毛木耳不同生長期菌棒微生物群落研究

葉 雷, 張 波, 李小林*, 譚 偉*

(1.四川省食用菌研究所, 四川 成都 610066;2.四川農(nóng)業(yè)大學 資源學院,四川 成都 611130)

毛木耳(AuriculariacorneaEhrenb.)是木耳科(Auriculariaceae)、木耳屬(Auricularia)的大型真菌,曾用學名A.polytricha[1],主要分黃背木耳和白背木耳,主產(chǎn)四川、山東、江蘇等地,據(jù)中國食用菌協(xié)會統(tǒng)計,四川是我國毛木耳最大產(chǎn)地,2019年鮮耳產(chǎn)量92.15萬t,占全國毛木耳總產(chǎn)的54.74%[2]。我國毛木耳栽培模式為“熟料袋栽蔭棚出耳”[3],栽培基質以常壓蒸汽滅菌(溫度98～102 ℃,滅菌12～15 h)為主,有研究顯示常壓滅菌條件下菌棒中依然存在“污染源”。葉禮奎[4]報道食用菌栽培中細菌、病毒、霉菌和蟲害是主要污染源,滅菌后的基質中仍然存在細菌芽胞,并作為培養(yǎng)料的第一污染源。黃毅[5]對金針菇菌棒細菌污染的研究顯示:菌包的真菌性污染是顯著的,肉眼可見的,而細菌性污染易被忽視且具有隱形性,損失是巨大的。陳俏彪等[6]研究表明,食用菌基料采取常壓滅菌生產(chǎn)時,細菌芽胞不能完全殺死能引起培養(yǎng)料的污染。那么在毛木耳栽培基質中存在哪些微生物?它們對毛木耳菌棒、子實體等的影響如何?四川省食用菌研究所毛木耳研究課題組采用高通量測序技術對毛木耳不同出耳階段菌棒微生物群落進行了研究,以明析毛木耳菌棒中微生物群落情況,為毛木耳高效栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 供試菌株為上海1號,四川主栽品種,經(jīng)形態(tài)學和分子生物學鑒定為毛木耳(Auriculariacornea);所用有機原料新鮮無霉變,均為正品;料袋規(guī)格為折徑17.5 cm×長47 cm×厚0.004 cm,聚乙烯材質,一端開口。

1.1.2 培養(yǎng)基 母種培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基);原種和栽培出耳培養(yǎng)基(以干料計,質量分數(shù),%):木屑33,玉米芯30,米糠20,高粱殼10,玉米粉2,石灰4,石膏1。原料參數(shù)要求參見黃忠乾等[3]。

1.1.3 主要試劑與儀器設備 E.Z.N.A.?Soil DNA Kit (OMEGA Bio-Tek, Norcross, Georgia, USA);凝膠回收試劑盒(AP-GX-250, AXYGEN公司);熒光試劑(Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit,上海諾寧生物科技有限公司);AMPure XP 磁珠(美國貝克曼庫爾特公司);Q5高保真DNA聚合酶(NEB公司);MiSeq Reagent Kit V3 (600 cycles)。Illumina (Miseq, Illumina公司);TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit(FC-121-4003,Illumina);PCR儀(ETC 811, 東勝興業(yè)科學儀器有限公司);定量儀器Microplate reader(FLx 800, BioTek);離心機 (5427R, 德國艾本德股份公司);-80 ℃ 冰箱(DW-HL 528S, 中科美菱);渦旋振蕩器米歐(mix-28+, 廣州圍古潤儀器有限公司);拌料機、裝袋機、滅菌器、液體菌種發(fā)酵和接種成套設備(連云港國鑫食用菌成套設備有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 代料栽培方法 按照栽培基質配方準確稱量栽培組分,并采用工廠化制袋成套設備進行拌料、裝袋、滅菌和接種。培養(yǎng)料充分混勻且含水量為62%;裝料重為2.3 kg/袋(濕料,菌棒長一致);裝袋完成后機械對料袋開口端扎絲直接封口;采用常壓滅菌,設定參數(shù)100 ℃維持14 h;滅菌完成后菌棒出鍋采用制冷機進行強冷,待菌棒中間溫度25～28 ℃時,采用液體接種機對滅菌冷卻料袋接種菌種50 g/袋(接種2孔),并用無菌無紡布封口;菌棒放置在25 ℃控溫培養(yǎng)房無光培養(yǎng)至菌絲滿袋,完成后熟培養(yǎng)15 d后篩選菌絲潔白、無菌皮、無雜點的菌棒上架出耳(出耳棚事先消毒處理)。菌棒腹面均勻劃開三個口,呈“V”字型,口徑1.5 cm,朝下,后續(xù)養(yǎng)菌5 d,控制環(huán)境空氣濕度85%～95%,光照200～300 lx,溫度自然,進行菌袋的催耳和出耳管理[3]。獲得第一潮干耳103 kg/1 000袋。

