老年急性腦出血并癲癇患者血清中血管生成素樣蛋白4和微小RNA-124蛋白表達水平及其臨床意義

杜志剛,伊紅麗,吳海燕,仇漢誠,崔晨曦,崔貴香

1.首都醫科大學附屬北京地壇醫院順義院區綜合科,北京 101113;2.華北理工大學附屬醫院神經內科;3.首都醫科大學附屬北京地壇醫院神經外科

老年急性腦出血具有高致死率、致殘率[1]。癲癇為發生率較高的急性腦出血并發癥,且癲癇發生率隨患者年齡的增長而上升,隨癲癇病情的發展,可造成患者認知損傷加重,對患者預后影響較大[2-3]。血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)是可保持血管完整性、炎癥信號傳導、調節氧化應激的分泌蛋白[4]。微小RNA-124(miR-124)可參與神經元分化與發育、神經細胞凋亡等過程,對神經元修復具有促進作用[5]。目前關于ANGPTL4、miR-124在老年急性腦出血并發癲癇患者中表達研究報道較少。本文研究分析ANGPTL4、miR-124在老年急性腦出血并發癲癇患者中表達及其意義,以期為老年急性腦出血并發癲癇早期診治提供借鑒。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2020年1月至2022年1月首都醫科大學附屬北京地壇醫院順義院區收治的72例急性腦出血并發癲癇患者為急性腦出血并發癲癇組,另選取同期收治的單純急性腦出血患者50例為急性腦出血組,健康體檢的健康志愿者50例為對照組。本研究經首都醫科大學附屬北京地壇醫院倫理委員會審核通過,患者均已簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準 納入標準:急性腦出血患者均符合《中國腦出血診治指南(2019)》[6]的診斷標準,急性腦出血并發癲癇患者同時符合《中國基因性全面性癲癇臨床診治實踐指南》[7]中的診斷標準,均經顱腦CT或MRI檢查確診;年齡≥65歲。排除標準:合并視力障礙者;合并精神分裂者;近期服用抗抑郁焦慮藥物者;既往存在癲癇史者;腦出血恢復期者。

1.3 研究方法

1.3.1 ANGPTL4水平、miR-124 mRNA表達量檢測 于發病后第2天或體檢當日抽取空腹靜脈血6 mL,以離心半徑3 cm、轉速3 000 r/min離心處理15 min,分離上層血清,-70 ℃保存待檢。通過酶聯免疫吸附(ELISA)法對4組受試者ANGPTL4水平進行檢測,通過實時熒光定量(Real-timePCR)法對血清中的miR-124 mRNA表達量進行檢測,采用Trizol法提取血清總RNA,使用Takara逆轉錄試劑盒將血清中的RNA逆轉錄為cDNA,采用Primer 5.0軟件設計引物序列;反應體系:0.4 μL上反向引物、1 μL cDNA模板、10 μL SYBGreen,加蒸餾水至20 μL。反應條件:95 ℃預變性1 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 31 s,共進行40個循環,采用2-ΔΔCt方法計算出miR-124的表達量。miR-124上游、反向引物序列分別為:5′-GCGGCCGTTCACAGCGGACC-3′、5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′,內參基因U6上游、反向引物序列分別為:5′-CTCGCTTCGGCAGCAVATATACT-3′、5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。

1.3.2 癲癇嚴重程度、認知障礙及出血量評估 將癲癇依照嚴重程度分為輕度(2個月發作1次或更少),中度(1個月發作<4次,2個月發作>1次),重度(1個月發作≥4次)。通過簡易智能狀態量表(MMSE量表)對患者認知障礙情況進行評分,以分值≤27分為存在認知障礙。采用CT對顱內出血量進行檢查計算,其中大出血為出血量≥30 mL,小出血為出血量<30 mL。

2 結果

2.1 各組臨床資料比較 3組性別、年齡、體重指數對比,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。見表1。

表1 各組臨床資料對比

2.2 各組間ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表達的比較 與對照組比較,急性腦出血組、急性腦出血并發癲癇組ANGPTL4水平較高,miR-124 mRNA表達量較低,差異有統計學意義(P<0.05);與急性腦出血組比較,急性腦出血并發癲癇組ANGPTL4水平較高,miR-124mRNA表達量較低,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表達對比

