全自動婦科分泌物分析系統在陰道微生態評價中的應用效果分析*

黃宇飛,馬 芬,劉 琛,張咪咪

1.廣東省深圳市光明區婦幼保健院檢驗科,廣東深圳 518107;2.中國科學院大學深圳醫院(光明)檢驗科,廣東深圳 518107

正常情況下,陰道內存在著多種微生物,與宿主陰道環境間互相依賴、制約,形成動態生態平衡,而在體內外各種因素的影響下,陰道微生態的平衡被打破、菌群發生變化,可引發各種陰道炎癥。白帶異常、陰道瘙癢、灼痛、異味等為陰道炎的主要臨床表現[1]。陰道炎常見類型為外陰真菌性陰道炎、細菌性陰道炎(BV)、滴蟲性陰道炎、需氧菌性陰道炎等,也可能存在合并感染,臨床常通過陰道分泌物檢查進行診斷。隨著臨床檢驗技術的發展,婦科分泌物檢測趨向全自動化,全自動婦科分泌物分析系統可對有形成分進行自動鏡檢,并使用干化學法對pH值、過氧化氫、乳酸、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、白細胞酯酶(LE)等進行檢測來反映陰道微生態的改變。而通過形態學和功能學綜合評價陰道微生態能提升陰道炎的檢出率[2-3]。本研究通過對全自動婦科分泌物分析系統與鏡檢法進行比較,評估全自動婦科分泌物分析系統在陰道微生態評價中的應用價值,以期為臨床診治陰道炎提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年9月至2022年4月于深圳市光明區婦幼保健院和中國科學院大學深圳醫院進行全自動婦科分泌物檢查的307例患者為研究對象,年齡19～48歲,平均(32.24±4.52)歲。研究對象自述有陰道白帶增多或異常、陰道瘙癢等癥狀。排除血性標本,經期和絕經期女性。研究對象檢查前1周內無口服和陰道用藥,檢查前3 d未使用陰道潤滑劑、無性生活及陰道灌洗。兩所醫院醫學倫理委員會批準本研究且患者知情同意。

1.2儀器與試劑 迪瑞GMD-S600全自動婦科分泌物分析系統及其配套試劑、日本奧林巴斯CX-43生物顯微鏡、上海三愛思試劑有限公司的pH值為3.8～5.4的精密試紙、珠海貝索生物技術有限公司的革蘭染色液。

1.3方法 由婦科門診醫生以清潔、干燥的專用無菌拭子于陰道后穹窿采集兩份標本,一份分泌物置入專用的稀釋液試管中用于全自動婦科分泌物分析系統檢測,另一份直接放置于試管中用于濕片鏡檢和干片革蘭染色鏡檢(立即送檢)。檢驗人員將標本制成厚薄適宜的涂片,理想濃度為25～30個細胞/高倍鏡,細胞分布均勻。使用顯微鏡進行濕片鏡檢,具體操作嚴格參照《全國臨床檢驗操作規范(第4版)》[4]執行。待涂片干燥固定后,進行革蘭染色,再次鏡檢。人工鏡檢由兩名具有豐富鏡檢經驗的檢驗人員獨立判定,結果不一致時由第3人進行鏡檢,取3人中2人一致的結果作為最終結果。

1.4判斷標準

1.4.1鏡檢法 鏡檢法評估標準:(1)白細胞、桿菌、上皮細胞用于陰道清潔度判斷。Ⅰ度為有大量的桿菌及滿視野上皮細胞,無球菌,白細胞0～5個/高倍鏡;Ⅱ度為中等量桿菌及1/2視野上皮細胞,白細胞>5～15個/高倍鏡;Ⅲ度為少量桿菌及上皮細胞,較多球菌,白細胞>15～30個/高倍鏡;Ⅳ度為未發現桿菌及上皮細胞,大量球菌,白細胞>30個/高倍鏡。將Ⅰ度和Ⅱ度判定為陰性,Ⅲ度和Ⅳ度判定為陽性。(2)真菌、滴蟲陽性為分別查見真菌孢子或菌絲、滴蟲。(3)白細胞陽性為白細胞>15個/高倍鏡。(4)乳酸桿菌陽性為乳酸桿菌樣革蘭陽性桿菌≥6個/高倍鏡。

BV的診斷標準:(1)革蘭染色鏡檢法下,采用Nugent評分判定(0～3分為陰道菌群正常,>3～6分為中間型,>6分為BV陽性)[5]。(2)濕片鏡檢法在陰道分泌物中見到線索細胞且符合下述條件中任意兩項者,可診斷為BV[6]。①稀薄均質的陰道分泌物,黏附于陰道壁但易于擦拭;②陰道分泌物pH值大于4.5;③氨氣味試驗陽性。

