多普勒超聲聯合血清HIF-1α、VEGF 水平診斷宮頸癌的臨床應用價值

尚曉敏

（南陽市中心醫院，河南 南陽 473000）

宮頸癌是由錯綜復雜的因素引起的女性惡性腫瘤。 由于該病的早期癥狀不易察覺，且該病容易誤診為慢性宮頸炎，導致治療效果不佳，嚴重影響預后[1]。因此，宮頸癌的早期診斷至關重要。經陰道彩色多普勒超聲（Transvaginal color Doppler sonography，TVCDS）可以清晰顯示腫瘤血流分布，是一種無創檢查，操作方便[2]。 缺氧誘導因子1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）在缺氧環境下會異常表達， 促進腫瘤細胞生長[3]。 血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF） 可以通過影響內皮細胞的表達促進血管生長， 從而促進腫瘤細胞增殖[4]。 有部分學者研究發現HIF-1α、VEGF 在子宮內膜癌中高表達， 可以影響腫瘤血管生成[5]，但在宮頸癌中的探究不足。 為了提高宮頸癌的診斷價值， 進而為宮頸癌的臨床治療和預后提供更多思路， 本研究以114 例宮頸癌組織標本為例， 探討TVCDS、HIF-1α、VEGF 在宮頸癌早期診斷的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月至2019 年12 月本院收治的114 例宮頸癌患者為宮頸癌組。 納入標準：（1）經病理學檢查確診為宮頸癌；（2）年齡大于18 周歲。 排除標準：（1）合并其他生殖系統疾病患者；（2）合并心肝腎肺功能障礙、代謝性疾病以及其他惡性腫瘤患者；（3）合并妊娠患者；（4）精神類疾病患者；（5）化療和放療病史患者；（6）近3 個月使用過激素藥物和免疫抑制劑患者。 其中，年齡34~69 歲，平均（53.32±6.27）歲；臨床分期Ⅰ期24例， Ⅱ期52 例， Ⅲ期38 例； 有淋巴結轉移者46例，無淋巴結轉移者68 例。 另取同期114 例宮頸良性病變患者為宮頸良性病變組，其中年齡35~69歲，平均（54.48±6.13）歲。 兩組受試者的基礎資料差異無統計學意義（P>0.05）。 本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》要求。

1.2 方法 （1） 采集入院后兩組受試者的組織標本，經石蠟包埋后切片，厚度約為4 μm，采用免疫組化染色 （試劑盒均購自北京中杉金橋生物科技有限公司）， 所有步驟按照試劑盒說明書操作，以陽性切片和PBS 代替一抗作陰性對照。 （2）采用半定量積分法判定HIF-1α 和VEGF 結果， 在光鏡下，HIF-1α 陽性為胞質或細胞核中觀察到棕黃色染色，VEGF 陽性為胞質或細胞核中觀察到棕黃色染色。 以染色強度計分：棕黃色3 分，黃色2 分，淡黃色1 分，無色0 分。 在高倍鏡下，隨機選取5 個視野，陽性細胞百分比大于75%為3 分，31%~75%為2 分，11%~30%為1 分，小于11%為0 分。 兩項的乘積得分≥1 分為陽性，0 分為陰性[6]。 （3）使用多普勒超聲診斷儀（飛利浦公司）對入院后的兩組受試者進行檢查，設置頻率5~9 MHz，取截石位，探頭置入陰道穹窿部，進行多角度全方位檢查，結果由兩名經驗豐富的醫師分析。

1.3 評價指標 （1） 比較兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽性率。 （2）比較TVCDS、HIF-1α 和VEGF單獨與聯合診斷應用于宮頸癌的診斷效果。 （3）比較HIF-1α 和VEGF 表達水平與臨床病理特征。

1.4 統計學處理 使用SPSS 20.0 統計軟件， 計量資料以±s表示，進行t檢驗；計數資料以率（%）表示并以χ2進行檢驗；等級資料采用Mann-Whitney U檢驗；繪制TVCDS、HIF-1α 和VEGF 及三者聯合診斷的ROC曲線， 比較曲線下面積，P＜0.05，為數據差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽性率比較 宮頸癌組HIF-1α 和VEGF 陽性率高于宮頸良性病變組（P<0.05）。 見表1。

表1 兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽性率比較[n（%）]

2.2 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨與聯合診斷應用于宮頸癌的診斷效果ROC曲線顯示，TVCDS診斷宮頸癌的曲線下面積 （Area Under Curve，AUC） 為0.855，HIF-1α 診 斷 宮 頸 癌 的AUC為0.881，VEGF 診斷宮頸癌的AUC為0.841， 三者聯合診斷宮頸癌的AUC為0.901， 高于單獨診斷（P<0.05）。 見圖1，表2。

圖1 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨與聯合診斷在宮頸癌中的ROC 曲線

表2 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨與聯合診斷在宮頸癌中的診斷價值

2.3 宮頸組織中HIF-1α 和VEGF 表達陽性率與臨床病理特征關系 HIF-1α 和VEGF 在分化程度為中、低分化，有淋巴結轉移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中， 陽性表達率高于分化程度為高分化、無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織（P<0.05），而在不同年齡、腫瘤直徑的宮頸癌組織中無明顯差異（P>0.05）。 見表3。

