外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子在兒童肺炎支原體肺炎診斷中的價值分析

王 菊,龔 倩

復旦大學附屬中山醫院青浦分院檢驗科,上海 201799

肺炎支原體肺炎(MPP)是全球范圍內常見的呼吸道感染疾病,是兒科肺炎的常見類型,可占兒童社區感染性肺炎的8%～35%[1-2]。但是肺結核(TB)和MPP在早期表現及影像結果極為相似[3],有研究證實,不同病原體會引起患者外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子的不同表現,若發病前期不能及時確定病因并給予對癥治療,將影響治療效果和患兒預后情況[4-6]。目前MPP的發病機制尚未完全明確,但研究認為,肺炎支原體(MP)感染后機體免疫功能紊亂是導致MPP的主要原因[7],有研究表明,MP感染可通過介導淋巴細胞表達抑制細胞免疫,同時還可通過調節Th1/Th2平衡調控機體炎癥反應,發病前期分析外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子水平變化可能有助于發病前期診斷及指導治療方案[8-9]。本研究回顧性分析2020年1月至2023年1月本院的120例MPP患兒、80例TB患兒及120例健康兒童的臨床資料,旨在分析外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子在兒童MPP發病前期診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2023年1月于本院收治的120例MPP患兒為觀察組。觀察組中,男73例,女47例;平均年齡(7.15±0.82)歲;平均體質量(23.25±2.99)kg。納入標準:(1)符合《實用兒科學》中MPP相關診斷標準;(2)臨床資料完整;(3)年齡≤14歲;(4)為首次診斷,發病至救治低于6 d;(5)患兒及家屬知情,依從性良好,可配合檢查及治療,簽署知情同意書。排除標準:(1)合并其他感染性疾病;(2)重要器官嚴重功能障礙;(3)凝血功能或免疫功能異常;(4)合并認知功能障礙。同期選取本院臨床明確診斷為TB的80例患兒為對照組,其中男26例,女19例;平均年齡(6.93±0.71)歲,平均體質量(22.6±2.85)kg。另選取同期來本院查體中心查體的120例健康兒童為健康組,其中男66例,女54例;平均年齡(7.30±0.75)歲,平均體質量(23.38±3.21)kg。各組年齡、性別、體質量比較差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經本院倫理委員會批準通過。

1.2方法 采集受檢者空腹靜脈血,3 000 r/min離心10 min,小心采集上清液,于-70 ℃環境中低溫保存,避免反復凍融。采用流式細胞儀檢測各組受檢者T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平,計算CD4+/CD8+,采用酶聯免疫吸附試驗檢測受檢者干擾素(IFN)-γ、白細胞介素-8(IL-8)、白細胞介素-10(IL-10)、白細胞介素-13(IL-13)水平。

1.3觀察指標 (1)比較觀察組、對照組與健康組3組受檢者外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Th1細胞因子(IFN-γ、IL-8)、Th2細胞因子(IL-10、IL-13)水平。(2)采用受試者工作特征(ROC)曲線評估外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子在兒童MPP診斷中的價值。

2 結 果

2.13組受檢者T淋巴細胞亞群水平比較 觀察組和對照組CD3+水平、CD4+、CD4+/CD8+明顯低于健康組(P<0.05),CD8+水平明顯高于健康組(P<0.05)。與對照組比較,觀察組CD3+、CD8+水平偏高(P<0.05),CD4+水平、CD4+/CD8+偏低(P<0.05)。見表1。

2.23組受檢者細胞因子水平比較 觀察組和對照組IL-8、IFN-γ水平明顯高于健康組(P<0.05),IL-13、IL-10水平明顯低于健康組(P<0.05);觀察組IL-10、IFN-γ水平高于對照組(P<0.05),IL-8、IL-13水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子診斷兒童MPP價值分析 ROC曲線結果顯示,外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子在單獨檢測時,CD4+/CD8+和IL-10診斷兒童MPP的價值最高[曲線下面積(AUC)分別為0.864、0.811],當指標聯合檢測時診斷價值優于各項單獨檢測(AUC為0.924)。見表3,圖1、2。

表1 3組受檢者T淋巴細胞亞群水平比較

表2 3組受檢者細胞因子水平比較

表3 外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子診斷MPP價值分析

注:A為外周血CD3+診斷MPP價值分析;B為外周血CD4+診斷MPP價值分析;C為外周血CD8+診斷MPP價值分析;D為外周血CD4+/CD8+診斷MPP價值分析;E為外周血IL-8診斷MPP價值分析;F為外周血IFN-γ診斷MPP價值分析;G為外周血IL-13診斷MPP價值分析;H為外周血IL-10診斷MPP價值分析。

