Ki-67、TEM1及ERCC1表達與胃癌新輔助化療效果的相關性分析

陳德志 陳巧輝 林升祿 羅麗云 林冠 王佳坤 林光錟

胃癌是第五大最常見的癌癥,也是癌癥相關死亡的第三大常見原因[1]。由于約2/3的患者在診斷時已處于局部晚期,一般不適合手術治療,新輔助化療是更適合這類患者的治療方案。研究表明,對于臨床分期Ⅱ～Ⅲ期的胃腺癌患者,臨床常采用替吉奧和奧沙利鉑(SOX)或亞葉酸鈣、氟尿嘧啶和奧沙利鉑(FOLFOX4)方案[2]。評估新輔助化療效果是決定輔助治療選擇的關鍵,Ki-67是一種核蛋白,通常用于證明細胞周期G1,S,G2和M期檢測到的細胞增殖,而在G0靜息期未檢測到,且與腫瘤細胞增殖率相關[3]。腫瘤內皮細胞標志物1(TEM1)是一種跨膜蛋白,腫瘤相關的新生血管平滑肌細胞在人類惡性腫瘤中表達TEM1,TEM1通過癌細胞與癌癥相關成纖維細胞之間的相互作用在腫瘤發展中發揮作用[4]。為了維持基因組的穩定性和完整性,DNA修復系統起著關鍵作用。與順鉑相比,奧沙利鉑誘導的加合物明顯不被錯配修復識別或處理,但主要由核苷酸切除修復途徑修復。對奧沙利鉑的耐藥歸因于通過核苷酸切除修復途徑增強的DNA損傷耐受性和修復能力,其中就包括切除修復交叉互補基因1(ERCC1)[5]。因此,核苷酸切除修復容量的改變可能會影響胃癌新輔助化療的臨床結局。本研究旨在探討Ki-67、TEM1及ERCC1表達對胃癌新輔助化療效果的預測價值。

1.資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年1月至2022年12月聯勤保障部隊第九一〇醫院和福建醫科大學附屬協和醫院就診并行胃癌新輔助化療的胃腺癌患者為研究對象。本研究共納入患者112例,其中男78例,女34例;年齡42～75歲,平均(54.8±6.7)歲。

1.2 納入與排除標準 (1)納入標準:①新輔助化療后均行R0切除術;②新輔助化療前胃鏡活檢及手術病理資料完備;③體力狀況ECOG評分[6]1～2分;④自愿參加本研究并簽署了知情同意書。(2)排除標準:①不能耐受新輔助化療或未完成治療周期;②曾接受其他胃癌相關藥物治療;③罹患或有其他惡性腫瘤病史;④臨床資料不完整。

1.3 方法 所有患者接受2～4個周期的胃癌新輔助化療(SOX或FOLFOX4方案)。SOX方案:口服替吉奧膠囊(國藥準字H20100135,江蘇恒瑞醫藥股份有限公司)80 mg·m-1·d-1,連續用藥14 d,停藥7 d;靜脈滴注注射用奧沙利鉑[齊魯制藥(海南)有限公司]130 mg/m2(第1天),每個周期用藥1次;21 d為1個周期。FOLFOX4方案:亞葉酸鈣(國藥準字H20093344,珠海同益制藥有限公司)200 mg/m2(第1天),每個周期用藥1次;靜脈滴注氟尿嘧啶注射液(天津金耀藥業有限公司)400 mg/m2(第1天和第2天),每個周期用藥2次;靜脈滴注注射用奧沙利鉑85 mg/m2(第1天),每個周期用藥1次;14 d為1個周期。采用免疫組化技術檢測胃鏡活檢和手術病理中Ki-67、TEM1及ERCC1的表達,陽性和陰性對照分別采用陽性對照染色片和PBS替代一抗,通過顯微鏡400倍視野記錄陽性腫瘤細胞所占比例,隨機選擇5個有效視野取平均值。

1.4 評價標準 (1)采用尤登指數界定Ki-67表達的高低,根據胃鏡活檢和手術病理Ki-67陽性細胞所占比例的差值判斷升高、降低或不變[7]。(2)以周圍非腫瘤區細胞TEM1表達作參考,腫瘤區細胞TEM1無表達記為0級,表達較非腫瘤區弱記為1級,表達與非腫瘤區等同記為2級,表達較非腫瘤區強記為3級[8]。(3)胃癌新輔助化療效果:無退縮證據記為0級,殘存腫瘤細胞占>2/3瘤床面積記為1a級,殘存腫瘤細胞占1/3～2/3瘤床面積記為1b級,殘存腫瘤細胞占<1/3瘤床面積記為2級,未見殘存腫瘤細胞記為3級;0～1b級相當于無效,2～3級相當于有效,3級相當于病理完全緩解[9]。

1.5 統計學分析 應用SPSS 23.0統計軟件,采用AUC判斷Ki-67的預測價值,采用尤登指數最大值界定最佳cutoff值,分類變量以數字(%)表示,單因素分析采用χ2檢驗,采用Logistic回歸模型分析Ki-67、TEM1及ERCC1表達等因素對胃癌新輔助化療效果的影響,均為雙側,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Ki-67、TEM1及ERCC1表達的判讀 本研究共納入患者112例,胃癌新輔助化療病理完全緩解16例(14.29%),有效68例(60.71%),無效44例(39.29%)。Ki-67陽性細胞所占比例與胃癌新輔助化療效果呈正相關,以Ki-67陽性細胞所占比例作為胃癌新輔助化療效果預測的指標,所得AUC為0.828;采用尤登指數評估最佳cutoff值的敏感性和特異性(0.734,0.720),得出最佳cutoff值為62.5%;Ki-67≤62.5%判讀為低表達, Ki-67>62.5%判讀為高表達。TEM1表達陰性,TEM1表達陽性。ERCC1不表達或陽性細胞所占比例≤10%判讀為陰性,陽性細胞所占比例>10%判讀為陽性。見圖1、2。