表3 宮頸組織中HIF-1α 和VEGF 表達水平與臨床病理特征關系（n，%）［n(%)］

3 討論

宮頸癌的發病機制尚未有定論， 有研究學者認為，宮頸癌的發生可能與女性性生活紊亂、口服避孕藥、吸煙、乳頭瘤病毒感染等因素有關[7-8]。 宮頸癌在女性惡性腫瘤中病死率極高， 僅低于乳腺癌，由于該病早期無顯著癥狀，很容易發展為中晚期，而這一時期治愈率較低[9]。 因此，宮頸癌的早期治療極為重要。 而且早期治療的治愈率可達90%以上[10]。目前，宮頸癌的診斷方法較多，但是診斷率普遍較低， 因此需要尋找合適的指標來提高宮頸癌的早期診斷率。

由于代謝旺盛， 惡性腫瘤細胞需要更豐富的血液供應來滿足增殖的需求， 致使血流異常[11]。TVCDS 可以清晰顯示女性陰道的解剖結構， 獲得宮頸和管腔的血流分布情況， 從而可以用來判斷腫瘤的生長狀況，是臨床常用的診斷方式[12]。 本研究結果顯示，TVCDS 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.855， 提示TVCDS 用于宮頸癌具有診斷價值。 但是該診斷方式依賴醫師的主觀判斷，特異度不高，會影響診斷效果。

HIF-1α 在缺氧的環境中會大量轉錄，是重要的蛋白因子，可以影響蛋白的合成，從而促進腫瘤細胞增殖，已有研究報道，HIF-1α 在乳腺瘤、子宮內膜癌、卵巢癌中存在異常表達[13]。 本研究結果顯示， 宮頸癌組HIF-1α 陽性率高于宮頸良性病變組，且HIF-1α 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.881，提示HIF-1α 參與了宮頸癌的發生，具有一定的診斷價值。 在正常的機體中， 氧環境正常，HIF-1α 的合成量基本等于講解量，兩者處于動態平衡中，因此很難檢測到HIF-1α 的表達[14]。 在宮頸癌中， 癌細胞處于缺氧環境， 在這種情況下，HIF-1α 的合成呈幾何數快速上升，而降解受到抑制， 合成后的HIF-1α 與缺氧應答靶基因結合，為腫瘤細胞的增殖提供能量。 萬愛紅等[15]研究發現，在分化程度為中、低分化，有淋巴結轉移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，HIF-1α 陽性表達率更高。 本研究表明，HIF-1α 在分化程度為中、 低分化，有淋巴結轉移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，陽性表達率高于分化程度為高分化、無淋巴結轉移、 臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織， 提示HIF-1α 與宮頸癌的分化程度、淋巴結轉移和臨床分期有關。 在宮頸癌腫瘤的發展過程中，腫瘤細胞始終處于缺氧環境， 為了存活并適應缺氧環境，HIF-1α 會不斷合成。 一方面，HIF-1α 可以促進VEGF 表達，加速血管生成，便于腫瘤細胞增殖；另一方面，HIF-1α 能提高具有攜氧能力的紅細胞生成， 來使腫瘤細胞周圍的區域保持穩定的氧平衡狀態。

VEGF 在促進血管生成方面，是目前發現的能力最強的細胞因子， 而血管的生成與宮頸癌的發生和發展密切相關[16]。 本研究中，宮頸癌組VEGF陽性率高于宮頸良性病變組， 且VEGF 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.841， 提示VEGF 與宮頸癌的發生有關，具有診斷價值。 VEGF 通過影響血管的生成和通透性， 來促進腫瘤細胞增殖和轉移。 本研究表明，VEGF 在分化程度為中、低分化，有淋巴結轉移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，陽性表達率高于分化程度為高分化、 無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織，提示VEGF與宮頸癌的分化程度、 淋巴結轉移和臨床分期密切相關。

為了進一步分析TVCDS、HIF-1α 和VEGF 的診斷價值， 繪制各指標單獨與聯合診斷的ROC曲線。 結果顯示， 三者聯合診斷的AUC高于單獨診斷， 提示TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯合診斷價值更高。 絕大多數宮頸癌腫塊邊界不清晰，生長形態不規則， 但也有部分惡性腫瘤早期時形態規則，因此難以和良性腫瘤區分。 另外，由于代謝旺盛， 惡性腫瘤細胞需要更豐富的血液供應來滿足增殖的需求，從而使血流異常，而良性腫瘤中乳頭狀瘤同樣會出現血流異常的現象，TVCDS 容易出現誤診。 HIF-1α 和VEGF 具有協同作用，HIF-1α可以刺激VEGF 表達， 而VEGF 可以促進血管生成來為腫瘤細胞的增殖提供環境， 腫瘤細胞的大量增殖會促進HIF-1α 的合成。因此，TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯合診斷比單一指標更具有診斷價值。

綜上所述，HIF-1α 和VEGF 表達水平在宮頸癌組織中更高，TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯合診斷有助于宮頸癌的早期診斷，HIF-1α 和VEG的表達水平與分化程度、 臨床分期和淋巴結轉移有關，可以用于宮頸癌的病情評估。