1.4.2全自動婦科分泌物分析系統 自動鏡檢為對有形成分自動識別、分類。陰道清潔度判斷標準同鏡檢法。干化學法評估標準:(1)LE為+～+++表示陽性,提示有炎癥。(2)N-乙酰氨基己糖苷酶(NAG)為(±)和(+)表示陽性;陽性且pH值≥4.8提示滴蟲性陰道炎;陽性且pH值≤4.6提示真菌性陰道炎。(3)唾液酸苷酶或脯氨酸氨基肽酶為(±)和(+)表示陽性,提示BV。(4)過氧化氫或乳酸為(-)或(±)表示有大量或中量乳酸桿菌存在,過氧化氫或乳酸(+)提示陰道菌群失調。

1.5觀察指標 比較全自動婦科分泌物分析系統、革蘭染色鏡檢、濕片鏡檢的檢測結果,比較清潔度結果、對病原體檢出情況以及準確性。以革蘭染色鏡檢為金標準,對濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統在外陰真菌性陰道炎、BV、滴蟲性陰道炎中的診斷效能進行分析。

1.6統計學處理 采用SPSS23.0軟件進行統計分析,計數資料以例數或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.13種方法檢測陰道清潔度結果的比較 革蘭染色鏡檢、濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統檢測陰道清潔度的結果比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3種方法檢測陰道清潔度結果的比較

2.23種方法病原微生物檢出率比較 全自動婦科分泌物分析系統對白細胞、念珠菌、線索細胞、滴蟲、乳酸桿菌的檢出率均高于革蘭染色鏡檢和濕片鏡檢,但兩兩組間對比,白細胞、念珠菌、線索細胞及乳酸桿菌檢出率比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。全自動婦科分泌物分析系統與革蘭染色鏡檢、全自動婦科分泌物分析系統與濕片鏡檢的滴蟲檢出率比較,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3種方法病原微生物檢出率比較[n(%)]

2.3濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對外陰真菌性陰道炎的診斷效能 以革蘭染色鏡檢為金標準,全自動婦科分泌物分析系統對外陰真菌性陰道炎的檢出率高于革蘭染色鏡檢,而濕片鏡檢檢出率低于革蘭染色鏡檢。全自動婦科分泌物分析系統診斷外陰真菌性陰道炎的靈敏度、符合率、陰性預測值、誤診率較濕片鏡檢高,而特異度、陽性預測值、漏診率較濕片鏡檢低。見表3～4。

表3 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對外陰真菌性陰道炎的判定結果比較(n)

表4 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對外陰真菌性陰道炎的診斷效能分析(%)

2.4濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對BV的診斷效能 以革蘭染色鏡檢為金標準,全自動婦科分泌物分析系統對BV的檢出率高于革蘭染色鏡檢,而濕片鏡檢檢出率低于革蘭染色鏡檢。全自動婦科分泌物分析系統診斷BV的靈敏度、符合率、陰性預測值、誤診率較濕片鏡檢高,而特異度、陽性預測值、漏診率較濕片鏡檢低。見表5～6。

表5 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對BV的判定結果比較(n)

表6 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對BV的診斷效能分析(%)

2.5濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對滴蟲性陰道炎的診斷效能 以革蘭染色鏡檢為金標準,全自動婦科分泌物分析系統對滴蟲性陰道炎的檢出率高于革蘭染色鏡檢,而濕片鏡檢的檢出率與革蘭染色鏡檢相同。全自動婦科分泌物分析系統診斷滴蟲性陰道炎的特異度、符合率、陽性預測值較濕片鏡檢法低,而誤診率較濕片鏡檢高,二者靈敏度、陰性預測值、漏診率持平。見表7～8。

表7 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對滴蟲性陰道炎的判定結果比較(n)

表8 濕片鏡檢和全自動婦科分泌物分析系統對滴蟲性陰道炎的診斷效能分析(%)

3 討 論

在臨床陰道微生態檢測中,全自動婦科分泌物分析系統可對有形成分進行自動鏡檢,攝制圖片,與干化學法共同評價陰道微生態狀況。有研究表明,顯微鏡濕片鏡檢與干化學法聯合檢測具有一定互補性,可提高陰道炎的檢出率,避免漏檢[7-9]。

