HPLC 法同時測定曲安奈德苯海拉明水楊酸酊中三種有效成分的含量

陳霞飛，簡淑娟，林鳳屏，劉麗婷，歐陽珠，黎曉敏

惠州市食品藥品檢驗所，廣東 惠州 516001

曲安奈德苯海拉明水楊酸酊是惠州市皮膚病防治研究所生產的醫院制劑，與藥廠制劑比較，具有密切結合臨床、適應性強、治療作用明確、專科特色強、副作用少等優點，其主要成分是醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明、水楊酸，具有抗菌消炎和抗過敏等作用。臨床主要用于治療神經性皮炎、慢性濕疹、結節性癢疹、皮膚淀粉樣變及疥瘡結節等。由于原制劑的質量標準中只有高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德的含量，而鹽酸苯海拉明、水楊酸采用的是滴定法，其中鹽酸苯海拉明的測定中使用了大量的易制毒化學品三氯甲烷。三氯甲烷有毒，為可疑致癌物。為了實現對該制劑質量的更好把控，通過查閱相關文獻資料［1-9］，本研究建立了高效液相色譜法同時檢測醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸含量的方法，有利于更好地控制該制劑的質量和減少有毒有害溶劑的使用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（安捷倫科技公司,型號：1260）；高效液相色譜儀（日本島津公司,型號：LC-20A）；電子天平（梅特勒-托利多集團，型號：XS105DU）；電熱干燥箱（德國賓德集團，型號：ED-53）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100066-200807，含量：99.9%）；醋酸曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100125-202007，含量：98.4%）；水楊酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100106-202106，含量：99.8%）；色譜甲醇（默克股份有限公司）；水（超純水）；鹽酸苯海拉明水楊酸酊（惠州市皮膚病防治研究所，批號：202210201、202210211、202210251、202210271、202210281 和202211011，規格：60 mL/瓶；含醋酸曲安奈德0.000 5 g/mL、鹽酸苯海拉明0.01 g/mL、水楊酸0.01 g/mL）。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為資生堂CAPCELL PAK C18 MG Ⅱ（250 mm×4.60 mm，5 μm）；以甲醇-水（每1 000 mL水中加三乙胺7 mL，磷酸調節pH 值為7.2）（70∶30）為流動相；檢測波長為240 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；紫外檢測器；進樣量為20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸苯海拉明對照品39.96 mg，置10 mL 量瓶中，加水振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液①。精密稱取醋酸曲安奈德對照品10.47 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液②。精密稱取水楊酸對照品40.56 mg，置10 mL 量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液③。精密吸取上述三種對照品貯備液各5 mL置同一200 mL 量瓶中，加甲醇-水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取供試品1 mL，置100 mL 量瓶中，加甲醇-水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

按制劑處方工藝制備不含醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸的空白制劑。按供試品溶液制備方法稀釋，即得陰性對照溶液。

2.5 系統適用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液按“2.1”項下色譜條件分別進行測定，在相同保留時間位置上，陰性對照溶液未檢測出水楊酸、鹽酸苯海拉明和醋酸曲安奈德峰。各色譜峰分離度均符合規定，結果表明，輔料對樣品含量測定無干擾，專屬性良好。結果見圖1。

圖1 HPLC色譜圖：A.混合對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液

2.6 線性關系考察

取“2.2”項下的對照品溶液，分別進樣5 μL、10 μL、20 μL、40 μL 和60 μL，記錄色譜圖，以進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線，醋酸曲安奈德回歸方程為：y=1 930.770 3x+1.705 6（r=1.000 0）；鹽酸苯海拉明回歸方程為：y=82.867 3x+2.423 6（r=0.999 9）；水楊酸回歸方程為：y=131 0.109 6x+227.513 8（r=0.996 4）。結果表明，醋酸曲安奈德在0.026～0.309 μg、鹽酸苯海拉明在0.499～5.988 μg、水楊酸在0.506～6.072 μg 范圍均呈現良好的線性關系。

2.7 重復性試驗

取樣品6 份（批號為202210211），按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖。醋酸曲安奈德含量為99.92%，RSD 為0.55%；鹽酸苯海拉明含量為100.50%，RSD 為0.53%；水楊酸含量為100.70%，RSD 為0.38%。結果表明本方法重復性良好。

2.8 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24、48 h 測定峰面積。醋酸曲安奈德、水楊酸、鹽酸苯海拉明峰面積的RSD 分別為0.66%、0.55%、0.73%。結果表明三種組分在48 h 內穩定性良好。

2.9 耐用性試驗

按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，分別用不同廠家的色譜柱（廠家：資生堂，填料：CAPCELL PAK C18 MG II，規格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱號：A4AD 09543；廠家：安捷倫，填料：ZORBAX Eclipse XDB-C18，規 格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱 號：USNH023988，廠家：月旭，填料：Xtimate C18，規格：250 mm×4.6 mm，5 μm，柱號：411502491）和不同的液相色譜儀進行測定，記錄色譜圖，三種組分的含量均在90.0%～110.0% 范圍，醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明、水楊酸RSD 分別為0.31%，0.24%，0.32%。結果表明，此方法耐用性良好。

2.10 回收率試驗

取樣品9 份（批號為202210211），每份精密吸取供試品0.5 mL，分別按標示含量的80%、100%、120%加入混合對照品溶液，每個濃度平行制備3 份，按“2.3”項下的方法制備回收率供試品溶液，并按“2.1”項下的色譜條件進行測定，計算回收率，結果如表1 所示。

表1 回收率試驗測定結果（n=9）

結果，醋酸曲安奈德平均回收率為99.8%，RSD 為1.03%；鹽酸苯海拉明平均回收率為99.2%，RSD 為1.18%；水楊酸平均回收率為103.5%，RSD為0.81%。

2.11 含量測定

取6 批樣品，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖，結果如表2 所示。

表2 含量測定結果

3 討論

曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的醫療機構制劑標準為采用滴定法分別測定其中水楊酸和鹽酸苯海拉明的含量，方法較為煩瑣。本研究參考相關文獻，采用HPLC 的方法同時測定醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和水楊酸的含量，該方法快捷、靈敏，專屬性好，方法準確度高，可為藥品質量的全面評價提供試驗依據。

本實驗過程中比較了不同品牌的色譜柱，還比較了不同的液相色譜儀，同時參考《中國藥典》2020 年版二部鹽酸苯海拉明原料含量測定的色譜條件，確定了鹽酸苯海拉明和水楊酸均可采用240 nm 的吸收波長進行測定。原標準中醋酸曲安奈德的稀釋溶劑采用的是流動相，實驗過程中發現運用流動相稀釋樣品容易降解，后來考察了用甲醇-水（70∶30）作為稀釋劑，發現樣品穩定性良好。

本實驗共測定6 個不同批號的曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的含量，結果均在標準規定的限度范圍內。說明應用HPLC 法測定曲安奈德苯海拉明水楊酸酊的含量是適用可行的，其分析準確，高效，專屬性強，耐用性好，操作簡便快速，靈敏度高，可有效地控制該產品的質量。