免疫組化檢測磷脂酰肌醇蛋白多糖-3與細胞角蛋白-19在肝細胞癌診斷中的應用價值分析

楊麗英 朱杰

【摘要】 目的 探討免疫組化檢測磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（human glypican-3，GPC-3）、細胞角蛋白-19（cytokeratin-19，CK-19）在肝細胞癌診斷中的應用價值。方法 選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫院收治的103例疑似肝細胞癌患者為研究對象，所有患者均進行免疫組化檢測GPC-3與CK-19，并以病理檢查結果為金標準，計算免疫組化檢測GPC-3、CK-19對肝細胞癌的診斷效能。比較不同病灶直徑、分化程度的腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達情況。結果 GPC-3檢測診斷肝細胞癌的靈敏度、特異度、準確度分別為86.1%（62/72）、80.6%（25/31）、84.5%（87/103），CK-19檢測診斷肝細胞癌的靈敏度、特異度、準確度分別為81.9%（59/72）、74.2%（23/31）、79.6%（82/103），二者比較差異均無統計學意義（P>0.05）。Kappa檢驗分析結果顯示，GPC-3、CK-19檢測診斷肝細胞癌與病理檢查結果的一致性中等（Kappa值=0.644、0.537，P<0.05）。病灶直徑≥5 cm腫瘤組織中的GPC-3、CK-19的陽性表達率顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織，差異有統計學意義（Z=-2.808、-2.761，P<0.05）。中低分化腫瘤組織中GPC-3、CK-19的陽性表達率顯著高于高分化腫瘤組織，差異有統計學意義（Z=-4.883、-2.353，P<0.05）。結論 免疫組化檢測GPC-3、CK-19對肝細胞癌具有一定的診斷價值，二者在病灶組織中的表達可能與病灶大小、分化程度有關。

【關鍵詞】 免疫組化；GPC-3；CK-19；肝細胞癌

Analysis of the application value of immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma

Yang Liying， Zhu Jie. Southern Central Hospital of Yunnan Province （Honghe First People's Hospital），Honghe， Yunnan? 661199

【Abstract】 Objective To explore the application value of immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma. Methods 103 patients with suspected hepatocellular carcinoma admitted to Southern Central Hospital of Yunnan Province from January 2010 to June 2022 were selected as study subjects. All patients were detected by immunohistochemistry for GPC-3 and CK-19， and the diagnostic efficacy of immunohistochemistry for hepatocellular carcinoma was calculated based on the pathological results as the gold standard. The expression of GPC-3 and CK-19 in tumor tissues with different lesion diameters and differentiation degrees were compared. Results The sensitivity， specificity and accuracy of GPC-3 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were 86.1% （62/72）， 80.6% （25/31） and 84.5% （87/103）， the sensitivity， specificity and accuracy of CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were 81.9% （59/72）， 74.2% （23/31） and 79.6% （82/103）， there was no significant difference between the two indexes（P>0.05）. Kappa test analysis results showed that GPC-3 and CK-19 were moderately consistent with pathological Results in the diagnosis of hepatocellular carcinoma （Kappa values=0.644， 0.537，P<0.05）. The positive expression rate of GPC-3 and CK-19 in tumor tissues with lesion diameter ≥ 5cm was significantly higher than that in tumor tissues with lesion diameter<5cm（Z=-2.808，-2.761，P<0.05）. The positive expression rates of GPC-3 and CK-19 in medium and low differentiated tumor tissues were significantly higher than those in high differentiated tumor tissues（P<0.05）. Conclusion Immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 has certain diagnostic value for hepatocellular carcinoma. The expression of GPC-3 and CK-19 may be related to the size and differentiation of the lesion.

【Key Words】 Immunohistochemistry； GPC-3； CK-19； Hepatocellular carcinoma

中圖分類號：R446.6? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1672-1721（2023）34-0113-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.34.037

