灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病診斷中的應用

張潤蘭 王何生

【摘要】 目的 探討灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病患者中的診斷價值。方法 選取2020年11月—2022年1月疑似肺結核患者97例為研究對象，采集入組病例灌洗液，分別采用灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片進行抗酸染色，并在顯微鏡下找到抗酸桿菌為陽性。以羅氏固體培養結果作為“金標準”，比較灌洗液細胞蠟塊技術、細胞涂片及二者聯合在疑似肺結核患者抗酸桿菌中的檢出率；計算并繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic，ROC），分析不同檢查方法在感染性疾病中的診斷效能。結果 97例疑似肺結核患者經臨床檢查確診72例，確診率為74.23%。灌洗液細胞蠟塊技術檢查確診65例，檢查準確度為82.47%（80/97）；灌洗液細胞涂片檢查最終確診60例，檢查準確度為79.38%（77/97）；灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術聯合檢查確診肺結核70例，檢查準確度為91.75%（89/97）；灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊進技術聯合檢查在疑似肺結核患者中準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術聯合檢查（P<0.05）。結論 灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結核患者中均具有較高的檢出率，且二者聯合檢查能提高診斷靈敏度與特異度，為臨床診療提供參考依據。

【關鍵詞】 灌洗液細胞蠟塊技術；灌洗液細胞涂片；肺結核；診斷價值；感染性疾病

中圖分類號：R363? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）34-0116-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.34.038

肺結核是一種由結核分枝桿菌感染引起的呼吸系統傳染病，病灶主要發生在肺組織、氣管、胸膜部位[1]。常鑫等[2]研究表明，結核分枝桿菌感染肺部能引起肺結核，但感染肺結核患者不一定具備傳染性。同時，多數患者在結核分枝桿菌潛伏期無典型的臨床表現，對于活動性肺結核臨床多表現為咳嗽、咳痰、咯血和乏力等，導致臨床診療難度較大。目前，臨床對于肺結核的診斷主要依靠患者的癥狀、胸部影像學檢查、灌洗液細胞涂片、羅氏固體培養等，但是由于患者癥狀及影像學檢查缺乏特異性，羅氏固體培養耗時較長等，上述方法難以滿足肺結核的早期、快速診斷要求[3]。灌洗液細胞蠟塊是一種新型的輔助診斷方法，相比于傳統圖片制片技術更加有效；細胞蠟塊技術在難以取得組織標本且原發灶不明患者中，借助細胞蠟塊進行免疫組化染色并完成相應抗體的標記，有助于提高細胞學診斷準確性，但是該技術在感染性疾病中的診斷效能研究較少[4]。因此，本研究以疑似肺結核患者為對象，探討灌洗液細胞蠟塊在感染性疾病患者中的診斷價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年11月—2022年1月疑似肺結核患者97例為研究對象，其中男性56例，女性41例，年齡19～76歲，平均年齡（59.47±6.32）歲；體質量指數（body mass index，BMI）18～29 kg/m2，平均（22.57±3.41）kg/m2；臨床表現，咳嗽35例，咳痰24例，咯血8例，乏力47例；合并癥，高血壓7例，糖尿病4例，高脂血癥8例。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

納入標準：參考WS 288—2017《肺結核診斷標準》[5]中有關肺結核相關標準；羅氏固體培養結果完整，能配合完成灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片標本采集，患者均可耐受；病情穩定，能進行溝通和交流。

排除標準：血液系統疾病、既往結核病史或中途放棄診斷者；慢性咳嗽或嚴重肝腎功能異常者；器質性疾病、血液系統疾病或診斷前使用抗結核方案治療者。

1.2 方法 羅氏固體培養檢查。（1）檢測方法。將送檢的支氣管灌洗液用相當于1～2倍樣本體積的4%NaOH進行處理，羅氏固體培養基和對硝基苯甲酸（p-nitrobenzoic acid，PNB）培養基購自于珠海市銀科醫學工程有限公司，操作要嚴格遵循儀器與試劑盒說明書。（2）結果判定。連續培養8周無菌生長即報告培養陰性；培養8周后分離到菌株，根據參考檢驗規程完成PNB試驗。如果菌株在PNB培養基上生長，則鑒定為非結核分枝桿菌（nontuberculosis mycobacteria，NTM），反之為結核分枝桿菌。

灌洗液細胞涂片檢查。（1）細胞涂片抗酸染色。采集入組病例灌洗液進行灌洗液細胞涂片檢查，抗酸染色試劑盒購自于珠海貝索生物技術有限公司，操作要嚴格遵循儀器與試劑盒說明書。（2）結果判定。連續觀察300個不同視野，均未發現抗酸桿菌視為陰性；連續觀察300個不同的視野，至少發現1條抗酸桿菌則為陽性。

灌洗液細胞蠟塊檢查。采用灌洗液細胞蠟塊技術完成灌洗液檢查，即將采集的灌洗液標本放置在常溫環境中，靜置30 min，除去上層清液，并將下層液體倒入2支離心管中，如液體為血性液體時，可向液體中加入醋酸乙醇，充分混合均勻；將最終獲得的液體置入離心機中，連續完成10 min離心，操作完畢后，取出離心管并吸取上層清液。向離心管中加入質量分數為4%的甲醛溶液，充分混合均勻后，將其置于離心機中，連續進行10 min離心。離心完畢后，吸出上層清液，并濾出管中的沉淀物，經脫水處理后，常規進行石蠟包埋、染色及檢驗，檢測完畢后根據免疫組化學技術完成類別診斷，并在顯微鏡下找到抗酸桿菌為陽性。

