基于網絡藥理學與分子模擬的“黃芪補肺飲”協同氧化及3D打印研究

摘 要： 采用網絡藥理學和分子對接技術對“黃芪補肺飲”調節氧化應激分子機制進行研究，篩選出主要活性成分（山柰酚、槲皮素、豆甾醇）和核心靶點（AKT1、MMP9、CASP3），通過基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析，從分子水平推測其在“黃芪補肺飲”抗氧化應激過程中的作用。分子對接結果顯示：活性成分與靶點均能結合形成穩定構象，揭示了“黃芪補肺飲”多成分、多靶點、多通路的特點與優勢。聯合指數的體外抗氧化實驗表明：烏梅、黃芪、五味子、麥冬的最佳配比為4∶1∶1∶4，具有最高清除率及最佳協同效果。利用3D打印技術將最佳配比的“黃芪補肺飲”制成凝膠，能提高其便捷性和緩釋能力，為傳統食療的規模化生產提供了新思路。

關鍵詞： 黃芪補肺飲;氧化應激;網絡藥理學;分子對接;抗氧化能力;聯合指數

中圖分類號： TS 972.161"" 文獻標志碼： A"" 文章編號：

2095-8730（2024）03-0088-09

氧化應激是指在內外環境發生變化時，機體內氧化系統與抗氧化系統間的動態平衡被破壞，導致活性氧過量而出現的病理狀態［1］。ZHA等［2］的研究發現，持續累積的氧化應激會促進病程和早衰。研究表明，抑制氧化應激對于慢性阻塞性肺疾病［3］、心血管疾病［4］、糖尿病［5］等多種慢性病患者來說都是一種有效手段。然而，迄今為止，并沒有足夠的針對氧化應激的調節手段。雖然在藥物治療方面已經有如天麻素注射液與吡咯烷酮類藥物的聯合治療［6］方式，維生素D［7］和維生素E［8］等可以有效調節氧化應激的治療方法，但這些西藥不總是有效并且可能會帶來副作用［9-10］。因此尋找針對氧化應激的安全有效的輔助調節方法迫在眉睫。

近年來，藥食同源養生理念備受青睞，廣泛用于預防和治療慢性疾病［11］。“黃芪補肺飲”是中華民族食療養生文化瑰寶之一，由黃芪、麥冬、五味子、烏梅煎煮制成。其中，黃芪、烏梅于2021年被國家衛生健康委員會列為藥食同源食品，而麥冬、五味子被列于可用于保健食品的中藥名單。從中醫視角看，氧化應激是肺部疾病發病過程中的一個重要環節［12］，因此本研究借助補肺方“黃芪補肺飲”研究其抗氧化應激效果，為開發“黃芪補肺飲”新的應用方式提供有益參考。本方以黃芪補肺、益氣、固表，輔以五味子、烏梅、麥冬，具有調節體內氧化還原狀態的生物活性功能［13］。近年來，已有大量體內外研究表明，黃芪、麥冬、五味子和烏梅中的活性成分可輔助調節氧化應激。如HAO等［14］發現黃芪中的主要活性物質黃芪甲苷IV對大鼠視網膜神經節細胞中的由H2O2誘導的氧化應激具有潛在的保護作用。WU等［15］通過體內實驗發現麥冬不但可以抑制炎癥和氧化應激，還能通過這種抑制作用改善阿霉素誘導的慢性心力衰竭。五味子和烏梅也已被證實具有抗氧化應激效果［16-17］。上述研究皆表明“黃芪補肺飲”對氧化應激有輔助調節作用，但其抗氧化應激的具體作用機制尚不明確，關鍵活性成分和靶點仍有待確認。因此，本研究采用網絡藥理學與分子模擬，從分子層面上對“黃芪補肺飲”輔助調節氧化應激的機制進行探究。

3D打印技術作為一項重要的新型加工技術，可以設計出造型獨特、營養配比精準、滿足個性化定制需求的新型食品，具有廣闊的發展前景。普通水凝膠物理性能較差，穩定性相對不足，而3D打印水凝膠結合了3D打印和水凝膠的優點，機械強度高，備受研究人員的關注［18］。YAN等［19］從中藥中提取活性多糖和羧甲基殼聚糖并將其制成3D打印凝膠。KOSHOVYI等［20］將桉樹水提取物納米乳化后與聚環氧乙烷混合制成具有克服葡萄球菌感染的3D打印凝膠。故而本項目擬采用3D打印技術，通過配方優化將“黃芪補肺飲”制成強度適宜且穩定性好的可食用凝膠，提高其食用便捷性，進而為其規模化生產奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1 材料與試劑

