奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜的初步研究

馬海絨,楊嫣云,魯奕男,李 穎,武 鵬,牛 闖

(寧夏醫科大學口腔醫學院,寧夏 銀川 750004)

復發性口瘡性口炎(RAS)是一種最常見的口腔潰瘍性疾病,發病率為5%～20%[1]。RAS病因至今未明,因而阻礙了對該疾病的有效治療[1]。RAS慢性、可復發性的特點導致在臨床治療時,局部用藥的效果優于全身用藥,因此目前臨床上治療RAS以散劑、噴劑、凝膠劑、膜劑等局部藥物為主,其中口腔膜可將藥物直接作用于潰瘍面而且可以延長了藥物的作用時間[2],相比較而言膜劑材料更容易受到患者青睞[3]。因此,對膜劑的制作和臨床應用至關重要的環節是找到一種具有良好生物相容性、足夠黏附力及合理經濟成本的材料[4]。

殼聚糖(Chitosan,CS)是一種具有生物降解性和生物相容性的多糖,可以作為RAU治療藥物的緩釋載體,有減少疼痛、促進愈合的效果[4]。海藻酸鈉(Sodium alginate,SA)具有價格低廉,良好的生物相容,對環境無害,一定的抑菌作用等特點[5]。單獨西醫治療主要以縮短病程,緩解癥狀,減輕病人的痛苦為主[6]。如長期是使用復發性口腔潰瘍常用藥物如糖皮質激素、非甾體類抗炎藥等,很容易產生毒性反應,并可能誘發或加劇潰瘍局部感染[6]。而在防止復發和控制并發癥、較小副作用方面中藥材料具有優勢[6],因而被廣泛用于口腔潰瘍的治療[5]。醫圣張仲景在《金匱要略·百合狐惑陰陽毒病脈證治》及趙以德《金匱玉函經二注》提出,甘草瀉心湯可治RAS,目前也已有中醫學者采用甘草瀉心湯為主方在臨床上治療復發性阿弗他潰瘍,并取得較為滿意效果[7]。現代藥理研究表明甘草瀉心湯具有增強機體免疫機能、鎮痛、抗炎和抗口腔潰瘍等藥理作用,同時發現甘草瀉心湯可以有利于改善患者的臨床不良癥狀,并且降低患者潰瘍的復發率[8-9]。奧硝唑抑制殺滅絕大多數的厭氧菌,在抗厭氧菌的同時有著較小的毒副作用,而且可有效消除口腔內部細菌造成的潰瘍創傷炎癥反應,為潰瘍的愈合創造有利環境[10]。本研究以SA和CS為主要成分,在其中加入適量的奧硝唑和甘草瀉心湯,探究雙層膜的制備方法,對制備奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜進行體外評價,篩選奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜制備最佳配比。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑與儀器

殼聚糖、海藻酸鈉、奧硝唑(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),冰乙酸(天津市博華通化工產品銷售中心),甘草瀉心湯購于寧夏銀川市古方中醫藥店。

培養板(比克曼生物,中國)、恒溫干燥箱(賽默飛,美國),生物安全柜(賽默飛,美國),磁力攪拌器(Joanlab,中國)。

1.2 方法

1.2.1 膜的制備

單層膜制備:(1)取1mg的CS,加入100mL,濃度為0.5%的冰乙酸水溶液中,磁力攪拌3h,使殼聚糖完全溶解,靜置脫泡后,倒入模具,37℃恒溫干燥,得單層殼聚糖膜。(2)取適量SA,加入90mL純水,磁力攪拌5h使殼聚糖完全溶解,加入10mL甘草瀉心湯和奧硝唑混合液,磁力攪拌1h,靜置脫泡后,37℃恒溫干燥,得單層殼聚糖藥膜。

雙層藥膜制備:取1mg的殼聚糖,加入100mL,濃度為0.5%的冰乙酸水溶液中,磁力攪拌使殼聚糖完全溶解,脫泡后,倒入模具中,37℃恒溫干燥4h成型后,將制備好的海藻酸鈉單層藥膜液倒入模具中,干燥、脫膜,得雙層藥物膜。

雙層膜優化:載藥層膜劑基質比例優化,選擇奧硝唑和海藻酸鈉作為正交因素進行試驗,含奧硝唑含量分別為0.05%、0.1%、0.15%、0.2%,及海藻酸鈉分別為0.1%、0.2%時所制膜的性能差異,選擇最優配比。