圖2 外周血T淋巴細胞亞群和細胞因子聯合診斷MPP價值分析

3 討 論

MP是兒童及成人呼吸道感染的常見原因,可誘發上呼吸道和下呼吸道感染,其嚴重程度從輕度至危及生命不等,目前在世界范圍內流行[10-11]。肺炎是臨床MP感染相關的最重要的疾病。在流行期間,大約4%～8%的社區獲得性細菌性肺炎(CABP)可能由MP引起[12]。然而,MP在流行期間可導致普通人群中高達20%～40%的CABP,在封閉人群中上升至70%[13]。MPP的發病因年齡而異,學齡兒童和青少年是最常見的受影響年齡段,發病前期診斷并給予治療干預不僅可以有效緩解病癥,減少MPP對患兒生長發育及生活質量的影響,還可減少MPP的大范圍流行,減少醫療經濟負擔。

目前MPP的發病機制尚未完全明確,但多數研究認為其與MP感染后機體免疫功能密切相關[14-15]。T淋巴細胞是參與機體細胞免疫的重要部分,其中CD3+反映T細胞總數,CD4+反映輔助性T細胞水平,可參與免疫反應的激活及強度調節,CD4+水平越高提示機體免疫功能越強,而CD8+是細胞毒性T細胞表面標志物,可參與病原體的清除過程,CD8+水平越高提示機體免疫功能低下,臨床多采用計算CD4+/CD8+來評價受檢者免疫功能,CD4+/CD8+越低說明機體免疫調節處于負調控狀態,機體免疫功能低下[16-17]。本研究中,觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯低于健康組,CD8+水平明顯低于健康組。說明MPP患兒機體免疫功能低下,與宿俊彪等[18]研究結果相近,該研究認為,MP感染后機體存在體液免疫和細胞免疫紊亂的現象,發病前期檢測體液免疫和外周血T淋巴細胞亞群水平有利于提高臨床治療效果,幫助改善患者預后。

炎癥反應也參與MPP的發生及發展過程[19]。IL-8及IFN-γ是由Th1細胞分泌,可發揮促炎作用,IL-8作為強效中性粒細胞趨化因子,可誘導中性粒細胞遷移至呼吸道并在呼吸道中大量聚集,釋放各種炎癥因子及溶酶體,促進炎癥反應[20]。IFN-γ是一種含有146個氨基酸殘基的蛋白質,主要由活化T細胞、巨噬細胞及NK細胞等生成分泌,可通過介導JAK/STAT途徑調控大量細胞反應,發揮促炎癥作用[21]。IL-13、IL-10是由Th2細胞分泌,可發揮抗炎作用,其中IL-10可抑制IL-8、TNF-α的生成及表達,發揮抗炎癥反應作用,而IL-13可誘導單核細胞分化及B細胞增殖,還可促進單核-巨噬細胞活化和Th1細胞免疫反應,抑制炎癥反應。Th1/Th2細胞比例變化反映機體炎癥反應情況。本研究中,觀察組IL-8、IFN-γ水平明顯高于健康組,IL-13、IL-10水平明顯低于健康組。說明MPP患兒機體Th1/Th2平衡紊亂,存在明顯炎癥反應,MPP機體Th1/Th2平衡與病情進程密切相關,發病前期診斷并給予治療糾正有助于提高療效,改善患者生活質量。

由于許多MP感染的性質相對溫和,其表現與TB癥狀相似,并且缺乏可靠的現場診斷測試來確認微生物學診斷,導致感染的病原體不能被及時發現。本研究結果表明,與TB患兒相比,MPP患兒CD4+水平、CD4+/CD8+偏低,CD3+、CD8+、IL-8、IFN-γ水平偏高,依據上述指標的不同,在MPP發病前期進行病原體感染的初步篩查,對外周血T淋巴細胞亞群及細胞因子水平給予定時監測可有助于盡快診斷及指導治療方案。此外,本研究ROC曲線結果顯示,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IL-8、IFN-γ、IL-13、IL-10單獨檢測診斷MPP的AUC分別為0.751、0.687、0.784、0.864、0.798、0.672、0.650、0.811,聯合檢測診斷MPP的AUC為0.924,提示外周血T淋巴細胞亞群及細胞因子聯合檢測MPP的診斷價值優于單獨檢測。在MPP患兒發病前期聯合檢測其外周血T淋巴細胞亞群及細胞因子可為臨床診斷提供理論依據,幫助醫生做出精準的治療方案,改善患兒預后情況。

綜上所述,MPP患兒和TB患兒雖臨床癥狀相似,但外周血T淋巴細胞亞群及細胞因子的指標變化不盡相同,可通過指標特征及多指標的聯合檢測為快速診斷MPP提供理論依據。