1.2.2 樣本采集 對菌棒樣本分4個階段采集,菌絲滿袋后熟(記為0 d)、原基形成(記為20 d)、原基分化開片(記為35 d)和子實體邊緣微卷成熟(記為50 d),并分別編號為ful、pri、ope和mat(圖1)。每個時期3個生物學重復,分細菌和真菌群落兩大組樣本進行測定,共計24個樣本。菌棒樣本采集時,隨機選擇菌棒,首先用0.1%的酸性高錳酸鉀進行菌棒表面的消毒,用75%的酒精棉球擦拭菌棒表面消毒,然后將預處理的菌棒用無菌塑料膜包裹放入無菌的超凈工作臺上,按照無菌操作流程,在開“V”字型出耳口的腹面的背面位置,用手術刀將菌棒表面塑料袋劃開,用鑷子隨即夾取料袋中部培養(yǎng)料和菌絲體的混合物放入無菌EP管中作為樣本,立即將樣本用液氮冷凍15 min,然后-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 各采樣期菌棒和子實體形態(tài)Fig.1 Morphology of artificial bed-log and fruiting body at different sampling periodsA:菌絲滿袋后熟期(ful);B:原基形成期(pri);C:原基分化開片期(ope);D:子實體邊緣微卷成熟期(mat)A: The mycelium full of bags (ful); B: Prophase of fruiting body formation (pri); C: Fruiting body stretch period (ope); D: Maturation stage of fruiting body (mat)

1.2.3 總DNA提取、PCR擴增和高通量測序 采用E.Z.N.A.?Soil DNA Kit提取樣本總DNA,瓊脂糖(0.8%)凝膠電泳和紫外分光光度計對提取DNA進行定量分析。采用NEB公司的Q5高保真DNA聚合酶對細菌16S rRNA V3～V4高變區(qū)和真菌ITS1區(qū)進行PCR擴增,擴增引物和反應條件參照相關文獻進行[7-9]。采用瓊脂糖(0.2%)凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,凝膠回收試劑盒進行目標條帶的切膠回收。測序文庫制備采用Illumina公司的TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit。使用Illumina MiSeq測序儀進行2×300 bp的雙端測序[7,10]。

1.2.4 下機數(shù)據(jù)分析 對高通量測序的下機原始數(shù)據(jù)進行質量篩查(窗口大小為10 bp,步長為1 bp),去除嵌合體等疑問序列,使用QIIME軟件進行OTU(Operational Taxonomic Unit)歸并劃分(以97%的相似度),針對細菌16S rRNA基因數(shù)據(jù)庫,采用Greengenes數(shù)據(jù)庫[11],真菌18S rRNA基因數(shù)據(jù)庫采用Silva數(shù)據(jù)庫[12]去除劣質數(shù)據(jù)[13]。后續(xù)結合相關軟件構建稀釋曲線,進行多樣性分析、群落組成分析、細菌菌群代謝功能預測等[14]。細菌和真菌測序原始數(shù)據(jù)以FASTQ格式保存,并上傳至NCBI SRA數(shù)據(jù)庫,登錄號分別為PRJNA 780 254、PRJNA 780 257。

2 結果與分析

2.1 測序質量分析

對高通量測序下機原始數(shù)據(jù)進行處理后,獲得細菌16S rRNA有效序列503 724條,真菌有效序列712 728條。進一步對序列長短進行統(tǒng)計,結果細菌測定多數(shù)樣本的序列分布在400～450 bp。在97%相似水平下進行OTU劃分,ful、pri、ope和mat期樣本的細菌OTU種類分別為1 054、734、767和1 030;真菌OTU種類分別為154、117、130和107,對共有OTU進行分析,制作Venn圖,結果所有樣本間細菌共有OTU為249個(圖2A),真菌為88個(圖2B)。進一步制作稀釋曲線,結果隨著樣本測序深度增加曲線的切線斜率趨于零,表明樣本測序深度能很好的反映樣本微生物多樣性(圖2C、2D)。細菌物種注釋分屬25門54綱85目134科199屬;真菌物種注釋隸屬于5門9綱15目12科19屬。

