基于信息熵賦權法的L（934）正交試驗優選治痤方水提工藝*

過其玲，韓曉珂

（安徽省蕪湖市中醫醫院，安徽 蕪湖 241000）

治痤方由酒黃芩、丹參、夏枯草等12 味中藥材組方，具有清瀉肺熱、化濕通腑功效，臨床用于治療熱毒性濕疹、痤瘡等癥，療效確切，安全性高［1］。該制劑為傳統院內制劑，申報之初由于條件和技術的限制，并未對其提取工藝進行深入研究。正交試驗廣泛用于制劑生產工藝的優化［2-4］，但其評價指標的權重分配多為主觀判斷，具有較大局限性。信息熵是系統有序化程度的度量；系統有序化程度越高，信息熵越小，評價作用越大，權重系數越大［5-6］。擬對該制劑的提取工藝進行進一步研究，減少主觀因素對試驗結果的影響，本研究中以黃芩苷、丹酚酸B 的含量及浸膏得率為評價指標，采用信息熵賦權法結合L9（34）正交試驗考察提取次數、加水量及提取時間對治痤方有效成分的影響，優選最佳水提工藝，為治痤方標準化生產和質量研究提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

e2695 - 2489 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；AL-204型電子天平（精度為萬分之一），XP-205型電子天平（精度為十萬分之一），均購自瑞士Mettler Toledo 公司；GZX-9140 MBE 型干燥箱（上海博迅實業有限公司）；KQ - 500DB 型數控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；UPS-11-10T型純水機（成都優普凈化科技有限公司）。

1.2 試藥

黃芩苷對照品（批號為110715 - 201821，含量為95.4%），丹酚酸B 對照品（批號為111562 - 201716，含量為94.1%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈（色譜純，美國Tedia 公司）；水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定［7-11］

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈- 0.1%磷酸溶液（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm（0 ～19 min 時黃芩苷），286 nm（19～30 min 時丹酚酸B）［7-11］；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.1.2 溶液制備

取黃芩苷、丹酚酸B對照品各適量，精密稱定，分別加甲醇制得質量濃度為0.392 2，0.337 0 mg/mL的對照品貯備液；精密量取各對照品貯備液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，得質量濃度為78.44，67.40 μg/mL的混合對照品溶液。精密量取正交試驗5 樣品貯備液1 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得供試品溶液。按治痤方工藝制備缺酒黃芩、丹參的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.1.2 項下3 種溶液各10 μL，按2.1.1 項下色譜條件進樣測定。結果供試品溶液和混合對照品溶液色譜圖中各成分分離良好，且陰性對照無干擾，表明方法專屬性強。色譜圖見圖1。

1.黃芩苷 2.丹酚酸BA.混合對照品溶液 B.供試品溶液 C-D.陰性對照品溶液（分別缺丹參、酒黃芩）圖1 高效液相色譜圖1.Baicalin 2.Salvianolic acid BA.Mixed reference solution B.Test solution C - D.Negative reference solution（lacking Salviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma and wine - processed Scutellariae Radix，respectively）Fig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：精密量取2.1.2項下各對照品貯備液0.4，0.8，1.6，2.4，3.2，4.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，即得黃芩苷質量濃度為15.688，31.376，62.752，94.128，125.504，156.880 μg/mL，丹酚酸B 質量濃度 為13.480，26.690，53.920，80.880，107.840，134.800 μg/mL 的混合對照品溶液。按2.1.1項下色譜條件進樣測定，以待測成分的質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y黃=39 565X黃-80 256（R2=1.000 0，n=6），Y丹=9 001.4X丹-34 708（R2=0.999 6，n=6）。結果表明，黃芩苷和丹酚酸B質量濃度分別在15.688～156.880 μg/mL、13.480～134.800 μg/ mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限與定量限確定：精密量取2.1.2項下混合對照品溶液適量，加甲醇逐級稀釋，按2.1.1 項下色譜條件進樣測定，分別以信噪比（S/N）為3 倍和10 倍時的質量濃度為檢測限和定量限。結果黃芩苷和丹酚酸B的檢測限分別為7.844，0.121 μg/ mL，定量限分別為25.101，0.404 μg/mL。

精密度試驗：精密量取2.1.2項下混合對照品溶液適量，按2.1.1 項下色譜條件連續進樣測定6 次，記錄峰面積。結果黃芩苷和丹酚酸B 峰面積的RSD分別為0.44%和0.72%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密量取2.1.2 項下供試品溶液適量，分別于0，2，4，8，12，24 h 時按2.1.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果黃芩苷和丹酚酸B 峰面積的RSD分別為0.87%和1.22%（n= 6），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗：精密量取正交試驗5樣品貯備液1 mL，依法制備供試品溶液6 份，按2.1.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果黃芩苷和丹酚酸B含量的RSD分別為0.76%和0.73%（n= 6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取正交試驗5 樣品貯備液0.5 mL，共6 份，分別置25 mL 容量瓶中，依次加入黃芩苷對照品溶液（質量濃度為0.392 2 mg/mL）2.5 mL 和丹酚酸B 對照品溶液（質量濃度為0.337 0 mg/ mL）3.1 mL，按2.1.1 項下色譜條件進樣測定。結果黃芩苷和丹酚酸B 的平均加樣回收率分別為99.38% 和101.57%，RSD分別為1.40%和1.33%（n=6）。