本研究結果顯示,全自動婦科分泌物分析系統、革蘭染色鏡檢和濕片鏡檢3種方法對白細胞、念珠菌、線索細胞及乳酸桿菌檢出率比較,差異均無統計學意義(P>0.05),而對滴蟲檢出率比較,差異有統計學意義(P<0.05),值得進一步探究。檢測LE的活性可間接反映白細胞的含量[10],彌補了白細胞被破壞所導致的鏡下漏檢,但其活性與被破壞的多個核細胞數量及破壞程度有關,當白細胞膜破壞不嚴重時可導致LE試驗出現假陰性。可見鏡檢和全自動分析系統的LE檢測各有優點和局限性,互補性高,因此結合全自動鏡檢和干化學法的結果,可提高白細胞的檢出率。乳酸桿菌形態各異,與革蘭陽性棒狀桿菌在鏡檢下不易區分,通過檢測過氧化氫和乳酸間接反映乳酸桿菌的數量可避免部分漏檢和誤檢。有研究指出,5%的乳酸桿菌不產生過氧化氫,造成過氧化氫的檢出率低于常規鏡檢染色[11],而全自動婦科分泌物分析系統通過自動鏡檢及過氧化氫、乳酸聯合檢測判斷乳酸桿菌,提高了檢出率。

擬桿菌和普雷沃菌產生的唾液酸苷酶和加德納菌、動彎桿菌產生的脯氨酸氨基肽酶是BV、外陰真菌性陰道炎的間接反映指標[12]。本研究以革蘭染色鏡檢結果為金標準,將全自動婦科分泌物分析系統與濕片鏡檢對BV的診斷效能進行比較,前者的靈敏度較高、特異度較低,符合率較高、陽性預測值較低、陰性預測值較高、誤診率較高、漏診率較低。需要注意,血性物質在脯氨酸氨基肽酶作用下產生胺類物質,使干化學法檢測結果出現假陽性[13],而全自動婦科分泌物分析系統采用自動鏡檢與唾液酸苷酶及脯氨酸氨基肽酶兩種酶聯合診斷BV,有效彌補單一酶檢測應用缺陷以及血性標本的檢測問題。

本研究中全自動婦科分泌物分析系統與濕片鏡檢對外陰真菌性陰道炎的診斷效能,與二者對BV的診斷效能相近。NAG為白色念珠菌和滴蟲分泌的特異性酶,二者的判別是根據NAG結合pH值,pH值對其判定影響大,使特異度受到影響,本研究結果與王巖等[14]研究的外陰真菌性陰道炎患者存在陰道pH值升高的觀點相符。分析原因為外陰真菌性陰道炎合并BV、需氧菌性陰道炎等導致pH值升高。另一原因為外陰真菌性陰道炎患者以非產過氧化氫為主的革蘭陽性桿菌為優勢菌,產過氧化氫的能力顯著下降導致乳酸桿菌對致病菌抑制能力減弱影響陰道內環境。NAG的判斷受不同念珠菌的影響,白色念珠菌和熱帶念珠菌產生NAG,而光滑念珠菌和克柔念珠菌等不產生NAG[15],而鏡檢中受細胞碎片、小紅細胞、鏡下白細胞和上皮細胞過多的影響導致結果不準確。結合以上原因,全自動婦科分泌物分析系統聯合鏡檢和NAG診斷外陰陰道假絲酵母菌,互補性高,有效提高靈敏度和特異度。

在307例標本中,革蘭染色鏡檢和濕片鏡檢均檢出滴蟲7例,符合率為100.00%,與鄧晶榮等[16]研究的革蘭染色對滴蟲的檢出率略低于生理鹽水法的結果不同,可能原因為本研究中滴蟲檢出例數較少且鏡檢由2～3名檢驗人員進行判定,提高了符合率。本研究中,全自動婦科分泌物分析系統與濕片鏡檢對滴蟲性陰道炎的診斷效能比較,特異度較低、符合率較低、陽性預測值較低,誤診率較高。滴蟲的活動性使得滴蟲在鏡下更容易檢出,而全自動婦科分泌物分析系統不能取代濕片鏡檢。有研究表明,干化學法可不受分泌物標本溫度和離體時間的影響,可以彌補鏡檢在溫度低和離體時間長時滴蟲檢出率下降的欠缺[17]。因此,全自動婦科分泌物分析系統自動鏡檢與干化學法中依據NAG和pH值判定滴蟲性陰道炎的結果不一致時,應進行人工復檢,以鏡檢結果為金標準,綜合分析,提高符合率。

綜上所述,全自動婦科分泌物分析系統操作簡便、快速,通過形態學和功能學綜合評價陰道微生態,與鏡檢結果的一致性較好,省時省力,且降低主觀因素的影響,為陰道炎的診斷、分型、治療及預后評價提供有效的臨床依據。當自動鏡檢和干化學法結果不一致時,特別是在滴蟲的判斷上,要進行人工鏡下復檢,保證臨床檢測結果的準確性。