圖2 共有OTU的Venn圖和物種稀釋曲線Fig.2 Venn diagram of shared OTU and Rarefaction curveA和B分別為細菌和真菌的Venn圖; C和D分別為細菌和真菌的稀釋曲線A and B are Venn diagrams of bacteria and fungi respectively; C and D are the rarefaction curves of bacteria and fungi respectively

2.2 毛木耳子實體不同生長期菌棒物種多樣性指數(shù)

在進行多樣性指數(shù)計算前,對OTU豐度矩陣中的全體樣本,根據(jù)90%的最低測序深度統(tǒng)一進行“拉平處理”,以避免測序深度導致的樣本間多樣性差異,更為客觀地反映不同樣本間菌群的Alpha和Beta多樣性差異,提高分析可靠性。使用QIIME軟件計算樣本的Chao1、ACE、Shannon和Simpson指數(shù)(表1),以反映其Alpha多樣性。稀釋曲線(圖2C)的平均高低順序為mat>ful>ope>pri,表明mat期樣本細菌多樣性更豐富,pri期樣本細菌多樣性更低。稀釋曲線(圖2D)的平均高低順序為ful>ope>pri>mat,表明ful期樣本真菌多樣性更豐富,mat期樣本真菌多樣性更低。對多樣性指數(shù)進行分析,結果在0.05水平上細菌均表現(xiàn)差異不顯著。Chao1和ACE指數(shù)越大,表明群落的豐富度越高,說明mat期細菌群落豐富度高,ope期時更低;真菌在ful期顯著高于mat期,而在pri和ope期差異不顯著,說明在ful期有更高的多樣性。Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)很好地反映群落均勻度,值越高表明群落的多樣性越高,說明pri期有更高的細菌群落多樣性;ful期真菌群落多樣性顯著高于其他時期(表1)。

表1 多樣性指數(shù)Table 1 Diversity index

2.3 毛木耳子實體不同生長期菌棒群落組成分析

2.3.1 門分類水平下菌群結構分析 在門分類水平下,毛木耳不同生長期菌棒細菌相對豐度最高的前4個分別為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes),且以變形菌門為主要優(yōu)勢門。變形菌門在mat期中相對豐度最高為77.4%(百分數(shù)為相對豐度),其次為pri期(57.5%)、ful期(55.1%)和ope期(45.4%);厚壁菌門以ope期(51.3%)最高,其次為ful期(36.4%)、pri期(24.7%)和mat期(13.4%);放線菌門以pri期(4.5%)最高,其次為ful期(3.5%)、mat期(2.0%)和ope期(0.6%);擬桿菌門以樣本mat期(5.5%)最高,其次為ful期(2.0%)、pri期(1.5%)、ope期(1.4%)(圖3A)。可見在毛木耳ful、pri和mat期均以變形菌門為最具優(yōu)勢菌門,在ope期以厚壁菌門為最具優(yōu)勢菌門。擔子菌門(Basidiomycota)和子囊菌門(Ascomycota)是菌棒真菌相對豐度最高的2個門,在所有時期的樣本中,擔子菌門為最主要的真菌門,其相對豐度達99.29%～99.95%。子囊菌門在ful期相對豐度最高為0.58%,其他時期低于0.11%(圖3B)。

圖3 門分類水平下細菌(A)和真菌(B)菌群組成及相對豐度Fig.3 Composition and relative abundance of bacterial (a) and fungal (b) community based on phylum level