黃芪、麥冬、五味子、烏梅：江蘇揚州聯誼農副產品批發市場;乙醇：上海碧云天生物技術股份有限公司;橄欖油、高酰基植物凝膠、海藻酸鈉、過硫酸鉀（K2S2O8）、2，2-聯氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）：上海源葉生物科技有限公司。

1.1.2 儀器與設備

SS-1022型高速多功能粉碎機：武義海納電器有限公司;DHG-9076A型電熱恒溫鼓風干燥箱：上海精宏實驗設備有限公司;Infinite F50酶標儀：帝肯（上海）貿易有限公司;UV-6100S型紫外可見分光光度計：上海美譜達儀器有限公司;1-14K型離心機：北京博勱行儀器有限公司;KQ5200型超聲機：昆山市超聲儀器有限公司;LuckyBot ONE型食品3D打印機：南京威布三維科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 藥膳的活性成分及靶點收集

運用TCMSP數據庫分別檢索“黃芪補肺飲”中的4種藥材，以黃芪（Hedysarum multijugum maxim）、麥冬（Ophiopogon japonicus）、五味子（Schisandrae chinensis fructus）、烏梅（Mume fructus）為關鍵詞初步獲取活性成分，同時對文獻中報道的活性成分進行補充［21-22］。以口服生物利用度（Oral bioavailability， OB）≥30％和類藥性指數（Drug-likeness， DL）≥0.18為篩選條件確定活性成分。檢索活性成分對應的靶點信息并將所得靶點在Uniprot數據庫中以“Homo sapiens”為限制條件轉換為統一形式。

1.2.2 篩選氧化應激相關靶點和“黃芪補肺飲-氧化應激”交叉靶點

以“氧化應激”為關鍵詞分別在GeneCards數據庫以及OMIM數據庫中搜索獲得氧化應激的潛在靶點。篩選出氧化應激和“黃芪補肺飲”的交叉靶點，并導入STRING 11.0，物種限定為“Homo sapien”，獲取中等置信度（大于等于0.4）的蛋白質相互作用信息。

1.2.3 “黃芪補肺飲-活性成分-靶點”網絡圖繪制及核心靶點篩選

利用Cytoscape 3.9.1構建“黃芪補肺飲-活性成分-靶點”網絡，其中節點代表關鍵化合物和靶點，邊代表節點之間的相互作用關系。為了系統地分析該網絡，MCODE、Centiscape 2.2和NetworkAnalyzer插件被用于聚類分析和核心靶點篩選。設置標準為度截止值（Degree Cutoff）為2、節點得分截止值（Node Score Cutoff）為0.5和K值（K-Core）為2，選出網絡中的核心聚類模塊（Cluster）。通過Centiscape 2.2插件計算網絡拓撲參數介度中心性（Betweenness）、接近中心性（Closeness）和借助度中心性（Degree），得到核心靶點。

1.2.4 基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集的分析

通過DAVID 6.8數據庫對共同靶點進行在線基因ID轉換，并對其進行生物學過程（Biological process，BP）、細胞成分（Cellular component，CC）及分子功能（Molecular function，MF）的GO和KEGG富集分析，以校正后P值lt;0.05為條件進行“黃芪補肺飲”抗氧化應激的生物學過程和信號通路分析。

1.2.5 分子對接

分別從PubChem及蛋白質結構數據庫（Protein Data Bank，PDB）獲取關鍵活性成分和靶點的3D結構文件。使用AutoDock Tools 1.5.6軟件去水加氫，采用AutoDock Vina對關鍵活性成分和靶點進行分子對接，計算最佳結合能并利用PyMol對結合模式進行可視化分析［23］。

1.2.6 抗氧化活性試驗

1.2.6.1 “黃芪補肺飲”抗氧化物質提取

煎水取汁是“黃芪補肺飲”的常規制作方法，其雖能提取“黃芪補肺飲”中的有效成分，但效率相對較低［24］。為了更高效地提取“黃芪補肺飲”中的有效成分，縮短提取時間，本研究對“黃芪-麥冬-五味子-烏梅”粉末進行加熱超聲，以更高效地模擬實際情況。參照任晨汐等［25］的方法，分別將黃芪、麥冬、五味子、烏梅置于60 ℃的烘箱中烘干12 h，粉碎后過0.25 mm篩，以料液比1∶10（g／mL）加入超純水，置于50 ℃、超聲功率300 W條件下提取20 min，以8 000 r／min的轉速離心10 min，取上清液為待測液。

