犬冠狀病毒病的診斷技術及治療措施

丁小鵬

（北票市動物疫病預防控制中心，遼寧 北票 122100）

冠狀病毒是廣泛存在于自然界的一大類病毒，可感染人、犬、貓和家禽等脊椎動物，導致嚴重的呼吸道、消化道及神經系統疾病。犬冠狀病毒主要導致犬只發生急性腸胃炎，嚴重可導致犬死亡，給犬類養殖造成嚴重經濟損失。本文主要從病原體特征、流行病學、致病機制、臨床癥狀、臨床診斷、實驗室診斷及防治措施等對犬冠狀病毒做一概述。希望可以為犬養殖業診斷和防治該病帶來一定參考。

1 病原特征

該病的病原為犬冠狀病毒，主要存在于病犬的腸上皮細胞和腸內容物中。犬冠狀病毒形態多樣，多為圓形或橢圓形，大小不一，直徑在60～200納米之間，外表有一層脂質囊膜，囊膜表面均勻分布著冠狀病毒獨有的、20納米長、呈花瓣狀的纖突，凍融易脫落，失去傳染性，因電鏡負染照片形似皇冠而得名。病毒核心由蛋白質和RNA組成。犬冠狀病毒對高溫、紫外線和氯仿、乙醚、75%酒精、含氯消毒劑和脫氧膽酸鹽等化學消毒劑敏感。在糞便中可存活6～7天，4℃條件下保存數月仍有傳染性，可保存在-70℃條件下數年。

2 流行病學

在1985年我國首次發現犬冠狀病毒，由徐漢坤報道，后繼續發現于軍犬、警犬和民用犬之間。犬冠狀病毒可感染不同品種和年齡的犬只，幼年犬免疫力低，更易感染，發病率和死亡率均高于成年犬，狐貍和貉等犬科動物也會感染。冬季、初春和晚秋等天氣寒冷的季節易感。該病傳播速度快，主要傳染源為患病犬和帶毒犬及其排泄物，主要通過糞口途徑傳染給易感犬，也可經垂直傳播。

3 致病機制

犬冠狀病毒感染犬只后兩天左右到達十二指腸，病毒表面蛋白與小腸細胞受體結合，進入小腸絨毛間的吸收細胞后，迅速利用宿主進行大量的復制增殖。在細胞質空泡的平滑膜上出芽，導致細胞破裂，釋放出大量犬冠狀病毒，導致小腸感染加重，小腸絨毛變得短粗，停止分泌消化酶，致使小腸的消化吸收功能減弱，犬只開始出現嘔吐和腹瀉的癥狀。如果不進行及時的補液和消炎，嚴重的嘔吐和腹瀉會導致病犬最終脫水或酸中毒死亡。通常單獨感染犬冠狀病毒的死亡率低，但犬冠狀病毒會損害病犬體內的免疫細胞，導致宿主免疫力下降，繼發感染犬細小病毒和輪狀病毒、或是運輸和突然降溫等應激情況后，會大大提高犬只的死亡率。

4 臨床癥狀

犬冠狀病毒病的主要臨床表現為不同程度的消化道癥狀，潛伏期為1-3天，主要癥狀為精神萎靡、食欲不振、喜臥、嘔吐、腹痛、腹瀉，糞便氣味惡臭，嚴重時病犬會拉綠色或橙色的糊狀或水樣便，其中或許有血或黏膜組織，少數犬只會出現體溫升高的情況。初期嘔吐的是未消化完全的食物，隨后變為黃綠色黏液，且混有泡沫。犬冠狀病毒病嚴重時會引發犬只結膜炎，導致視力下降。幼犬免疫力低下，感染該病毒后，體型快速消瘦、脫水，嚴重者在1～2天死亡。成年犬只及時治療后，可在7～10天康復，但在康復后也可能長時間攜帶病毒，導致疾病復發。若病犬繼發感染其他病毒、細菌或寄生蟲等，導致病情復雜，康復較慢，或是因嚴重感染死亡。

5 病理變化

解剖病死犬發現，發生感染病變最嚴重的部位是回腸，腸道內有白色或黃綠色液體，腸黏膜脫落導致腸壁變薄，小腸絨毛短縮，并出現融合，隱窩變深，黏膜固有層的細胞成分增加，腹上皮細胞變得扁平，杯狀細胞排空。該病特異性的病變為細胞內形成密絲體結構和膜結合小體。非特異性的細胞病變是線粒體發生變形，微絨毛被破壞，胞漿密度嚴重降低，胞漿空泡擴張，并出現脂質包涵體。