2.3.2 屬分類水平下菌群結構分析 在屬分類水平下,各時期菌棒細菌相對豐度最高的前10個屬及分布:賴氨酸芽胞桿菌屬(Lysinibacillus)在ope期相對豐度最高(36.42%);假單胞菌屬(Pseudomonas)在pri期相對豐度最高(35.85%);不動桿菌屬(Acinetobacter)和蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)在mat期相對豐度最高(35.85%、14.92%);土壤芽胞桿菌屬(Solibacillus)在pri期相對豐度最高(14.85%);貪銅菌屬(Cupriavidus)在ful期相對豐度最高(5.98%);嗜糖假單胞菌屬(Pelomonas)在mat期相對豐度最高(4.84%);鏈球菌屬(Streptococcus)在ful期相對豐度最高(4.82%);厭氧芽胞桿菌屬(Anoxybacillus)在ope期相對豐度最高(3.77%);雷爾氏菌屬(Ralstonia)在mat期相對豐度最高(2.50%)。即,ful期主要以賴氨酸芽胞桿菌屬(25.71%)和不動桿菌屬(14.38%)相對豐度最高;pri期以假單胞菌屬(35.85%)和土壤芽胞桿菌屬(14.85%)相對豐度最高;ope期以賴氨酸芽胞桿菌(36.42%)和假單胞菌屬(21.73%)相對豐度最高;mat期以不動桿菌屬(27.94%)和蒼白桿菌屬(14.92%)相對豐度最高(圖3A、4A)。毛木耳子實體在不同生長時期菌棒真菌均以木耳屬(Auricularia)相對豐度最高(99.19%～99.94%),在ful期木耳屬相對豐度達99.19%,其次是擬青霉屬(Simplicillium)(0.25%);在pri期木耳屬相對豐度達99.93%,其次是假絲酵母屬(Candida)(0.01%);在ope期木耳屬相對豐度達99.83%,其次是嗜熱真菌屬(Thermomyces)(0.03%);在mat期木耳屬相對豐度達99.94%,其次是短梗霉屬(Aureobasidium)(0.02%)和絲孢菌屬(Scedosporium)(0.01%)(圖3B、4B)。對mat期干耳產(chǎn)量進行統(tǒng)計,獲得產(chǎn)量(103±12) g/袋,耳片邊緣厚度(0.94±0.21) mm/片。可見在毛木耳子實體生長發(fā)育的不同階段菌棒內細菌菌群組成豐富且有較大差異,而真菌組成以木耳屬占絕對優(yōu)勢,另檢測出了擬青霉屬和曲霉屬(Aspergillus)等其他少量真菌屬。木耳屬的相對豐度在一定程度上影響產(chǎn)量形成。

圖4 屬分類水平下細菌(A)和真菌(B)菌群組成及相對豐度Fig.4 Composition and relative abundance of bacterial (A) and fungal (B) community based on genus level

為進一步直觀展示樣本細菌和真菌群落組成關系,使用R軟件進行聚類分析并繪制熱圖。通過聚類的方式,將高豐度和低豐度的分類單元加以區(qū)分,并通過聚類熱圖中小方塊的顏色梯度來反映樣本之間群落組成的相似度(圖5)。

圖5 基于屬水平的細菌(A)和真菌(B)菌群組成熱圖及聚類分析Fig.5 Heat map and cluster analysis of sample based on genus level紅色小方塊代表在對應樣本中豐度較高的屬,綠色小方塊代表豐度較低的屬The red square represents the genus with higher abundance in the corresponding sample, and the green square represents the genus with lower abundance

2.3.3 毛木耳子實體不同生長期菌棒菌群組成的Beta多樣性分析 為探究不同樣本間細菌和真菌群落結構相似性(差異性),使用R軟件對加權Weighted的UniFrac距離矩陣分別進行非度量多維標度分析(Non-metric multidimensional scaling,NMDS),通過二維排序圖展現(xiàn)不同時期菌棒樣本群落的結構分布,以觀測毛木耳不同生長階段菌棒菌群差異。對不同時期毛木耳菌棒菌群基于加權UniFrac距離NMDS分析,對樣本進行細菌群落NMDS分析表明,同一時期各樣本距離較分散,說明各樣本的組成差異較明顯(圖6A);對樣本進行真菌群落NMDS分析表明,除ful期樣本與其他各時期距離較分散外,其他各組樣本幾乎重疊,說明ful期樣本菌棒中真菌群落與其他各時期存在顯著差異(圖6C)。采用Weighted UniFrac距離矩陣通過非加權組平均法(Unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)對樣本進行聚類分析,采用“等級樹”展示毛木耳不同生長階段菌棒樣本間的相似度,圖中樣本間的分枝長度越短,兩樣本越相似。毛木耳不同生長期樣本細菌的UPGMA聚類分析結果顯示,mat樣本單成一枝,說明毛木耳成熟期菌群組成與其他時期存在顯著不同,其他各樣本間菌群相似情況如圖6B所示。同樣對真菌樣本UPGMA聚類分析結果表明,ful期樣本與其他樣本有更遠的分枝,剩余的其他樣本有更短的分枝,說明ful期菌棒真菌群落組成與其他時期顯著不同(圖6D)。