1.2.2 膜的體外檢測

1.2.2.1 外觀性狀測定

以雙層貼膜的成膜性、易剝程度、柔韌性、脆性等作為評價指標。以10分制打分,打分越高,膜外觀越好,其中藥物與基質分離打0分。掃描電鏡下觀察膜的形態。

1.2.2.2 溶解性

將100 mL蒸餾水放入燒杯中,37℃水浴恒溫加熱,用玻璃棒攪拌,攪拌速度為30 r/min,將載藥層膜(1 cm×1 cm)放入水浴中并開始計時,記錄膜劑溶解的時間。膜溶解時間越長,其停留在口腔的時間越長,效果越好。

1.2.2.3 成膜性

主要用揭膜完整性來評價。用手揭雙層膜的最大面積的膜重量與總膜重的百分比來表示,比值越大越好。

2 結果

2.1 不同甘油含量1%殼聚糖單層基底膜成膜性能比較

實驗發現,在殼聚糖(CS)中不加甘油,成膜后極易破碎,因此將甘油作為一個因素進行實驗,表1結果顯示含0.1%甘油的CS基底膜更符合實驗所需。

表1 不同甘油含量1%殼聚糖單層基底膜成膜性能比較

2.2 不同含量奧硝唑-甘草瀉心湯-海藻酸鈉藥膜成膜性能比較

海藻酸鈉含量為2%,奧硝唑含量為0.1%時,藥膜的成膜性最佳。詳見表2。實驗中將添加了0.1%甘油的1%(mg/mL)殼聚糖作為基底膜,0.1%奧硝唑-甘草瀉心湯-2%SA制備藥膜,將基底膜與藥膜結合,制備雙層膜。對制備好的雙層藥膜,進行外觀性能、溶解性、成膜性檢測,結果詳見圖1。單純SA膜為白色透明狀,加入奧硝唑后SA單層膜為白色,奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜為淺黃色,能夠看到雙層形態,奧硝唑分布均勻,未見明顯的粉末狀沉積。圖2結果顯示,殼聚糖和海藻酸鈉可以較好的融合,雙層膜不會自動分離。說明溶劑澆鑄法可以作為制備雙層載藥口腔膜劑的方法。見圖2。

圖1 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA膜實物圖

圖2 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜橫切電鏡圖

表2 不同含量奧硝唑-甘草瀉心湯-海藻酸鈉藥膜成膜性能比較

2.3 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜與市面常見潰瘍材料性能對比

與市面上常售的幾種治療口腔潰瘍材料相比,本實驗制備的CS/SA口腔雙層潰瘍膜顏色為淺黃色更容易被接受,柔韌性好,薄厚適宜,溶解性一般,能較長時間維持形態,有利于藥物釋放,利于潰瘍愈合,但黏性一般,如過敏還可及時取出。詳見表3。

表3 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜與市面常見潰瘍材料性能對比

3 討論

目前市面上常見的口腔潰瘍膜藥物主要成分有西藥或者中藥,西藥主要以抗菌和局麻藥為主如醋酸地塞米松、利多卡因;中藥多見蜂膠,暫未見到西藥和中藥混合制備的雙層潰瘍藥膜。

本實驗利用溶劑澆鑄法將添加了0.01%甘油的1%(mg/mL)殼聚糖作為基底膜,0.1%奧硝唑-甘草瀉心湯-2%SA制備藥膜,將基底膜與藥膜結合,成功制備制備處雙層口腔潰瘍膜。

SA為白色或淡黃色粉末,溶于水會形成黏稠狀的溶液,這是因SA含有大量的極性基團,所以其易溶于水,不溶于有機溶劑,因此具有很強的親水性[11]。同時SA的溶液濃度及聚合度的增大又會增加溶液的黏度[11]。甘草瀉心湯的處方中含有甘草、大棗等含糖藥材,因此當奧硝唑含量過高時,成膜后更容易粘貼在模具上,不能較好保持完整的藥膜形態,所以選擇0.01%奧硝唑作為最適藥量。掃描電鏡照片提示殼聚糖和海藻酸鈉可以較好的融合,雙層膜不會自動分離,這可能與殼聚糖帶正電荷而海藻酸鈉帶負電荷有關。

實驗制備的口腔潰瘍膜含有奧硝唑和甘草瀉心湯兩種藥物,奧硝唑在抗菌消炎、促進潰瘍傷口愈合方面效果顯著,但單一奧硝唑口腔粘貼片無法有效預防RAS復發,而甘草瀉心湯具有益氣和胃的功效,適用于口腔潰瘍脾胃虛弱證,因此兩藥聯合可增強治療效果[8-10]。制備的雙層潰瘍膜能以直接貼附持效的方式給藥,保證藥物在潰瘍表面最大程度釋藥,而良好的溶解性又可延長給藥時間進而增強藥物療效。

4 結論

利用溶劑澆鑄法可以制備奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA雙層口腔潰瘍膜,這對于臨床治療口腔潰瘍有一定的臨床價值。