圍絕經期高脂血癥患者ABCB1基因多態性與阿托伐他汀調脂療效的關系*

劉慧,常宇峰,李靜,王穎

(北京市海淀醫院1.藥劑科;2.心血管內科,北京 100080)

近年來,大量研究提示女性在圍絕經期時雌激素水平降低,引發的脂質及脂蛋白代謝改變被認為是導致心血管疾病發病率升高的主要誘因[1-2]。研究表明,絕經后女性血脂異常的發生率顯著升高,尤其圍絕經期女性的三酰甘油(triacylglycerol,TG)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平顯著升高,故冠心病發生率也會相應增加[3]。合理使用降脂藥物可有效降低血脂水平,其中動脈粥樣硬化心血管疾病一級預防和二級預防的核心策略就提及應用他汀類藥物降低血脂并達到目標值。

他汀類藥物的作用機制為選擇性競爭抑制羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶,臨床上常使用他汀類藥物包括阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀等[4]。SLCO1B1、ABCB1、CYP3A4、CYP3A5等基因可編碼他汀類藥物轉運、代謝通路上的主要蛋白,因此上述基因的多態性可影響其編碼蛋白質的功能,從而產生藥物療效的改變[5]。本研究擬在分析圍絕經期高脂血癥患者ABCB1基因多態性情況,探討基因多態性對阿托伐他汀降脂效果的影響。

1 材料與方法

1.1研究對象 選取2019年1—7月就診于北京市海淀醫院心血管內科門診或住院期間血脂異常的圍絕經期患者,年齡46～55歲。血脂異常標準參考2007年《中國成人血脂異常防治指南》,總膽固醇(TC)≥5.18 mmol·L-1或TG≥1.7 mmol·L-1或LDL-C≥3.37 mmol·L-1或高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterin,HDL-C)<1.04 mmol·L-1。排除標準:用藥前1個月服用可影響血脂水平的他汀類藥物及其他藥物(如糖皮質激素、環孢素、利福平、甲氨蝶呤、CYP強效誘導劑或抑制劑、雌激素、孕激素等)患者,以及肝腎功能異常患者。入選患者共80例,并接受阿托伐他汀(每天20 mg)連續治療8周。本次研究經北京市海淀醫院醫學倫理委員會審核批準,倫理批件號:2019017。

1.2儀器 熒光檢測儀(分子診斷儀)(型號:TL998M,西安天降科技有限公司)。運行軟件系統:個體化藥學服務支持系統 Microseq,版本號20190312;高速冷凍離心機R18型(北京白洋)。

1.3試藥 阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥有限公司,批號:FF7060,規格:每片20 mg);NH4Cl預處理液(北京華夏時代基因有限公司,批號:20190106);耀金保(核酸純化試劑):用于在進行SNP分析前對血液、組織標本的保存,北京華夏時代基因有限公司,批號:20190106。耀金分(DNA測序反應通用試劑盒):用于熒光染色原位雜交及染色體核型分析、化學藥物用藥指導時的樣本分析,北京華夏時代基因有限公司,批號:1320190106、6220190106。

1.4血脂的測定 分別在患者服藥前以及服藥8周后,空腹采集全血標本,測定TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,評價調脂療效。

1.5基因檢測 抽取靜脈全血(無需空腹)2～3 mL,采集于一次性真空抽血管(DTA抗凝紫帽管)中,并于4 ℃低溫保存,保存時間≤2 h。將真空采血管逐一編號并標注患者姓名,依次加入預處理液100 μL、 滅菌注射用水900 μL、血樣200 μL,搖勻,靜置至澄清。將澄清后樣本以3 000 r·min-1離心5 min(r=13.5 cm)。取出離心后樣本,吸棄上清液,并用滅菌注射用水洗凈沉淀的白細胞。在提取好的白細胞中加入純化試劑60 μL,振勻,使白細胞全部溶解。取白細胞樣本1.5 μL,加至相應測序反應試劑中,放入熒光檢測儀中,用等位基因特異性-聚合酶鏈式反應 (AS-PCR) 檢測ABCB1(2677T>G),ABCB1(3435C>T)基因位點,分析基因多態性與ATV降脂療效的相關性。

1.6統計學方法 采用SPSS 19.0版統計軟件進行統計學分析。通過χ2檢驗分析ABCB1(2677T>G)和ABCB1(3435C>T)各基因型的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,P>0.05表明具有群體代表性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1患者基本情況 納入研究的患者平均年齡為(50.62±2.05)歲 。其中合并高血壓15例(18.8%),合并糖尿病12例(15.0%),合并冠心病8例(10.0%),TC≥5.18 mmol·L-1者36例(45.0%),TG≥1.7 mmol·L-1者38例(47.5%),LDL-C≥3.37 mmol·L-1者32例(40.0%),HDL-C<1.04 mmol·L-1者44例(55.0%)。

2.2用藥前后4項血脂指標的比較 對服用阿托伐他汀前后4項的血脂水平的差值進行正態性檢驗,結果見表1。用藥前后血漿 TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平的差值服從正態分布。與用藥前比較,用藥后血漿 TC、TG 、LDL-C 水平降低,HDL-C 水平升高,與用藥前比較均差異有統計學意義 (均P<0.01)。

表1 服用阿托伐他汀前后血脂指標比較

2.3ABCB1基因型分布頻率及阿托伐他汀治療前后ABCB1攜帶者組間血脂變化比較 入組患者均進行ABCB1(2677T>G,ABCB1(3435C>T)基因檢測,基因分布頻率見表2。結果顯示ABCB1(2677T>G),ABCB1(3435C>T)基因突變頻率分別為60%和62%,各基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),表明本研究人群各基因型已達到遺傳平衡,具有群體代表性。

