不同貯藏條件下吳茱萸飲片穩定性考察*

羅干明，朱小鳳，江 珊

（廣東省佛山市食品藥品檢驗檢測中心，廣東 佛山 528000）

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang 或疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang 的干燥近成熟果實，功效為散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉［1］。吳茱萸的主要藥效成分有吳茱萸堿、吳茱萸次堿、檸檬苦素等［2-6］，同時也是2020 年版《中國藥典（一部）》中吳茱萸藥材及飲片質量控制的指標。吳茱萸為“陳久者良”的6 種藥材之一，有研究認為，隨著貯藏時間的延長，吳茱萸藥材中揮發油總量和檸檬苦素含量均有下降趨勢，吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量均有增加趨勢［7-10］。目前，市場銷售的吳茱萸藥材大多未經陳化即制成飲片。為更好地控制吳茱萸飲片的質量，本研究中以目前常用的牛皮紙袋、聚乙烯塑料袋（真空、非真空）包裝吳茱萸飲片，進行吳茱萸飲片長期留樣穩定性試驗，以性狀、水分、浸出物及多指標成分含量的變化考察貯藏條件對吳茱萸飲片質量的影響，以及指標性成分含量在不同干燥、光照、避光條件下的穩定性，探討了影響吳茱萸藥材及飲片質量的主要因素，為吳茱萸飲片的貯藏及含吳茱萸制劑的開發提供了參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters E2695e 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；AE100 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；KQ-500DA 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

吳茱萸飲片（市售，12 批樣品信息見表1）；吳茱萸堿對照品（批號為110802-202111，含量為99.8%），吳茱萸次堿對照品（批號為110801 - 202109，含量為99.3%），檸檬苦素對照品（批號為110800-201707，含量為97.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 貯藏穩定性

2.1.1 貯藏條件

將吳茱萸飲片樣品分別采用牛皮紙袋、聚乙烯塑料袋（真空和非真空）進行包裝，放在藥品陰涼柜（溫度為16～17 ℃，相對濕度為50%～60%）中貯藏，分別在0～3年內取樣。

2.1.2 性狀

按表2 中的條件分別貯藏吳茱萸飲片，結果12 批樣品的表面呈暗黃綠色至褐色，氣味芳香濃郁，放置后顏色逐漸加深；其中，牛皮紙袋包裝的樣品氣味稍變淡，性狀無顯著變化，符合標準規定。詳見表2。

表2 不同貯藏年限吳茱萸飲片貯藏穩定性試驗結果Tab.2 Results of the stability test of Evodiae Fructus decoction pieces with different storage years

2.1.3 鑒別

水分：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0832水分測定法測定，結果水分為9.34%～14.13%。除真空聚乙烯塑料袋包裝樣品外，其余樣品放置后水分均逐漸減少，差異不大，較穩定，均符合標準規定（不得過15.0%）。詳見表2。

浸出物：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則2201浸出物測定法項下醇溶性浸出物浸定法測定，以稀乙醇為溶劑，結果浸出物為42.75%～51.15%，放置后浸出物變化不大，較穩定，均符合標準規定（不得少于30.0%）。詳見表2。

2.1.4 含量測定

1）色譜條件

色譜柱：Waters Kromasil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：［乙腈- 四氫呋喃（25∶15，V/V）］-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V）；流速：1.0 mL/ min；檢測波長：215 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2）溶液制備

取吳茱萸堿、吳茱萸次堿、檸檬苦素對照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含吳茱萸堿80 μg 和吳茱萸次堿50 μg、檸檬苦素0.1 mg 的混合對照品溶液。取樣品粉末（過3 號篩）0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質量，浸泡1 h，超聲處理（功率為300 W，頻率為40 kHz）40 min，放冷，再次稱定質量，用70%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

3）含量測定

12 批樣品的含量測定結果見表2。結果顯示，所有樣品中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量均符合標準規定（不得少于0.15%），其中2批樣品中檸檬苦素含量不符合標準規定（不得少于0.20%）；在貯藏期內，吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量隨著貯藏年限的延長有一定增加趨勢，檸檬苦素含量隨著貯藏年限的延長有一定下降趨勢。