以羅氏固體培養結果作為“金標準”，比較灌洗液細胞蠟塊技術、細胞涂片及二者聯合在疑似肺結核患者抗酸桿菌中的檢出率（檢測準確度）；計算并繪制ROC曲線，分析不同檢查方法在感染性疾病中的診斷效能（靈敏度、特異度、陽性及陰性預測值）。

1.3 統計分析 采用SPSS 24.0統計學軟件處理數據，計數資料采用百分比表示，行χ2檢驗，計量資料采用x±s表示，行t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 灌洗液細胞蠟塊技術在疑似肺結核患者中的價值 經臨床檢查，97例疑似肺結核患者中確診72例，確診率為74.23%。灌洗液細胞蠟塊技術檢查確診65例，檢查準確度為82.47%（80/97），靈敏度為83.33%（60/72），特異度為80.00%（20/25），陽性預測值為92.31%（60/65），陰性預測值為62.50%（20/32），見表1。

2.2 灌洗液細胞涂片檢查在疑似肺結核患者中的價值 灌洗液細胞涂片檢查最終確診肺結核60例，檢查準確度為79.38%（77/97），靈敏度為77.78%（56/72），特異度為84.00%（21/25），陽性預測值為93.33%（56/60），陰性預測值為56.76%（21/37），見表2。

2.3 灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術聯合在疑似肺結核患者價值 灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術聯合檢查確診肺結核70例，檢查準確度為91.75%（89/97），靈敏度為93.06%（67/72），特異度為88.00%（22/25）、陽性預測值為95.71%（67/70），陰性預測值為81.48%（22/27），見表3。

2.4 不同檢查方法及二者聯合在疑似肺結核患者中的效能比較 灌洗液細胞蠟塊技術聯合灌洗液細胞涂片檢查用于疑似肺結核患者中，檢查準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術檢查（P<0.05）。灌洗液細胞蠟塊技術檢查ROC曲線下與坐標軸圍成的面積（area under curve，AUC）為0.783，灌洗液細胞涂片檢查AUC值為0.791，灌洗液細胞蠟塊技術聯合灌洗液細胞涂片檢查AUC值為0.902，不同檢查方法AUC值比較差異具有統計意義（Z=6.492，P<0.05），見表4和圖1。

3 討論

肺結核是由結核分枝桿菌引起的慢性傳染病，能侵及諸多臟器，并以肺部結核最為常見[6]。ZHONG H等[7]研究表明，肺結核具有較強的傳染性，且排菌者為重要的傳染源，但人體感染結核菌后不一定發病，當抵抗力降低或細胞介導的變態反應增高時才會發病。羅氏固體培養是疑似肺結核患者常用的診斷方法，并將其視為“金標準”，能幫助患者早期確診[8]。本研究中，97例疑似肺結核患者經臨床檢查確診72例，確診率為74.23%。從本研究結果可以看出，羅氏固體培養能提高肺結核患者檢查確診率，能指導臨床診療，但是該檢查方法所需時間較長，對儀器設備要求較高。灌洗液細胞蠟塊技術用于肺結核診斷中，由于操作簡單在實驗室中廣泛開展。本研究中，灌洗液細胞涂片檢查最終確診肺結核60例，檢查準確度為79.38%（77/97），說明灌洗液細胞涂片用于肺結核診斷中具有一定價值，但是該檢查方法用于肺結核診斷中靈敏度和特異度不足，容易誤診或漏診。

灌洗液細胞蠟塊技術是一種新型的輔助診斷技術，采用離心固定切片的方式來聚集病原菌，病原菌的結構更加清晰，使得組織的結構與排列方式保持一致，避免細胞人為重疊，從而提高診斷準確性[9-10]。血性灌洗液細胞蠟塊技術能通過溶解紅細胞的方式清除對紅細胞造成的制片干擾，獲得的制片背景更加整潔、干凈，進而保證病原菌的完整性和核的特異性，有助于提升檢測的陽性檢出率。本研究中，灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊技術聯合檢查確診肺結核70例，檢查準確度為91.75%（89/97），由此可以看出灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片能提高肺結核檢查準確度。歐維正等[11]研究表明，運用細胞蠟塊制片技術對肺結核患者進行診斷時，有助于提高診斷準確性，且該方法是目前最為有效的檢測方法之一。細胞蠟塊制片重復性好，能提供更多相似于組織學和細胞的形態特點，且與灌洗液細胞涂片相比更加有效、準確。同時，對于細胞蠟塊制片技術難以取得組織標本和原發灶不明的患者，能進行免疫組織化學染色，對相應的抗體進行標記，有助于提升細胞學診斷準確性。臨床上將灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結核患者中，能發揮不同檢查方法優勢，彌補單一檢查存在的不足，提高臨床檢查陽性率[12]。本研究中，灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片聯合檢查在疑似肺結核患者中檢查準確度、靈敏度、特異度、陽性及陰性預測值高于灌洗液細胞涂片和灌洗液細胞蠟塊聯合檢查（P<0.05），且聯合檢查的AUC值大于各單獨檢查。從本研究結果中可以看出，灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片二者聯合檢查用于肺結核患者中，能發揮不同檢查方法的優勢，有助于提高診斷效能。

綜上所述，灌洗液細胞蠟塊技術和灌洗液細胞涂片用于疑似肺結核患者中均具有較高的檢出率，且二者聯合檢查能提高診斷靈敏度與特異度，為臨床診療提供參考依據。

參考文獻

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（收稿日期：2023-10-09）