隨著我國人口老齡化進程的加快和人們飲食結構的改變，肝癌的臨床發病率和致死率呈逐漸升高趨勢，給患者身心健康、生活質量和生命安全帶來了極大的影響[1-2]。但是，在實際臨床中，由于肝癌發病早期并無明顯的特異性癥狀表現，多數患者在確診時已經處于中晚期階段，錯失了最佳手術治療時機，導致預后不佳。因此，加強肝癌的早期篩查具有重要的臨床意義。GPC-3屬于一種癌胚蛋白，與腫瘤細胞的生長增殖、分化密切相關；CK-19是近年來發現的一種新的腫瘤標志物，尤其在非小細胞肺癌、食管癌等疾病的診斷中具有一定的參考價值。有研究指出[3-5]，檢測肝癌病灶組織中GPC-3和CK-19的表達可以反映腫瘤細胞的分化程度和浸潤性，用于鑒別、診斷肝癌的靈敏度和準確度較高。基于此，本研究選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫院收治的103例疑似肝細胞癌患者為研究對象，分析了免疫組化檢測GPC-3與CK-19對肝細胞癌的診斷價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫院收治的103例疑似肝細胞癌患者為研究對象，其中男性63例，女性40例；年齡45～72歲，平均年齡（59.18±6.33）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準，且患者及其家屬對免疫組化驗查、病理檢查以及相關注意事項均知情同意。

納入標準：經臨床診斷、實驗室指標檢測和影像學檢查后診斷為高度可疑肝細胞癌的患者；生命體征平穩；具備正常的溝通能力和理解能力；依從性良好。

排除標準：存在其他已確診的惡性腫瘤患者；存在穿刺或手術禁忌證者；伴有嚴重的肝功能、腎功能不全者；凝血功能障礙或存在嚴重的出血傾向者；上消化道出血患者；自愿退出者。

1.2 方法 對所有入組患者進行病灶組織取樣，取樣后進行固定、脫水、透明、包埋、切片等前期處理，獲取切片樣本后進行GPC-3、CK-19檢測。

GPC-3檢測，采用EnVision兩步法檢測，將獲取的切片樣本經烤片、脫蠟、逐級乙醇處理后置入質量分數為3%的過氧化氫溶液中浸泡5 min，隨后取出用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗3次，每次沖洗5 min。沖洗結束后，將樣本放入檸檬酸緩沖液（pH值=6.0）中使用高壓鍋進行高溫高壓修復，持續加熱直到高壓鍋出氣，2 min后調為中火繼續加熱，關火后繼續燜10 min，再取出置于溫水中冷卻至37 ℃。冷卻后，使用PBS沖洗3次，每次5 min，再加入GPC-3一抗，放入4 ℃的低溫冰箱中保存一夜。次日再使用PBS沖洗3次，每次5 min，使用二氨基聯苯胺顯色，隨后經PBS終止染色后以乙醇由低到高濃度逐級脫水處理后加入二苯甲，常規封片。

CK-19檢測，前期處理與GPC-3檢測的步驟一致，經檸檬酸緩沖液高溫高壓修復后進行冷卻，并在冷卻至37 ℃后進行胃酶消化，隨后使用PBS沖洗3次，每次5 min，再加入CK-19一抗，放入4 ℃的低溫冰箱中保存一夜。后續處理與GPC-3檢測的步驟一致。

1.3 評價標準 GPC-3陽性表達標準為，細胞質或細胞膜染色呈黃色或棕黃色，若陽性細胞占比<10%為陰性（-），10%～30%為弱陽性（+），31%～60%為陽性（++），>60%為強陽性（+++）。

CK-19陽性表達標準為，上皮細胞質染色呈黃色或棕黃色，若陽性細胞占比<10%為陰性（-），10%～30%為弱陽性（+），31%～60%為陽性（++），>60%為強陽性（+++）。

1.4 觀察指標 以病理檢查結果為金標準，計算免疫組化檢測GPC-3、CK-19診斷肝細胞癌的靈敏度、特異度和準確度，評估二者對肝細胞癌的診斷效能。根據病理檢查結果，比較不同病灶直徑、分化程度的腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達情況。

1.5 統計學方法 采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以x±s表示，采用t檢驗；計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗或秩和檢驗；采用Kappa檢驗分析GPC-3、CK-19檢測診斷肝細胞癌與病理檢查結果的一致性；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化檢測GPC-3、CK-19對肝細胞癌的診斷效能比較 GPC-3檢測診斷肝細胞癌的靈敏度為86.1%（62/72）、特異度為80.6%（25/31）、準確度為84.5%（87/103），CK-19檢測診斷肝細胞癌的靈敏度為81.9%（59/72）、特異度為74.2%（23/31）、準確度為79.6%（82/103），二者比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1—表3。Kappa檢驗分析結果顯示，GPC-3、CK-19檢測診斷肝細胞癌與病理檢查結果的一致性中等（Kappa值=0.644、0.537，P<0.05）。