圖6 毛木耳菌棒細菌(A和C)和真菌(B和D)菌群基于加權UniFrac距離NMDS分析和UPGMA聚類分析Fig.6 NMDS analysis and UPGMA cluster analysis based on weighted UniFrac distance of bacterial (A and C) and fungal (B and D) communities

2.3.4 毛木耳子實體不同生長期菌棒細菌群落代謝功能預測 本研究基于PICRUSt(Phylogenetic Investigation of Communities by Reconstruction of Unobserved States)開展細菌群落的代謝功能預測,以便更好地了解菌群在毛木耳菌棒中發(fā)揮的作用,實現(xiàn)其“身份”與“功能”的對應[15]。通過PICRUSt對16S rRNA基因序列在KEGG、COG和Rfam功能譜數(shù)據(jù)庫中進行預測,并根據(jù)各樣本預測的功能類群豐度分布結果,繪制了KEGG第二等級分布圖(圖7)。結果表明,毛木耳子實體不同生長期菌棒細菌富集的功能主要包括外源生物降解、核苷酸、萜類化合物和聚酮類化合物、氨基酸、維生素、脂質、聚糖生物合成、碳水化合物代謝等。該圖基于“小提琴”的“寬窄”間接反映毛木耳不同生長時期對應功能類群數(shù)據(jù)分布的密度高低,越寬表明該豐度下對應的樣本越多。在ful期細菌群落多發(fā)揮外源生物降解與代謝和氨基酸代謝的作用;在pri期更多發(fā)揮的是碳水化合物代謝的作用;在ope期更多發(fā)揮的是外源生物降解與代謝的作用;在mat期更多發(fā)揮的是外源生物降解與代謝、氨基酸代謝和脂質代謝的作用。

圖7 基于PICRUSt的細菌代謝功能預測的KEGG第二等級分布Fig.7 KEGG diagram for metabolic function prediction based on PICRUSt of bacterial community

3 討 論

菌棒菌群組成是影響食用菌單產(chǎn)的重要因素,間接影響種植效益,然而,國內外關于毛木耳出耳期菌棒微生物多樣性研究較少。本研究表明基料常壓滅菌條件下,毛木耳出耳期菌棒有著豐富的細菌群落,在不同出耳階段菌棒細菌群落組成具有較大差異,以變形菌門、厚壁菌門、放線菌門和擬桿菌門為主,在屬水平上以賴氨酸芽胞桿菌屬、不動桿菌屬、土壤芽胞桿菌屬、厭氧芽胞桿菌屬、假單胞菌屬、貪銅菌屬、嗜糖假單胞菌屬、蒼白桿菌屬、鏈球菌屬和雷爾氏菌屬等為主,且在子實體不同生長階段優(yōu)勢菌群存在較大差異。唐振[16]對外源一氧化氮處理下菌棒中細菌群落進行研究,表明厚壁菌門豐度最高,且檢測出了擬桿菌門和放線菌門,優(yōu)勢菌屬主要是芽胞桿菌屬,與本研究結果有一致之處。在病原菌研究方面,賀新生等[17]對四川金堂袋栽黃背木耳發(fā)生的“壞頭子病”的病原菌進行分離鑒定,確定病原菌為芽胞桿菌屬細菌,其原因為常壓滅菌難以殺死該菌芽胞,致使該菌在菌棒中大量繁殖,引起菌棒的潰爛,致使產(chǎn)量降低30%～70%。胡開輝等[18]對我國主栽食用菌細菌性病害報道認為,雙孢蘑菇(Agaricusbisporus)細菌性斑點病、菌褶滴水病、干腐病和軟腐病,平菇(Pleurotusostreatus)細菌性褐斑病、腐爛病,鳳尾菇(Pleurotussajor-caju)黃斑病,金針菇(Flammulinavelutipes)細菌性褐斑病,草菇(Volvariellavolvacea)基腐病等均是假單胞菌屬引起,雙孢蘑菇細菌凹點病由芽胞桿菌屬導致。Munsch等[19]發(fā)現(xiàn)康氏假單胞菌(Pseudomonascostantinii)能引起雙孢蘑菇子實體病害。同樣在本研究中檢測出了芽胞桿菌屬、假單胞菌屬等多個菌屬,為后續(xù)菌棒生理研究提供參考。高云虹等[20]對引起黑木耳栽培種污染的細菌進行鑒定時,獲得3株引起栽培種污染的細菌,分別為類芽胞桿菌屬、芽胞桿菌屬和賴氨酸芽胞桿菌屬,本研究也從毛木耳出耳菌棒中檢測出了這3個屬。Ma等[21]從杏鮑菇(Pleurotuseryngii)病害子實體中分離出可侵染其菌柄和菌蓋的泛菌屬(Pantoea)。劉紹雄等[22]對黑木耳常見病害進行調查時發(fā)現(xiàn)東洋芽胞桿菌(Bacillustoyonensis)引起黑木耳爛耳。托拉氏假單孢菌(Pseudomonastolaasii)能寄生于食用菌菌絲和子實體上[23],引起褐斑病[24]而不利于子實體的生長。關統(tǒng)偉等[25]對杏鮑菇常壓滅菌培養(yǎng)料進行純培養(yǎng)獲得7株有差異的細菌菌株,其中包括芽胞桿菌屬和假單胞菌屬等,且多數(shù)為桿菌屬。綜上,毛木耳菌棒中潛在可能引起子實體生理性病害的菌群,但由于肉眼較難發(fā)現(xiàn)病灶,故難以統(tǒng)計。本研究基于PICRUSt對毛木耳子實體生長不同階段菌棒菌群代謝功能進行預測,結果發(fā)現(xiàn)菌棒細菌與外源生物降解與代謝、核苷酸代謝、萜類化合物和聚酮類化合物的代謝、輔助因子和維生素的代謝、脂質代謝、聚糖生物合成與代謝、碳水化合物代謝等相關,預測結果顯示部分細菌可能在子實體不同生長階段發(fā)揮其效力,部分細菌的富集可能參與了毛木耳菌絲對基質營養(yǎng)的利用過程,如邱立友等[26]報道固氮菌熒光假單胞菌能在食用菌的菌絲表面形成菌膜,其固定的多余氮會供給菌絲以促進其生長。