1.2.6.2 “黃芪補肺飲”復配方式篩選

參照李小龍等［26］的方法，對黃芪、麥冬、五味子、烏梅進行混料設計中的極端頂點設計（表1），結合抗氧化試驗以及聯合指數進行“黃芪補肺飲”最佳配比優化。

1.2.6.3 ABTS+自由基清除率的測定

參照BINSAN等［27］的方法，將7 mmol／L ABTS和2.45 mmol／L K2S2O8等體積混勻，常溫避光放置12～16 h，用95％乙醇稀釋至405 nm處吸光度為1.4，得到ABTS+溶液，分別移取10 μL質量濃度為20、40 mg／mL的不同配比“黃芪補肺飲”水提液，與200 μL ABTS工作液充分混合，在室溫下靜置2～6 min，通過公式計算ABTS+自由基清除率［27］。選出清除率較高的“黃芪補肺飲”組別，分別移取10 μL質量濃度為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg／mL的不同配比“黃芪補肺飲”水提液，重復上述操作。

ABTS+自由基清除率（％）=1-A1-A2A0×100（1）

式中：A1表示移取10 μL不同質量濃度的提取樣液，加入200 μL ABTS 工作液并混合均勻，室溫避光反應20 min，于405 nm條件下測定上清液的吸光度值;A0表示用10 μL蒸餾水代替樣液，測定405 nm處的吸光度值;A2表示用200 μL蒸餾水代替ABTS溶液，測定405 nm處的吸光度值。

1.2.6.4 “黃芪-麥冬-五味子-烏梅”聯合指數計算

參照CHOU等［28］的方法，通過計算聯合指數（Combination Index，CI）評價協同作用。聯合指數越低，協同效果最好。基于等效作用和中值定理計算 CI 值，計算公式如下：

CI=D1（Dx）1+D2（Dx）2+…+Dn（Dx）n（2）

式中：D1，D2，…，Dn 表示n種組分聯合作用時，抑制率為50％的每個組分各自的作用濃度;（Dx）1，（Dx）2，…，（Dx）n 表示n種組分單獨作用時，抑制率為50％的作用濃度;CI=1、CIlt;1和CIgt;1分別表示受試物具有加合、協同和拮抗作用。

1.2.7 “黃芪補肺飲”3D打印凝膠的制備

參照ZHOU等［29］的方法，稱取1.0 g海藻酸鈉粉末、2.6 g高酰基植物凝膠、適量的橄欖油，緩慢連續加入至97 mL含“黃芪補肺飲”20 mg／mL水提液中，室溫下經300 r／min轉速機械攪拌10 min，得到均勻的混合物。3D 打印機的噴頭直徑為0.5 mm，打印速度為5 mm／s，打印溫度為25 ℃。構建40 mm×40 mm×5 mm（長×寬×高）的3D打印立方體模型，底部三層填充密度為100％，內層的填充密度為50％，頂層設置多個5 mm×5 mm×2 mm（長×寬×高）的立方體空隙，立方體之間的間隔為4 mm。將制備的質地均勻的混合物通過3D打印機制成“黃芪補肺飲”3D打印凝膠。

1.2.8 統計分析

重復實驗3次，采用SPSS 24.0軟件進行IC50的預測，采用CompuSyn軟件進行聯合指數的計算，采用Origin 2021作圖。

2 結果與分析

2.1 “黃芪補肺飲”有效成分及靶點的篩選

以OB≥30％和DL≥0.18為篩選條件，刪除重復項后，從TCMSP數據庫和相關參考文獻中共篩選出44個“黃芪補肺飲”的有效活性成分，度值（Degree）排名前10的活性成分見表2。在這44個化合物中，黃芪含有17個、五味子含有8個、烏梅含有8個、麥冬含有14個，其中3種化合物山柰酚、槲皮素、豆甾醇來源于“黃芪補肺飲”中的多種食材，可能是“黃芪補肺飲”中具有抗氧化應激作用的關鍵活性成分。從TCMSP數據庫中收集“黃芪補肺飲”活性成分相關靶點，通過UniProt數據庫進行基因名標準化，得到293個相關靶點。