2.2 不同病灶直徑腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達情況比較 病灶直徑≥5 cm腫瘤組織中的GPC-3、CK-19的陽性表達率顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

2.3 不同分化程度腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達情況比較 中低分化腫瘤組織中GPC-3、CK-19的陽性表達率顯著高于高分化腫瘤組織，差異有統計學意義（P<0.05），見表5。

3 討論

肝癌是指發生在肝臟的原發性或轉移性惡性腫瘤，從形態學和細胞遺傳學角度來看，肝癌可分為肝細胞癌、肝內膽管細胞癌以及肝細胞癌合并肝內膽管細胞癌3種，其中以肝細胞癌最為常見[6]。相比較而言，肝細胞癌惡性程度較高，患者病情進展快，預后更差，而且大多數患者在發病早期以腹痛腹脹、高熱、肝區疼痛等非特異性癥狀為主，容易被誤診為肝硬化。近年來，GPC-3、CK-19作為肝癌標志物在臨床研究中被廣泛報道，它們被認為可作為早期診斷肝癌和預后評估的有效指標[7-8]。有研究指出[9]，GPC-3、CK-19在單純肝細胞癌與良性肝臟病變組織中的陽性表達率存在顯著性差異，尤其在正常的肝組織中，GPC-3的陽性表達率基本為0%。莫小滔[10]選取了40例肝細胞癌患者為研究對象，采集病灶組織和癌周組織后采用免疫組化檢測2種組織中GPC-3和CP-19的表達，結果顯示，病灶組織中的GPC-3陽性表達率（85.00% vs 22.50%）和CK-19陽性表達率（20.00% vs 0%）均顯著高于癌周組織（P<0.05）。

GPC-3是磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族成員之一，目前已被證實在肝細胞癌組織和血清中均呈高表達，它可通過糖基磷脂酰肌醇與靶細胞結合，介導細胞內Wnt/β-catenin信號促進胰島素樣生長因子-Ⅱ分泌，造成肝細胞異常生長增殖，導致肝細胞癌變[11]。CK-19是一種表達于膽管上皮細胞的細胞角蛋白，該物質可通過介導核因子-κB（NF-κB）信號通路影響P53、IKKβ等基因的表達，進而促進肝細胞癌上皮細胞-間充質的轉化，增加癌細胞的轉移、浸潤能力[12]。也有研究指出[13]，CK-19可以促進細胞外基質與細胞纖維骨架連接，提高肝癌腫瘤細胞的遷移能力。本研究結果顯示，GPC-3檢測診斷肝細胞癌的靈敏度、特異度、準確度分別為86.1%、80.6%、84.5%，CK-19檢測診斷肝細胞癌的靈敏度、特異度、準確度分別為81.9%、74.2%、79.6%，二者比較差異無統計學意義（P>0.05），且Kappa檢驗顯示二者診斷肝細胞癌與病理檢查結果的一致性中等（P<0.05）。由此可見，免疫組化檢測GPC-3、CK-19對肝細胞癌具有一定的診斷價值，可作為臨床輔助診斷肝細胞癌的有效指標，與王澤英[14]的研究結果相符。

在國內的一項研究中，王娟等[15]選取了98例肝癌患者為研究對象，采集病灶組織后進行免疫組化檢測GPC-3、CK-19發現，低分化、中分化肝細胞癌組織中GPC-3（92.31% vs 88.37% vs 53.33%）、CK-19（30.00% vs 30.51% vs 8.52%）的陽性率顯著高于高分化肝細胞癌組織（P<0.05），認為GPC03、CK-19的表達情況可以反映肝細胞癌的分化程度，這在本研究中也得以體現。本研究結果顯示，病灶直徑≥5 cm腫瘤組織和中低分化腫瘤組織的GPC-3、CK-19的陽性表達率均顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織和高分化腫瘤組織（P<0.05）。這表明，GPC-3、CK-19的陽性表達與肝細胞癌患者病情進展有關。宋微珩等[16]研究也指出，GPC-3在中低分化組織中的陽性檢出率為100.00%，明顯高于高分化組織陽性檢出率69.23%（P<0.05）。從這些研究結果中可以看出，GPC-3、CK-19的表達可能對評估患者病情和預后具有指導意義。

綜上所述，免疫組化檢測GPC-3、CK-19對肝細胞癌具有一定的診斷價值，二者在病灶組織中的表達可能與病灶大小、分化程度有關，可作為臨床早期診斷肝細胞癌和病情評估的免疫組化指標。

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（收稿日期：2023-10-09）