毛木耳出耳期菌棒真菌類群主要歸屬于擔子菌門和子囊菌門且以擔子菌門為主,屬水平上以木耳屬為主,相對豐度高達99.94%,最終獲得第一潮干耳(mat期)103 kg/1 000袋,可見木耳屬在菌棒中的絕對優(yōu)勢是獲得木耳子實體的關鍵,這與已知公認結果一致。除此之外,還檢測出了極少量的擬青霉屬、假絲酵母屬、嗜熱真菌屬、短梗霉屬、絲孢菌屬和曲霉屬等。毛木耳生產(chǎn)中常見真菌性“病害”主要是綠霉、毛木耳柱霉(Scytalidiumauricola)、曲霉和鏈孢霉等,本研究檢測出相對豐度極低的擬青霉屬和曲霉屬等,推測這些菌的侵入多是由環(huán)境引入。在毛木耳真菌性病害中影響最廣泛最嚴重的是毛木耳柱霉病害,又叫“油疤病”,彭衛(wèi)紅等[27-28]對該真菌病害病原菌進行了分離鑒定,確定為柱霉屬新種,提出了該病的綜合防控技術。據(jù)邱立友等[26]介紹,嗜熱真菌屬(降解纖維素、半纖維素等[29])、假單胞菌屬等能促進食用菌的生長發(fā)育。擬青霉屬可引起羊肚菌白霉病[30],危害子實體,影響羊肚菌土壤真菌群落結構;危害黑木耳菌棒的菌絲生長[31],引起高達20%的菌棒污染。嗜熱真菌屬能夠降解培養(yǎng)料中的半纖維素可能促進了菌絲對基料的利用。本研究中,除木耳屬以外的真菌屬相對豐度僅0.06%～0.81%且未明顯表現(xiàn)出污染癥狀,如果菌棒出現(xiàn)真菌性污染,最可能是由外界原因引起。本研究表明,毛木耳常壓代料栽培菌棒中具有豐富的微生物多樣性。細菌類群較真菌類群更豐富,且某些細菌可能是子實體病害的病原菌。真菌以木耳屬相對豐度最高,另檢測出極低豐度的擬青霉屬和曲霉屬等,未檢測到柱霉屬、青霉屬、鏈孢霉等菌棒常見病原菌,推測這些真菌可能采取常壓滅菌就能達到很好的滅殺效果。本研究對袋栽毛木耳生理病害及防控、高效栽培等具有生產(chǎn)指導意義。