)散法:用所測(cè)抑菌圈的大小報(bào)告敏感（S）、中介（I）、耐藥（R），抑菌環(huán)≥23:敏感，抑菌環(huán)20～22:中介，抑菌環(huán)≤19:耐藥。以上兩種方法學(xué)的藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)均是依照2023 年版的CLSI 判讀標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）由廣東省臨檢中心提供，藥敏質(zhì)控流程參照《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》完成。實(shí)驗(yàn)研究所有變形桿菌屬菌株數(shù)中，使用儀器稀釋法與使用手工K-B 進(jìn)行亞胺培南藥敏試驗(yàn)達(dá)到的判讀結(jié)果保持兩者一致性作為這兩種方法學(xué)結(jié)果的相符性，以及兩者藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果的吻合程度作為其結(jié)果的相符率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 208 株變形桿菌屬比例

據(jù)統(tǒng)計(jì)，208 株變形桿菌屬中，以普通變形桿菌占比為2.40%（5/208），奇異變形桿菌占比為87.98%（183/208），豪澤變形桿菌占比為9.62%（20/208）見(jiàn)表1。

表1 208 株變形桿菌屬比例

2.2 兩種方法相符率分析

208 株變形桿菌屬亞胺培南儀器稀釋法與紙片擴(kuò)散法藥敏結(jié)果相符比例，見(jiàn)表2。

表2 兩種方法相符比例

3 討論

分離出的變形桿菌屬208 株中，奇異變形桿菌達(dá)到183 株，占總菌株數(shù)的87.98%，其余包括有普通變形桿菌和豪澤變形桿菌，分別是5 株和20 株，占比分別為2.40%和9.62%。數(shù)據(jù)可見(jiàn)，3 種變形桿菌的亞胺培南藥敏結(jié)果均為耐藥或中介時(shí)兩種試驗(yàn)方法的相符率在50%～65%之間，藥敏結(jié)果均為敏感時(shí)相符率可達(dá)到90%以上。紙片擴(kuò)散法是藥敏試驗(yàn)中常用的一種試驗(yàn)方法，其方法操作簡(jiǎn)單，效果明顯，可觀察度高，是適合國(guó)情的藥敏試驗(yàn)方法，我國(guó)已經(jīng)統(tǒng)一操作規(guī)程[9-11]，儀器稀釋法則使用自動(dòng)化檢測(cè)，計(jì)算機(jī)管理，能快速得出試驗(yàn)結(jié)果，但是對(duì)于誘導(dǎo)型細(xì)菌可能產(chǎn)生錯(cuò)誤，細(xì)菌生長(zhǎng)情況亦不可查，存在其局限性[12]，根據(jù)《2023 年最新版本CLSIM-100 抗微生物藥物敏感試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)》機(jī)構(gòu)治療指南，感染預(yù)防程序或流行病學(xué)調(diào)查表示可能需要識(shí)別產(chǎn)碳青霉烯酶的腸桿菌科，包括變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根摩根菌屬等，對(duì)于碳青霉烯類藥物MIC 升高（中介或耐藥）時(shí)，對(duì)其藥敏結(jié)果提出不一定報(bào)告建議，指南指出亞胺培南對(duì)變形桿菌屬的MICs 趨向性更高（即MICS 處于中介或耐藥范圍），這些菌株可能存在非產(chǎn)碳青霉烯酶機(jī)制而導(dǎo)致亞胺培南MICs 升高[13-14]。以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)亦顯示儀器稀釋法檢測(cè)亞胺培南藥物敏感性呈現(xiàn)耐藥或中介時(shí)，紙片擴(kuò)散法對(duì)此呈現(xiàn)低相符性，造成這種情況的原因可能是這些菌株存在非產(chǎn)青霉烯酶機(jī)制或者其他誘導(dǎo)因素[15]，導(dǎo)致儀器對(duì)MIC 分析得出過(guò)高判讀結(jié)果，結(jié)論現(xiàn)象與指南論述一致，這屬于儀器稀釋法針對(duì)變形桿菌屬對(duì)亞胺培南抗菌藥物藥敏檢測(cè)的局限性，而K-B 可以對(duì)其藥敏試驗(yàn)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)驗(yàn)證，從而能夠適當(dāng)?shù)貙?duì)儀器藥敏結(jié)果予以糾正，降低假耐藥性。

綜上所述，推進(jìn)抗菌藥物的合理使用需要多學(xué)科的相互協(xié)作，保證各科室工作質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室務(wù)必準(zhǔn)確提供檢測(cè)結(jié)果，從而幫助臨床正確使用抗菌藥物，提高療效，遏制耐藥蔓延，為患者的安全合理用藥保駕護(hù)航。