2.3 ANGPTL4、miR-124與老年急性腦出血并發癲癇臨床特征的關系 ANGPTL4與癲癇嚴重程度、認知障礙、腦卒中史呈正相關,miR-124與癲癇嚴重程度、認知障礙、腦卒中史呈負相關,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 ANGPTL4、miR-124與老年急性腦出血并發癲癇臨床特征的關系分析

2.4 影響急性腦出血并發癲癇危險因素的logistic回歸分析 以老年急性腦出血是否發生癲癇為因變量(0=否,1=是),以認知障礙、腦卒中史、ANGPTL4、miR-124為自變量,建立logistic回歸模型,多因素結果顯示認知障礙、腦卒中史、ANGPTL4、miR-124為影響老年急性腦出血發生癲癇的危險因素。見表4。

表4 影響急性腦出血并發癲癇的logistic回歸分析

2.5 ROC曲線分析ANGPTL4、miR-124對老年急性腦出血并發癲癇的預測價值 ROC曲線顯示,2項聯合檢測對老年急性腦出血并發癲癇的預測價值高于ANGPTL4、miR-124單項檢測預測,差異有統計學意義(P<0.05)。見表5、圖1。

注:ANGPTL4為血管生成素樣蛋白4;miR-124為微小RNA-124。

表5 ROC曲線分析ANGPTL4、miR-124對老年急性腦出血并發癲癇的預測價值

3 討論

老年急性腦出血可造成線粒體功能障礙、神經膠質細胞損傷、神經遞質失衡,進而對神經細胞間電傳導過程造成了影響,導致中樞神經系統興奮性變化,最終發生癲癇。癲癇作為老年急性腦出血常見并發癥,可造成患者腦部神經元損傷加重、缺氧時間延長,進而影響其預后[8-10]。

ANGPTL4是一種主要在脂肪組織、肝臟中所存在的分泌蛋白,可調節脂肪代謝,減少脂質吸收,同時可促進血管形成、調節血管通透性、參與炎癥反應,在心腦血管疾病、動脈粥樣硬化發展過程中均有參與[11-13]。本研究發現老年急性腦出血并發癲癇患者中ANGPTL4水平較高,且與患者癲癇嚴重程度、認知障礙、腦卒中史相關。研究[14-16]發現,ANGPTL4在腦血管疾病中多呈高表達,可增加腦出血患者病灶區域血管通透性,加劇腦水腫、神經炎癥發展,繼而引發神經元損傷,促進急性腦出血并發癲癇患者病情發展;同時ANGPTL4可造成腦灌注量減少,加重腦缺血性損傷、認知能力下降,其結果與本研究結果相似。表明,老年急性腦出血并發癲癇患者中ANGPTL4異常表達,其與老年急性腦出血并發癲癇病情發展密切相關。

miR-124作為微小RNA家族成員之一,在個體正常發育、DNA修復、細胞增殖及分化、免疫調節等過程中均發揮著重要作用,在神經系統發育及成熟過程中miR-124呈高表達[17-19]。有研究[20]表明,miR-124可通過調節突觸長時程可塑性增強機體學習能力,認知障礙程度減低;同時miR-124可抑制炎癥因子表達,而炎癥因子可促進神經細胞興奮性及癲癇發作。因此,高表達miR-124可抑制癲癇的發生、發展。本研究發現,老年急性腦出血并發癲癇患者中miR-124呈低表達,低表達的miR-124為老年急性腦出血并發癲癇發生的因素之一,且與癲癇嚴重程度、認知障礙、腦卒中史相關,其結果與董晗等[21]研究結果相似。表明,miR-124與患者臨床特征相關,可參與老年急性腦出血并發癲癇的發生、發展。

綜上所述,老年急性腦出血并發癲癇患者中ANGPTL4高表達,miR-124低表達,ANGPTL4、miR-124與癲癇嚴重程度、認知障礙、腦卒中史相關,兩者均為發生老年急性腦出血并發癲癇的獨立危險因素,且ROC曲線顯示,ANGPTL4、miR-124兩者聯合檢測對老年急性腦出血并發癲癇的預測價值較高。