圖2 Ki-67陽性細胞所占比例與胃癌新輔助化療效果關系的ROC曲線

2.2 胃癌新輔助化療效果影響因素單因素分析 單因素分析結果顯示,胃癌新輔助化療有效率分別與T分期、臨床分期、Ki-67表達、Ki-67變化、TEM1表達、ERCC1表達明顯相關(P<0.05),胃癌新輔助化療病理完全緩解率分別與T分期、Ki-67表達、ERCC1表達明顯相關(P<0.05)。見表1。

表1 胃癌新輔助化療效果影響因素單因素分析 例(%)

2.3 胃癌新輔助化療效果影響因素多元Logistic回歸分析 多元Logistic回歸分析結果顯示,Ki-67表達、Ki-67變化、TEM1表達、ERCC1表達均是胃癌新輔助化療有效的獨立影響因素(P<0.05),Ki-67表達、ERCC1表達均是胃癌新輔助化療病理完全緩解的獨立影響因素(P<0.05)。見表2。

3 討論

在不可切除的局部晚期胃癌患者中,不接受任何化療的中位生存時間約為3～4個月,目前以鉑為基礎的奧沙利鉑新輔助化療方案伴手術治療是不能切除的局部晚期胃癌患者的標準治療方案,患者耐受性良好[10]。然而,預后在很大程度上仍然未知,并且沒有一個生物學參數可以用來評估是否應該對易受反應的患者進行新輔助化療。基于此,本研究試圖探索Ki-67、TEM1及ERCC1表達對胃癌新輔助化療預后預測的臨床價值,以指導患者的個體化治療。

本研究共納入112例行胃癌新輔助化療的胃腺癌患者,新輔助化療后均行R0切除術,依據腫瘤病理學評價標準,新輔助化療病理完全緩解16例(14.29%),有效68例(60.71%),無效44例(39.29%)。單因素分析發現,胃癌新輔助化療有效率分別與T分期、臨床分期、Ki-67表達、Ki-67變化、TEM1表達、ERCC1表達明顯相關,病理完全緩解率分別與T分期、Ki-67表達、ERCC1表達明顯相關。Logistic 回歸模型發現,Ki-67、Ki-67變化、TEM1表達、ERCC1表達均是胃癌新輔助化療有效的獨立影響因素,Ki-67、ERCC1表達均是病理完全緩解的獨立影響因素。

Ki-67蛋白是一種用于評估癌細胞增殖活性的標志物,高Ki-67水平與高分級和晚期癌癥預后不良相關。有研究顯示,Ki-67與局部進展期胃癌患者的影像學和組織病理學結果有一定相關性,并且Ki-67高與預后不良相關[11]。本研究中,Ki-67高表達患者新輔助化療有效率和病理完全緩解率均明顯高于低表達患者,Ki-67表達降低的患者新輔助化療有效率明顯高于表達升高的患者,證實Ki-67高表達是胃癌患者新輔助化療有效和病理完全緩解的獨立預測因子。

TEM1在50株人類腫瘤細胞系和250例人類癌癥臨床標本中表達,包括20種癌癥亞型。此前的報道顯示,TEM1在肉瘤的腫瘤細胞、血管周圍細胞和間質細胞中表達[12]。有報道發現,TEM1在基質成纖維細胞中的表達控制著腫瘤的侵襲性,并且已在不同組織來源的癌細胞中觀察到TEM1過表達,如結腸、乳腺、胰腺和肺等[13]。有研究指出,通過靶向胃癌患者癌相關成纖維細胞中的TEM1表達實現TEM1抑制可能是一種新的治療策略[14]。本研究結果顯示,TEM1表達陰性的患者新輔助化療有效率明顯高于表達陽性的患者,證實TEM1表達陰性是胃癌患者新輔助化療有效的獨立預測因子。

DNA修復是防止錯誤傳播和保持基因組穩定性所必需的。涉及多個分子途徑,其中核苷酸切除修復負責去除DNA片段及其相關的大體積加合物,然后恢復該DNA片段。因此,核苷酸切除修復容量的改變可能對接受鉑基化療的胃癌患者的個體化治療結果起著至關重要的作用。對于鉑基化療,抗腫瘤活性很大程度上取決于癌細胞的DNA修復能力。ERCC1是DNA切除修復的重要基因之一,主要通過修復G2/M期損傷的DNA引起患者出現鉑類耐藥。ERCC1過表達已被證明可以預測胃食管腫瘤對化療的反應,在結直腸癌、肺癌、卵巢癌和膀胱癌中也報道了ERCC1水平預測反應的能力[15]。本研究結果顯示,ERCC1表達陰性的患者新輔助化療有效率和病理完全緩解率均明顯高于陽性患者,ERCC1表達陰性是胃癌患者新輔助化療有效和病理完全緩解的獨立預測因子。

綜上所述,Ki-67、TEM1及ERCC1表達均是胃癌新輔助化療效果的獨立分子生物學預測因子,對胃癌新輔助化療長期預后的判斷具有一定的指導價值。