表2 ABCB1基因型分布頻率及不同ABCB1攜帶者治療前后血脂變化比較

入組患者治療前后各脂質變化率結果見表2。結果表明,不同基因型患者血清TG、TC和HDL-C血脂的變化率差異無統計學意義;本研究結果顯示ABCB1(2677GG)基因型的攜帶者相比ABCB1(2677TT)基因型患者對血脂LDL-C呈現顯著降低,提示ABCB1(2677GG)基因型可能提高對阿托伐他汀的轉運能力,服用常規劑量阿托伐他汀時,在作用位點能夠達到有效濃度,有效降低血脂。

3 討論

1994年世界衛生組織提出:婦女絕經前后包括約從 45 歲開始直至停經后1年內時期,常見于45～55 歲。女性在絕經前雌激素可提高血管彈性和降低血壓,并有效調節血脂,使血管不容易發生硬化和阻塞,但步入圍絕經期,其卵巢的功能會出現衰退而導致體內雌激素水平下降,導致體內脂質及脂蛋白的代謝紊亂處于加速期,常易引起高脂血癥的發生[3]。雌激素可以使LDL-C、TG保持低水平,使 HDL-C 保持高水平。研究表明,雌二醇與肝細胞受體結合能夠激活影響脂質代謝的酶,通過上調 LDL-C 受體促進殘余 LDL-C 的吸收,加速肝臟膽固醇向膽汁酸的轉化,從而使LDL水平下降[6];但是雌二醇減少會導致HDL-C水平下降,從而增加冠心病的發病風險[7]。且血脂異常管理的指南建議考慮將他汀類藥物用于冠心病風險升高的婦女的一級預防[8],阿托伐他汀作為臨床常用的降脂藥物之一,在不同人群中應用阿托伐他汀降脂效果存在顯著差異,尤其是影響其轉運和代謝的編碼基因SLCO1B1、ABCB1等,可導致其降脂效果的出現個體化差異[5]。

ABCB1基因又稱多耐藥基因(multidrug resistance,MDR1),其編碼產物為腸道外排轉運體P-糖蛋白(P-gp)[9]。該轉運體可主動降低藥物的吸收,故是影響藥物在體內生物利用度的重要原因之一。ABCB1基因發生突變,可造成P-gp功能缺陷或表達異常,從而干擾藥物在體內的代謝,導致他汀類藥物降脂療效的差異;同時其也與使用后的不良反應發生相關[10]。ABCB1基因在不同種族人群中至少超過50個單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)[11]。有研究表明在不同的種族人群中有3種SNPs被認為能夠影響ABCB1基因功能,其編碼區域包括:C1236T、G2677T/A和 C3435T[12]。

目前ABCB1(G2677T/A)基因多態性與他汀類藥物降脂療效是否相關存在分歧。部分研究提示ABCB1(G2677A/T)多態性與他汀類藥物降脂作用無明顯相關[13-14],同時一項薈萃分析的結果提示不能認為ABCB1(G2677T/A)的多態性與血脂水平及他汀類藥物降脂效應有關[15]。而一些研究則發現ABCB1(G2677A/T)多態性與他汀類藥物降脂作用有關。THOMPSON等[16]研究表明在使用阿托伐他汀治療患者中,檢測到ABCB1(2677G>T/A)位點GG型患者其體內LDL-C水平的下降程度較TT型患者高3%,而TC水平的下降程度比TT型患者高2%。一項針對中國人群的研究發現攜帶ABCB1(2677GG)型患者口服阿托伐他汀后,其體內LDL-C的調節作用明顯高于同一位點的其他基因型患者[17]。本次研究的結果與上述報道一致,表現為ABCB1(2677GG)基因型的攜帶者相比ABCB1(2677TT)基因型患者對血脂LDL-C呈現顯著降低。這也提示在圍絕經期高脂血癥患者中ABCB1(2677GG)基因型提高對阿托伐他汀的轉運能力,故在正常口服劑量時,該作用位點就可達到有效的血藥濃度,發揮降脂功能。

有研究發現ABCB1(3435 C>T)基因型對阿托伐他汀藥效的作用研究結果不盡相同。ALZOUBI等[18]研究表明在ABCB1(2677 G>T/A)和(3435 C>T)多態性中,攜帶TT基因型患者在經阿托伐他汀治療后,其體內LDL-C水平相較于其他基因型患者更低。SHABANA等[19]研究顯示攜帶ABCB1(3435TT)純合子的患者,其體內HDL-C的基線水平和接受治療后水平顯著高于野生型CC的患者。上述結論均提示ABCB1(3435 C>T)突變可增強阿托伐他汀的降脂作用。同時有研究表明,在女性高脂血癥患者中,ABCB1(3435 C>T)與阿托伐他汀的調脂療效相關。在服用阿托伐他汀后,攜帶CC基因型患者的LDL-C下降幅度最小,而各基因型HDL-C升高的幅度依次為CC>CT>TT[13]。我國也有研究發現,ABCB1(3435 C>T)基因多態性與阿托伐他汀血藥濃度及其療效無關[20]。在本研究中發現,服用阿托伐他汀的圍絕經期高脂血癥患者中,其ABCB1(3435 C>T)位點的基因多態性與阿托伐他汀降脂療效無關。

阿托伐他汀對在圍絕經期高脂血癥患者降脂作用已得到肯定,但由于基因多態性等多種因素的影響,從而造成個體化差異。本研究由于研究樣本量偏少,且為單中心研究,故不能代表全部圍絕經期高脂血癥人群,后期還需更多的樣本量結合近一步的臨床研究進行驗證。