2.2 氧化應激相關靶點以及“黃芪補肺飲-氧化應激”交叉靶點的獲取

在DisGeNET、OMIM數據庫中輸入關鍵字“Oxidative stress”，分別獲得4 954個和203個氧化應激靶點（圖1.A）。刪除重復項后，共得到5 094個氧化應激靶點。如圖1.B所示，氧化應激和黃芪補肺飲共有222個交叉靶點，由此可初步推測，“黃芪補肺飲”通過“多成分-多靶點”網絡調節氧化應激。

2.3 “黃芪補肺飲-活性成分-靶點”網絡分析

在Cytoscape 3.9.1中構建“黃芪補肺飲-活性成分-靶點”調控網絡并通過Degree值分別對活性成分和靶點進行排序。其中橢圓形代表活性成分，矩形代表活性靶點，邊代表節點之間的相互作用關系。如附圖1所示，“黃芪-麥冬-五味子-烏梅”44個活性成分和293個靶點之間共涉及341個節點和1 042條邊。其中，Degree值最高的活性成分是槲皮素（MOL000098）、山柰酚（MOL000422）、豆甾醇（MOL000449），可能在調節氧化應激中發揮重要作用。

2.4 核心團簇及核心靶點的篩選

為了進一步可視化和分析“黃芪補肺飲-活性成分-靶點”，運用Cytoscape 3.9.1中的MCODE算法，將目標分為5個獨立的團簇，核心團簇1由95個節點和2 495個相互作用（邊）組成;核心團簇2由33個節點和121個相互作用（邊）組成;核心團簇3由40個節點和123個相互作用（邊）組成;核心團簇4由9個節點和13個相互作用（邊）組成;核心團簇5由3個節點和3個相互作用（邊）組成，具體節點如表3所示。通過Centiscape 2.2插件計算網絡拓撲參數Betweenness、Closeness和Degree并進行排序（表4）。選擇排名最高的AKT1（n=91）、MMP9（n=90）、CASP3（n=89）作為核心靶點。

2.5 GO富集分析

為了進一步探索“黃芪補肺飲”抗氧化應激的潛在機制，通過DAVID 6.8數據庫進行GO富集分析。按-lgP由大到小排名，取排名前5的通路進行GO富集分析。雌激素反應（GO：0032355）、衰老（GO：0007568）、蛋白質磷酸化的正調控（GO：0001934）、細胞缺氧反應（GO：0071456）、細胞遷移的正調控（GO：0030335）等生物學過程在參與氧化應激的調控中起主要作用。HUANG等［30］研究發現，良好地調節氧化應激可以促進血管生成和組織修復。SROUGI等［31］的研究同樣證實氧化應激能積極調節細胞遷移。細胞組分集中于線粒體膜（GO：0031966）、突觸（GO：0045202）、GABA-A受體復合物（GO：1902711）、受體復合物（GO：0043235）、突觸后膜（GO：0099055）等成分。其中，RAZA［32］、SCHEFF等［33］的研究同樣論證了調節氧化應激過程中有胞質溶膠、突觸后膜的參與。分子功能富集在類固醇激素受體（GO：0003707）、轉錄輔因子結合（GO：0001221）、雌激素反應元件結合（GO：0034056）、細胞外配體門控離子通道活性（GO：0005230）、蛋白酶結合（GO：0002020）等。其中，核心靶點MMP9能通過抑制線粒體損傷和氧化應激來減弱瓣膜間質細胞的鈣化，從而體現出在CAVS進展過程中線粒體代謝和氧化應激中的潛在作用［34］。

2.6 KEGG富集分析

KEGG富集分析顯示，“黃芪補肺飲”可以影響多通道，其中與氧化應激相關性較高的包括朊病毒病（hsa05020）、細胞衰老（hsa04218）、糖尿病性心肌病（hsa05415）、胰腺癌（hsa05212）、膀胱癌（hsa05219）、阿爾茨海默病（hsa05010）、卡波西肉瘤相關皰疹病毒感染（hsa05167）、TNF信號通路（hsa04668）、神經退行性變的途徑-多種疾病（hsa05022）、人巨細胞病毒感染（hsa05163）、IL-17信號通路（hsa04657）、前列腺癌癥（hsa05215）、化學致癌-受體激活（hsa05207）、非酒精性脂肪肝（hsa04932）、流體剪切應力與動脈粥樣硬化（hsa05418）、乙型肝炎（hsa05161）、脂質與動脈粥樣硬化（hsa05417）、AGE-RAGE信號通路在糖尿病并發癥中的作用（hsa0493）、化學致癌作用-活性氧（hsa05208）、癌癥的發病途徑（hsa05200）等。其中，GALKIN［35］等研究發現TNF信號通路會引起異常活化，從而導致內表皮細胞的損傷及凋亡，而線粒體靶向抗氧化劑SkQR1可以抑制TNF信號通路，表明TNF信號通路是抑制氧化應激的主要途徑。因此，“黃芪補肺飲”可能通過上述途徑發揮其抗氧化應激的作用。