6 臨床診斷

獸醫可根據豐富的臨床經驗，對患病犬感病的臨床癥狀以及流行病學特點做一個初步診斷。但犬冠狀病毒通常會與其他病毒混合感染，且輪狀病毒的臨床表現與之相似，很難得出一個明確的診斷結果。臨床上會應用快速檢測試劑配合診斷。

7 實驗室診斷

7.1 電鏡觀察

使用電子顯微鏡對病犬的糞便進行觀察，可發現冠狀病毒特有的冠狀纖突結構，但糞便含有太多雜質，或許可有物質與之有相似的冠狀結構，導致結果出現假陽性。纖突極易脫落，或是病毒發生變異，冠狀結構不明顯，導致觀察結果出現假陰性。電鏡檢查的結果誤差較大，使用費用較高，很多檢測機構還沒有該設備，限制了該技術的臨床使用。公認的診斷犬冠狀病毒的最標準的方法是分離培養，但分離培養耗時長，難度大，且效率不高，在分離培養期間，犬只可能已經死亡，耽誤疾病的防控工作。

7.2 病毒分離培養

取病犬的糞便，無菌條件下離心取上清液，經0.22微米的過濾器過濾后，接種于犬腎細胞或是貓腎細胞的培養液中，在37℃恒溫箱中、5%二氧化碳的條件下培育48小時后，觀察發現細胞變圓、脫落，沒有明顯的形態上的病變癥狀。病毒分離培養所得結果更加直觀，但在采樣、分離、培養和鑒定的過程中耗時較長，人為因素導致結果出現誤差的概率較大，而且靈敏度低于高通量的篩選方法。

7.3 血清學診斷技術

血清學診斷技術主要是采集病犬血清進行中和實驗和間接ELISA實驗，檢測病犬血清中的抗體效價是否升高。血清學診斷特異性強、靈敏度高，不與其他病毒交叉反應，是獸醫臨床使用率較高的實驗方法之一。

7.4 普通RT-PCR

普通RT-PCR特異性強且靈敏度高，可檢測輕微患病的病犬，且檢出率較高，但對病毒的載量無法確定。實驗要求較高的操作技術，否則會導致交叉污染，影響實驗結果的準確性。

7.5 實時熒光定量RT-PCR

實時熒光定量RT-PCR比普通PCR靈敏度高10倍，還具有準確率高、重復性好、檢測速度較快的優點。但實驗需要精密度高的儀器和實驗水平高的工作人員。

7.6 納米PCR

在PCR的反應體系中加入納米金顆粒，納米金顆粒尺寸小，可調節DNA與聚合酶之間的特異性結合，間接的提高聚合酶濃度，有利于模板與引物的結合，提高目的基因的擴增效率，減少非特異性擴增，納米金顆粒導熱性更強，可縮短實驗時間，靈敏度和敏感性更優于實時熒光定量RT-PCR，操作簡便，且實驗成本較低，適用于臨床上快速診斷。

8 防治措施

如果發現病犬，應第一時間隔離，并清理排泄物，病死犬和排泄物要進行無公害處理，對犬舍和用具進行徹底的消毒，徹底切斷病毒的傳播。病犬要及時進行補液、止嘔、抗病毒和防止酸中毒等治療，同時采取與抗生素、消炎藥和球蛋白相配合的治療方法，避免繼發感染輪狀病毒和犬細小病毒，導致病情復雜，難以治療。病犬腸胃功能減弱，難以消化食物，應飼喂一些容易消化的食物，隨意飼喂會增加腸胃負擔，會導致病情難以康復。沒有特效藥可以治療犬冠狀病毒，多以預防為主，加強清潔消毒。最有效的預防措施是給健康犬提前注射犬冠狀病毒高免血清和犬免疫球蛋白。給妊娠犬注射疫苗，激發母源免疫，幼犬可以從胎盤和乳汁中獲得抗體，提高免疫力。加強日常飼養管理，尤其在犬冠狀病毒多發的冬季，定期清理消毒犬舍，多通風，但也應保持溫暖，不飼喂變質的飼料，不混用喂食器，不要將未吃完的飼料飼喂其他犬只。