枳實對大鼠疼痛敏感性的影響

沈勇 徐佳琦 何帥帥 付立波 王紫怡 王可 呂航 王雪純

(1長春師范大學生命科學學院,吉林 長春 130032;2深圳桃源居中澳實驗學校)

枳實是一種常見中藥,產于四川、湖南和山西等地,屬蕓香科植物,是酸橙栽培變種的干燥幼果〔1〕。枳實具有破氣消積和化痰散痞,可用于治療大便不通順、氣管痰的阻礙、胸部麻痹、肝臟器官下垂等〔2,3〕。枳實的揮發油有祛痰、抗菌及中樞抑制作用〔4〕,枳實煎劑可使胃腸平滑肌收縮節律增強〔5〕,與枳實和桂枝、人參等配伍可治療心絞痛,改善家兔心臟損傷〔6,7〕,而枳實梔子豉湯還具有潛在的抗抑郁作用〔8〕,枳實黃酮提取物可有效抑制 6-OHDA 誘導的PC12 細胞損傷〔9〕。炎癥是身體常見的癥狀,本試驗探討枳實對正常和炎癥痛模型大鼠痛覺的調節作用。

1 材料與方法

1.1試驗動物 6只成年雄性Wistar大鼠,體質量180～200 g,由吉林大學白求恩醫學院動物中心提供。每只鼠單獨分籠飼養,并且提供12 h的光照、自由進食和飲水,飼養室內的溫度保持在20～22 ℃。

1.2藥品與實驗器材 枳實購于吉林大藥房。將枳實制成水煮液母液,并用母液配制成15.5、31.0、62.0和118.0 mg/ml的枳實水煮液,大鼠灌胃3 ml枳實水煮液,灌胃針由深圳瑞沃德公司提供;YLS-6B熱板儀由山東省濟南市益延科技發展有限公司制造,YLS-3E電子壓痛儀由山東省醫學科學院設備站制造。

1.3試驗方法

1.3.1試驗前訓練大鼠 為了減小試驗誤差,能夠讓大鼠適應實驗步驟及環境,在正式開始實驗過程中,需要對大鼠進行行為痛覺測試訓練,即灌胃的訓練、熱板和壓板測試訓練3個步驟。將連有灌胃針的注射器充滿生理鹽水,頭后仰,將灌胃針放入食道,食道保持平直,灌胃針從左側口角進入,順上顎后壁插入咽部,輕移灌胃針前端進入食道,插入胃部,這時大鼠沒有抵觸感。對大鼠進行連續5 d、每天5輪、每輪3次的訓練。經過訓練后的大鼠HWL會維持在一個相對較穩定的范圍。

1.3.2行為學痛覺測試 6只正常大鼠試驗前訓練結束后第1天,均灌胃3 ml生理鹽水,作為生理鹽水組。第2、3、4、5天,分別灌胃3 ml 15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml枳實水煮液,分別作為15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml組。分別進行壓力和熱板測試。正常大鼠行為學痛覺測試結束后第1天,6只大鼠左后爪注射0.1 ml的0.2%角叉菜膠至炎,建立炎癥痛大鼠模型。3～4 h后大鼠均灌胃3 ml生理鹽水,作為生理鹽水-Y組。第2、3、4、5天,大鼠同上方法建立炎癥痛模型,均灌胃3 ml 15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml枳實水煮液,分別作為15.50、31.0、62.0、118.0 mg/ml-Y組。均進行壓力和熱板測試。

1.3.3壓力、熱板測試 打開壓板儀器開關,讓其穩定1 h后,將有機玻璃壓在大鼠后爪的跗趾關節處,大鼠感覺到疼痛時后爪便會發生縮回現象,此時立即停止計時。將熱板儀器的溫度穩定在52 ℃左右,將大鼠的后爪緊貼在熱板上后便開始計時,直到大鼠后爪感到疼痛主動縮回并且離開熱板時立即停止計時。分別記錄5、10、15、20、30、45、60 min 7個時間點的后爪縮爪潛伏期(HWL)。

1.4統計學方法 采用SPSS18.0軟件進行t檢驗及雙因素方差分析。

2 結 果

2.1枳實水煮液對正常大鼠HWL的影響 與生理鹽水組比較,15.5、31.0 mg/ml組不同時間熱板及壓板測試HWL差異均無統計學意義(P>0.05);62.0、118.0 mg/ml組15、20、30 min熱板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01),62.0、118.0 mg/ml組20 min壓板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01)。見表1、表2。

表1 各組灌胃不同濃度枳實水煮液不同時刻左、右后爪熱板測試HWL比較

表2 各組灌胃不同濃度枳實水煮液不同時刻左、右后爪壓板測試HWL變化百分比比較

2.2枳實水煮液對炎癥痛模型大鼠HWL的影響 與生理鹽水-Y組比較,15.5、31.0 mg/ml-Y組不同時間熱板及壓板測試HWL差異均無統計學意義(P>0.05);與生理鹽水-Y組比較,62.0、118.0 mg/ml-Y組20 min熱板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01),62.0、118.0 mg/ml-Y組20 min壓板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01)。見表1、表2。

3 討 論

臨床上目前鎮痛藥物多為嗎啡、哌替啶(度冷丁)等阿片類藥物,使患者不再感覺痛感的時候,但能引發抗藥和藥癮效果〔8〕。中藥三七參與了炎癥痛大鼠痛覺調節作用,對慢性痛之一炎癥痛大鼠具有鎮痛作用〔10〕。本試驗結果表明,枳實水煮液對正常與炎癥痛模型大鼠熱和壓板反應均具有疼痛敏感性的調節作用,枳實水煮液對正常與炎癥痛模型大鼠均延長了大鼠的HWL,表明枳實參與了疼痛敏感性的變化,對正常與炎癥痛模型大鼠均具有鎮痛調節作用,且均存在劑量依賴性,在20 min時鎮痛效果最佳。

以往研究發現,枳實擁有消除身體胸部和肺部膨腫,疼痛感,食物積累不順等作用〔9〕。枳實的有效成分主要有揮發油、黃酮苷、生物堿等幾類〔11〕,有實驗證明枳實的揮發油具有一定程度的鎮痛和抗炎癥作用,枳實通降顆粒能顯著促進術后腸梗阻大鼠模型小腸功能的恢復,并具有較好的抗炎作用〔12〕。本試驗證實枳實有鎮痛作用,可能與其中有效成分包括黃酮苷,揮發油及生物堿等發揮作用有關,但是具體作用需要進一步加以驗證,本研究結果可為臨床鎮痛中藥的開發與研究提供理論依據。