2.7 分子對接

基于上述網絡藥理學分析，分別獲得了三個關鍵活性成分和靶點。為進一步研究“黃芪補肺飲”的抗氧化應激作用，采用AutoDock Vina軟件進行分子對接，從而探究關鍵活性成分與靶點之間的結合行為。如附表1所示，關鍵活性成分與靶點之間的結合能都低于-5 kcal／mol，表明關鍵靶點AKT1、MMP9和CASP3能夠分別與活性成分山柰酚（MOL000422）、槲皮素（MOL000098）和豆甾醇（MOL000449）穩定結合。槲皮素與MMP9形成了以范德華力、氫鍵、Pi-陽離子、π-σ相互作用、π-π堆疊、Pi-烷基等作用力共同驅動的復合物，結合能最低（-10.7 kcal／mol），結合構象最穩定，表明其在“黃芪補肺飲”抗氧化應激過程中作用顯著，具有極大的應用潛力。此外，已有研究證實豆甾醇的抗氧化作用［36］，其同樣與本研究篩選出的核心靶點具有相當廣譜的親和力（結合能lt;-7 kcal／mol）。MMP9是一種重要的蛋白水解酶，主要參與細胞外基質的降解和重塑，是線粒體代謝紊亂和氧化應激的新型生物標志物［37］。本研究中，3種活性成分在與MMP9結合時均呈現出穩定的結合構象（結合能lt;-9 kcal／mol），顯示出較高的親和力。綜上，分子對接結果顯示，“黃芪補肺飲”的主要活性成分和靶點都能自發且穩定結合，進一步論證了“黃芪補肺飲”抗氧化應激的功能。

2.8 抗氧化指標測定

2.8.1 黃芪、麥冬、五味子和烏梅的抗氧化能力

在ABTS+自由基清除試驗中，烏梅、黃芪、五味子、麥冬的 IC50 值分別是0.269 mg／mL、1.176 mg／mL、0.874 mg／mL和0.602 mg／mL。其中，烏梅的ABTS+自由基清除能力最強，而黃芪的ABTS+自由基清除能力最弱。

2.8.2 “黃芪補肺飲”的配比優化

為了選出“黃芪補肺飲”自由基清除能力的最佳配比，參照表1進行不同配比“黃芪補肺飲”的ABTS+自由基清除實驗，結果表明，第1、8、9、10、12組的清除率在40 mg／mL時就已經超過90％，明顯高于其他組（在20mg／mL時，ABTS+自由基清除率分別為60％、72％、94％、95％和95％，在40 mg／mL時，ABTS+自由基清除率分別為96％、97％、95％、98％和95％）。所以進一步將第1、8、9、10、12組的樣液稀釋50倍，繼續測定ABTS+自由基清除率。如圖2所示，第1、10、12組顯示出較高的ABTS+自由基清除率。

2.8.3 不同“黃芪補肺飲”復配體系的協同作用評價

眾所周知，食材按照不同比例進行復配可能會出現不同的相互作用（協同、加合、拮抗）。因此，本研究基于聯合指數探究“黃芪補肺飲”按不同比例復配后的ABTS+清除效果，以期選出“黃芪補肺飲”的最佳配比［38-40］。對第1、10、12組進行聯合指數的計算，發現CI值均小于1（第1、10、12組的CI值分別為0.375、0.714、0.261），表明第1、10、12組復配體系皆為協同作用。第12組的ABTS+自由基清除率最高，且協同效果最好，所以第12組是“黃芪補肺飲”的最佳配比。