2.2 指標性成分含量的穩定性考察

干燥條件穩定性試驗：取7 號樣品粉末（過3 號篩）2 g，平鋪于干燥的扁形稱量瓶中，精密稱定，開啟瓶蓋，在0，60，80，105 ℃溫度條件下分別干燥0，4，6，8 h，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，放冷30 min，精密稱定，分別取樣，按2.1.4項下色譜條件測定樣品含量。結果顯示，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素的含量基本穩定。詳見表3。

表3 吳茱萸飲片中3種指標性成分含量在不同干燥條件下的穩定性試驗結果（%）Tab.3 Results of the stability test of three index components in Evodiae Fructus decoction pieces under different drying conditions（%）

光照條件穩定性試驗：取7 號樣品的供試品溶液，分別置日光燈下（光照強度159 lx）照射0，4，8，16，32 h后，按2.1.4項下色譜條件測定樣品含量。結果顯示，吳茱萸次堿的光穩定性較好；吳茱萸堿和檸檬苦素對光照較敏感，隨著光照時間的延長而逐漸降解。詳見表4。

表4 吳茱萸飲片中3種指標性成分含量在不同光照時間下的穩定性試驗結果（%）Tab.4 Results of the stability test of three index components in Evodiae Fructus decoction pieces under different lighting conditions（%）

避光條件穩定性試驗：取7號樣品供試品溶液，分別于室溫條件下避光放置0，1，3，5 d后，按2.1.4項下色譜條件測定樣品含量。結果顯示，在避光條件下，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素含量基本穩定。詳見表5。

3 討論

歷代文獻記載吳茱萸“陳久者良”，是由于放置一段時間后，其中的化學成分含量有所下降，藥性緩和［7］。本研究中以性狀、水分、浸出物和含量為評價指標，考察評價指標在3 年貯存過程中的變化。結果顯示，在3 年貯藏期內，吳茱萸飲片中的吳茱萸堿和吳茱萸次堿總含量有升高趨勢，表明吳茱萸飲片貯藏有利于生物堿類含量的轉化與積累，從而提高藥效；但檸檬苦素含量有下降趨勢，飲片顏色逐漸變深，氣味變淡，影響療效。可見，即使在陰涼條件下，吳茱萸飲片的貯藏時間也不是越久越好。揮發油是吳茱萸的有效成分之一，密封不利于其有毒性揮發油的揮發［7］，故建議吳茱萸藥材陳化后再制成飲片。

市場銷售的吳茱萸藥材按成熟程度不同分為大花、中花、小花3種規格［11-12］，其中中花占主流。規格對吳茱萸藥材質量的影響顯著［9］，檸檬苦素含量不合格的2 批吳茱萸飲片均為大花。《中藥材商品規格等級：吳茱萸》中記載，“當前市場上仍存在吳茱萸大花規格，頂端多開裂，不符合藥典性狀描述”，故將大花規格排除在外，建議加強對大花規格吳茱萸飲片的監管。

在以指標性成分含量探討吳茱萸“陳久者良”和制劑穩定性方面，其含量變化主要由降解和成分之間的相互轉化導致，影響因素主要有溫度、濕度、光照等［13-16］。張慧芳等［8］認為，臨床應用時應將吳茱萸密封并置遮光處保存，且貯藏年限不能太久。溫英麗等［9］認為，檸檬苦素含量隨陳放時間的延長而降低顯著，推測與內酯類成分不穩定、易水解有關。本研究結果顯示，在干燥條件下，吳茱萸指標性成分的含量基本穩定，表明短時間的高溫處理不會導致吳茱萸指標性成分損失，但同時測定高溫處理前后樣品中揮發油的含量，發現揮發性成分損失明顯，揮發油成分的大量減少必然影響其藥理學活性，故低溫環境有利于其長期穩定貯存；在避光條件下，吳茱萸指標性成分的含量基本穩定，表明檸檬苦素在提取時不易水解；在光照作用下，除吳茱萸次堿外，吳茱萸堿和檸檬苦素含量均不穩定，表明光是影響吳茱萸質量的主要因素。因此，在陰涼、遮光條件下，吳茱萸飲片可貯藏較長時間；在分析和開發含吳茱萸藥材成分的制劑時，應盡量避光操作；在應用吳茱萸飲片時，不能只注重其是否陳久，也應關注其貯藏時間及條件［8］。