2.2 浸膏得率測定

精密量取各樣品貯備液25 mL，置已干燥至恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干，105 ℃烘箱內干燥3 h，干燥器中冷卻0.5 h，立即精密稱定其質量。浸膏得率（%）=浸膏量×（貯備液總量/ 取樣量）/ 生藥投入量×100%［12-13］。

2.3 L9（34）正交試驗優選水提工藝

試驗設計與結果：按L9（34）正交試驗表試驗，以提取次數（A）、加水量（B）、提取時間（C）為考察因素［14］，結合信息熵理論對黃芩苷、丹酚酸B含量及浸膏得率進行矩陣處理，得各個指標的權重指數，并計算綜合評分［15-16］。因素與水平見表1，試驗設計與結果見表2。

表1 L9（34）正交試驗因素與水平Tab.1 Factors and levels of the L9（34）orthogonal test

表2 L9（34）正交試驗設計與結果Tab.2 Design and results of the L9（34）orthogonal test

信息熵賦值與方差分析：參考文獻［17］，將黃芩苷、丹酚酸B 含量及浸膏得率建立原始矩陣（X）；根據公式Pij=Xij/∑Xij（式中，i為評價指標，j為第j次試驗），將原始矩陣（X）轉化為概率矩陣（P）；根據公式Hi=（式中，n為試驗次數）計算各指標的信息熵（Hi），結果分別為0.975 1，0.980 2，0.981 0；再根據公式（式中，m為指標個數）計算各指標的權重系數（Wi），結果分別為0.390 9，0.310 8，0.298 3。由公式綜合評分= Xi黃/Xmax黃×0.390 9 +Xi丹/Xmax丹× 0.310 8 +Xi得率/Xmax得率×0.298 3計算綜合評分。采用SPSS 20.0統計學軟件進行方差分析，結果見表3。

表3 方差分析結果Tab.3 Results of the ANOVA

結果分析：信息熵賦權法確定各指標的權重由大至小為黃芩苷含量> 丹酚酸B 含量> 浸膏得率；各因素對綜合指標的影響由大至小為A > B > C，即提取次數> 加水量> 提取時間；因素A 對綜合評分的影響顯著（P<0.05），表明提取次數對治痤方的提取效果有顯著影響，因素B 和因素C 的影響不顯著。綜合分析各因素的3 個水平，得到最佳提取條件為A3B3C2，即加10 倍量水，提取3次，每次1.5 h。

驗證試驗：按處方稱取3 份藥材，按優選工藝平行試驗3 次，分別計算黃芩苷和丹酚酸B 的含量、浸膏得率及綜合評分。結果見表4，表明該提取工藝穩定、可靠。

表4 驗證試驗結果Tab.4 Results of the verification test

3 討論

中醫認為，痤瘡雖發病于體表，但病因病機與五臟六腑關系密切，多為肺經風熱及脾胃濕熱［18］。方中，枇杷葉、酒黃芩宣肺氣、清肺熱，共為君藥。臣藥丹參清熱涼血、消癰排膿，助君藥清血熱之毒；金銀花疏散上焦熱毒，梔子清三焦濕熱之邪，兩者共清郁熱；桑白皮利肺氣，合枇杷葉一宣一降。佐藥丹皮、赤芍涼血，夏枯草清熱散結，薏苡仁、大黃健脾清濕熱，杜絕肺脾濕熱之本。甘草清熱解毒，調和諸藥。全方合用，共奏清泄熱毒、化濕通腑之功。一項痤瘡中醫藥用藥規律統計研究表明，清熱藥和活血化瘀藥頻數最多，以黃芩和丹參為首［19］，與本方用藥特點一致。

黃芩具有抗菌、抗炎、影響皮脂腺的作用，治療痤瘡優勢明顯［20］。黃芩苷為其含量最高的指標性成分［21］，具有很強的抗炎活性［22］，能顯著降低兔耳痤瘡的炎性因子水平［23］。丹參具有祛瘀止痛、涼血消癰功效［24］，其主要活性成分為水溶性成分丹酚酸類及脂溶性成分丹參酮類，抗氧化、抗菌消炎作用顯著［25］。治痤方成分復雜多樣，評價其質量不能僅限于單一成分的研究，故本研究中通過多指標綜合評分篩選最佳提取工藝。根據本方主要藥味的活性成分及其藥理作用，結合制劑生產工藝，選擇黃芩苷和丹酚酸B為質量控制的指標性成分。

參考2020年版《中國藥典（一部）》中關于黃芩苷和丹酚酸B含量測定的色譜條件進行試驗，發現在丹酚酸B色譜條件下，通過調整流動相的比例可較好地分離上述2 種成分，出峰時間合適，且峰形較好。為盡可能地減小積分誤差，本研究中選擇可變紫外波長檢測器，以便設定目標成分的最大吸收波長，最終確定文中色譜條件。

近年來，信息熵賦權法在醫藥衛生行業得到了廣泛應用，利用其對數據進行客觀賦權，有效避免了人為因素對結果的影響。但該方法對各指標的賦權結果靈活性較差，無法反映指標的重要程度，可能會造成主要成分權重系數較低或非主要成分權重系數較高，在實際使用過程中應根據情況確定是否聯用其他賦權法。

綜上所述，采用信息熵賦權法結合L9（34）正交試驗優選的治痤方水提工藝為加10 倍量水，提取3 次，每次1.5 h。該水提工藝穩定可行、重復性好，可為治痤方的提取工藝和質量研究提供參考。