2.9 “黃芪補肺飲”凝膠3D打印

最佳配比“黃芪補肺飲”的3D凝膠打印樣品見圖3。在橄欖油濃度優化過程中發現，當橄欖油濃度降低為1～2 mL時，由于凝膠強度過高，在打印過程中出現堵塞噴嘴的情況，導致凝膠細絲擠出時連續性差、成品外觀出現毛刺和缺陷。當橄欖油濃度升高為4～5 mL時，打印凝膠出現坍塌，自支撐能力差。隨著橄欖油濃度的增加，擠出流暢度呈上升趨勢但自支撐能力呈下降趨勢。濃度過高不利于自支撐性，濃度過低不利于擠出性。考慮到擠出性和自支撐性之間的矛盾，發現橄欖油濃度為3 mL時凝膠強度適宜，在打印過程中未出現堵塞3D打印機噴嘴的情況，凝膠細絲能夠連續擠出且速度適宜。打印樣品效果圖光滑平整，外壁基本垂直，外觀上幾乎沒有缺陷，在打印完成后也能自我支撐并保持一定高度，具有良好的穩定性。

綜上所述，基于前期預實驗，確定以1.0 g海藻酸鈉粉末、2.6 g高酰基植物凝膠、3 mL的橄欖油混合97 mL含20 mg／mL的“黃芪補肺飲”為配方的3D打印凝膠的打印效果較好，有大規模投入市場的可能性。

3 結論

“黃芪補肺飲”由黃芪、麥冬、五味子、烏梅煎煮制成，具有補肺、益氣、固表等多種生物活性功能。采用網絡藥理學和分子對接等技術對其調節氧化應激的分子機制進行研究，利用TCMSP數據庫收集“黃芪補肺飲”的活性成分及對應靶點，在GeneCards、OMIM數據庫中獲取氧化應激相關靶點。借助Cytoscape 3.9.1構建“黃芪補肺飲-活性成分-靶點”網絡并篩選關鍵靶點，利用AutoDock Vina對關鍵靶點與活性成分進行分子對接并評估其結合能力與作用模式，進而采用聯合指數的體外抗氧化實驗確定“黃芪補肺飲”的最佳配比。以此為基礎，按1.0 g海藻酸鈉粉末、2.6 g高酰基植物凝膠、3 mL的橄欖油、97 mL 20 mg／mL“黃芪補肺飲”的配比進行3D打印可食用凝膠制備。網絡藥理學結果表明，山柰酚、槲皮素、豆甾醇為“黃芪補肺飲”主要活性成分，AKT1、MMP9和CASP3為核心靶點，且均具有較高結合能。基于聯合指數的體外抗氧化實驗結果表明，烏梅、黃芪、五味子、麥冬的最佳配比為4∶1∶1∶4，顯示出最高清除率及最佳協同效果。本研究初步揭示“黃芪補肺飲”的“多成分-多靶點-多通路”模式能協同調節氧化應激，進而為其工業化生產與精準營養奠定基礎。

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Study on synergistic oxidation and 3D printing of “Huangqi Bufei Yin” based on network pharmacology and molecular docking

GAO Mingyuan， REN Chenxi， FENG Yining， LI Ning， XIAO Lixia， YANG Zhenquan， GUAN Tianzhu

（School of Food Science and Engineering， Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu 225127， China）

Abstract： In this research， the molecular mechanism of “Huangqi Bufei Yin” regulating oxidative stress was studied using network pharmacology and molecular docking. The main active ingredients （kaempferol， quercetin and stigmasterol） and core targets （AKT1， MMP9 and CASP3） were screened out. Through Gene Ontology （GO） and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG） pathway enrichment analysis， the role of these components in the antioxidative stress process of “Huangqi Bufei Yin” was inferred at the molecular level. The molecular docking results showed that the active ingredients could bind to the targets to form stable conformations， revealing the characteristics and advantages of “Huangqi Bufei Yin” in terms of the multi-component， multi-target and multi-pathway. In addition， in vitro antioxidant experiment based on the combination index indicated that the optimal ratio of Mume fructus， Hedysarum multijugum maxim， Schisandrae chinensis fructus and Ophiopogon japonicus was 4∶1∶1∶4， showing the highest scavenging rate and best synergistic effect. Using 3D printing technology， the optimally ratioed" of “Huangqi Bufei Yin” was made into a gel， improving its convenience and slow-release ability， providing a new idea for the large-scale production of traditional diet therapy.

Key words：

“Huangqi Bufei Yin”; oxidative stress; network pharmacology; molecular docking; antioxidant capacity; combination index

（責任編輯：趙 勇）